破壁前后的松花粉质量鉴别研究

阮伟万 陈前进



破壁前后的松花粉质量鉴别研究

阮伟万 陈前进

【摘要】目的 对破壁前后的松花粉进行质量鉴别研究。方法 采用物理方法观察对比破壁前后的松花粉颜色、气味、味道、状态以及用电镜扫描显微状况，采用化学方法检测破壁前后松花粉的总黄酮、总多糖。结果 用物理法水试及显微鉴别对比两者明显特征，可以区别破壁前后的产品，化学方法检测结果也能明显区别破壁前后的产品质量。结论 普通消费者可用简单的水试法快速鉴别破壁前后的松花粉，而对于专业的研究人士则可以通过显微及化学成分测定法进行鉴别，更具科学性。

【关键词】松花粉；质量鉴别；破壁；黄酮；多糖；显微鉴别

广东省台山市中医院，广东江门 529200

松花粉为松科植物马尾松、油松或同属数种植物的干燥花粉。春季花刚开时，采摘花穗，晒干，收集花粉，除去杂质所得。松花粉营养物质非常丰富，含有人类所需的各种氨基酸、维生素物质以及丰富的多糖类、黄酮化合物、甾醇等，同时，也是目前市场上唯一可以食用的非蜂源性天然花粉。与其他种类来源的植物花粉相比，松花粉口感好，气味也有淡淡的松子香味，且易于接受。松花粉从几千年开始，就是人类最喜爱的、老少皆宜的益智长寿型特殊营养食品之一。中国卫生管理部门在早期也确认了松花粉为新资源食品。据相关研究报道[1]，松花粉在增强人体抵抗力、改善心脑血管疾病、保护肝脏、促进人体皮肤新陈代谢、抗衰老、抗氧化等方面具有显著的效果。因此，松花粉的市场需求逐年增大。但是由于松花粉特有的结构，功效营养物质被包含在坚实的细胞壁内，要充分利用松花粉的所有营养成分，必须将其外壁破坏。由于破壁需要特殊的设备以及破壁带来成本的增加，某些不法厂商因此常常以未破壁产品冒充已破壁产品，欺骗消费者。对于普通消费者来说，在仅有的非专业知识情况下，如何准确判别两者，非常重要。笔者从宏观、微观方法及特征成分含量检测对破壁前后的松花粉进行鉴别研究，主要目的为普通消费者和中药专业鉴定工作者提供一种更全面的鉴别方法。

1 仪器与试剂

1.1 试剂 松花粉，购自广州中药饮片厂。芦丁：中国药品生物制品检定所，批号100080-201409；D-无水葡萄糖：中国药品生物制品检定所，批号110833-201205；水合氯醛，苯酚、硫酸、亚硝酸钠、硝酸铝等均为分析纯。

1.2 仪器 紫外-可见分光光度计：岛津UV-1240；天平（精确度为0.1 mg）；生物显微镜，带扫描功能：奥林巴斯CX41RF；BRAND移液枪。

2 实验方法

2.1 物理鉴别[2]外形：取样品，平摊于白色底板上目测观察；颜色：取样品，平摊于白色底板上目测观察；性状：将花粉团在手里轻轻搓；气味：取样品，鼻闻口尝；水试：取样品，轻轻放入一杯纯水中，观察记录现象。

2.2 显微鉴别 样品加水，配制成1:100的溶液，于漩涡混合器上振荡均匀。取干净载玻片，用移液枪吸取少量液体，加1滴10%的水合氯醛于酒精灯上加热透化，然后加甘油适量盖上盖玻片，置光学显微镜下观察。

2.3 化学鉴别

2.3.1 多糖测定[3]标准曲线的制备：分别精密量取0.1 mg/ml的无水葡萄糖对照品溶液0.1、0.3、0.5、0.7、0.9 ml，置10 ml具塞试管中，用纯水补足至余量2.0 ml。然后分别加水补至2.0 ml，精密加入5%苯酚溶液l ml（现配），摇匀，迅速精密加入98%浓硫酸5 ml，摇匀，显色放置10 min，于40 ℃水浴中保温15 min，取出后置冰水中冷却至室温，以相应的试剂为空白对照，按照紫外-可见分光光度法，在490 nm的波长处测定吸光度值，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线。

2.3.2 样品的测定 取待测样品1.0 g，精密称定，加乙醚100 ml，加热回流1 h，静置，放冷，小心弃去乙醚液，残渣置水浴上挥尽乙醚。加入100 ml 80%乙醇，100 ℃加热回流1 h，离心过滤，离心沉淀与滤渣及过滤器用热80%乙醇30 ml分次洗涤，最终药渣连同滤纸置250 ml圆烧瓶中，加入纯水150 ml，100 ℃回流提取2 h。提取完后滤过，用少量热水洗涤过滤器，合并滤液与洗液，放冷，用纯水定容至250 ml，摇匀后适量稀释，精密量取稀释液l ml，置具塞试管中，加水1.0 ml，按照标准曲线项下方法，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中含无水葡萄糖的重量（mg)，计算，即得。

2.3.3 黄酮的测定[4]标准曲线的制备：精密量取0.2 mg/ml的芦丁对照品溶液0、1、2、3、4、5、6 ml，分别置于25 ml容量瓶中，各加水至6.0 ml，加5%亚硝酸钠溶液1 ml，混匀，放置6 min后再各加10%硝酸铝溶液1 ml，摇匀，放置6 min加1%氢氧化钠试液10 ml，最后加水至刻度，摇匀，放置15 min。于510 nm处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，对照品浓度（mg/ml）为横坐标，绘制标准曲线，并求出标准线性方程。

样品黄酮含量的测定：精密量取1.0 ml样品溶液（若试样中的黄酮浓度高则应适当稀释再取1.0 ml用于显色测定），置25 ml容量瓶中，按照标准曲线制备项下方法，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中含芦丁的重量（μg），计算，即得。

