子宫内膜异位症患者异位内膜组织中miR-556-3p、VEGF表达变化

易金玲，沈艳丽，冯文广，刘雁林，朱君

(新疆医科大学第五附属医院，乌鲁木齐830011)



子宫内膜异位症患者异位内膜组织中miR-556-3p、VEGF表达变化

易金玲，沈艳丽，冯文广，刘雁林，朱君

(新疆医科大学第五附属医院，乌鲁木齐830011)

摘要：目的观察子宫内膜异位症(EM)患者异位内膜组织中miRNA(miR)-556-3p、血管内皮生长因子(VEGF)表达变化，分析miR-556-3p与VEGS表达的相关性。方法 选择EM患者36例为病例组，将病例组中卵巢异位内膜组织、腹膜异位内膜组织、在位内膜组织进一步分为病例1、2、3组。另选20例非子宫内膜病变患者，取正常子宫内膜组织为对照组。采用real-time PCR法检测miR-556-3p，Western blotting法检测VEGF蛋白，分析二者表达的相关性。结果病例1组、对照组miR-556-3p相对表达量高于病例2组、病例3组，病例3组miR-556-3p相对表达量高于病例2组(P均<0.05)。各组内增生期及分泌期内膜组织中miR-556-3p相对表达量差异无统计学意义。病例2组VEGF相对表达量高于其余3组，其中病例1组、病例3组VEGF相对表达量高于对照组(P均<0.05)。病例2、3组miR-556-3p与VEGF表达呈负相关关系(r分别为-1.687、-1.105，P均<0.05)。结论 EM患者异位内膜组织中miR-556-3p呈低表达、VEGF呈高表达，以腹膜异位内膜组织中表达变化最为明显。miR-556-3p、VEGF在EM患者腹膜异位内膜组织及在位内膜组织中表达呈负相关关系，二者可能与EM的发生发展有关。

关键词：子宫内膜异位症；微小RNA；微小RNA-556-3p；血管内皮生长因子

子宫内膜异位症(EM)是妇科常见的良性疾病，以痛经、月经异常、不孕等为主要症状。EM形成与发展的机制尚未完全阐明，大量研究发现EM发病与新生血管生成密切相关[1,2]。血管内皮生长因子(VEGF)是重要的血管生成因子，可直接作用于内皮细胞促使新生血管生成。miRNA是一种内生的非编码小RNA，可通过切断mRNA分子或抑制其翻译从而调控靶基因表达。研究[3]指出，miRNA表达模式异常导致的下游靶基因表达异常可能是EM发病的重要因素。本研究观察了EM患者卵巢、腹膜异位内膜组织和在位内膜组织中miRNA(miR)-556-3p、VEGF的表达变化，并分析miR-556-3p、VEGF表达的相关性。

1资料与方法

1.1 临床资料我院妇科2014年1~12月收治的Ⅲ、Ⅳ期EM患者36例(病例组)，年龄(31.3±3.9)岁；孕次0次6例、1次19例、≥2次11例；均经腹腔镜手术或开腹手术观察及病理检查确诊，且同时出现卵巢及腹膜异位病灶；将病例组卵巢异位内膜组织、腹膜异位内膜组织、在位内膜组织进一步分为病例1、2、3组。选择同期收治的非子宫内膜病变患者20例，年龄(30.9±3.6)岁，孕次0次2例、1次11例、≥2次7例，取正常子宫内膜组织为对照组。患者月经周期规律，排除合并心血管系统及其他系统疾病患者、3个月内使用性激素治疗的患者、6个月内有妊娠和哺乳史者。病例组与对照组一般资料具有可比性。

1.2子宫内膜组织中miR-556-3p检测采用real-time PCR法。所有操作严格按说明书进行，并以U6为内参照。PCR反应条件：50 ℃ 2 min，95 ℃ 10 min，45个循环；95 ℃变性15 s，60 ℃退火及延伸30 s。实验重复3次，取均值，以2-ΔΔCt表示miR-556-3p相对表达量。

1.3子宫内膜组织中VEGF检测采用Western blotting法。先以RIPA裂解液提取组织蛋白，依次经制胶、上样、电泳、转膜、封闭等操作后，加入一抗(1∶1 000兔抗人VEGF和1∶1 000兔抗人GADPH)4 ℃孵育过夜，摇床摇动。TBST液清洗3次，每次5 min，后滴加经辣根过氧化物酶标记过的二抗，室温孵育1 h，摇床摇动。清洗，显色。以GADPH为内参照，用GIS1000分析软件对目的条带进行灰度值扫描分析，计算VEGF相对表达量。

2结果

2.1各组miR-556-3p、VEGF表达比较病例1组、对照组子宫内膜组织中miR-556-3p相对表达量高于病例2组、病例3组，病例3组miR-556-3p相对表达量高于病例2组(P均<0.05)。病例2组子宫内膜组织中VEGF相对表达量高于其余3组，其中病例1组、病例3组VEGF相对表达量高于对照组(P均<0.05)。各组内增生期及分泌期内膜组织中miR-556-3p相对表达量差异无统计学意义(P均>0.05)。见表1、2。

表1　各组子宫内膜组织中miR-556-3p、

注：与对照组相比，*P<0.05；与病例3组相比，#P<0.05；与病例1组相比，△P<0.05。

表2　各组增生期及分泌期子宫内膜组织中

2.2病例组子宫内膜组织中miR-556-3p与VEGF表达的相关性病例2、3组子宫内膜组织中miR-556-3p与VEGF表达呈负相关关系(r分别为-1.687、-1.105，P均<0.05)。

3讨论

EM为育龄妇女常见疾病，发病率为10%~15%[4]。虽然EM为良性疾病，但其有多种与恶性肿瘤类似的生物学行为[5]。EM的发生机制尚未明确，目前子宫内膜种植学说得到学者们广泛认可，但无法合理解释EM为何仅发生在一部分人群中。学者们经过进一步研究[6]认为EM发生是遗传因素、免疫因素、血管因素、雌激素及其受体等多因素共同作用的结果。近年来研究[7,8]表明，miRNA表达异常所致的表观遗传学紊乱可能是EM发生发展的重要机制。

miRNA是真核生物中广泛存在的一类单链小分子RNA，可调节细胞增殖、分化、凋亡等病理生理过程。研究表明，miRNA可能作为癌基因或抑癌基因参与多种肿瘤的发生和发展[9]，其中miR-556-3p参与新生血管生成，VEGF是其靶基因[10]。本研究结果显示，不同月经周期的子宫内膜组织中miR-556-3p表达差异无统计学意义；病例1组、对照组子宫内膜组织中miR-556-3p相对表达量高于病例2组、病例3组，病例3组miR-556-3p相对表达量高于病例2组，提示miR-556-3p低表达可能与EM的形成有关，与张铭等[10]的结果一致。本研究中病例1组与对照组miR-556-3p表达差异无统计学意义，可能与组织细胞类型不同有关。

新生血管生成作为子宫内膜种植成功的重要条件，也被认为是EM形成的病理基础。研究发现，血管形成相关调控因子如VEGF、肿瘤坏死因子(TNF)等在EM的发生发展中发挥重要作用[11]。VEGF诱导的血管生成有利于月经期子宫内膜的修复。本研究结果显示，病例2组子宫内膜组织中VEGF相对表达量高于其余3组，其中病例1组、病例3组VEGF相对表达量高于对照组，提示VEGF对EM的发生有促进作用，且在腹膜异位病灶作用更强[12,13]，这可能与腹膜异位内膜组织生长需要更多新生血管和营养物质有关。推测VEGF对EM的促进作用与下列因素有关[14]：促进新生血管生长和内膜细胞增殖；增加微血管通透性，使游离内膜组织获得更多的营养物质。

本研究还发现，病例2、3组子宫内膜组织中miR-556-3p与VEGF表达呈负相关关系，而病例1组中两者表达无相关性，出现这种情况的原因可能是一个生物学过程受到多个miRNA调控，不同的miRNA之间形成正负反馈共同调节疾病进展过程[10]。我们通过miRNA靶基因预测软件Targetscan6.2分析后发现，VEGF可能是miR-556-3p的靶基因。miR-556-3p低表达可能通过抑制相关mRNA降解或增加其翻译，上调VEGF表达，使新生血管生成增多，从而导致EM的形成和发展。

综上所述，EM患者异位内膜组织中miR-556-3p呈低表达、VEGF呈高表达，以腹膜异位内膜组织中表达变化最为明显。miR-556-3p的异常表达导致其靶基因VEGF表达增高可能是EM的重要发病机制。

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(收稿日期：2015-11-09)

中图分类号：R711.52

文献标志码：B

文章编号：1002-266X(2016)07-0050-03

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2016.07.018

基金项目：新疆维吾尔自治区自然科学基金资助项目(2014211C123)。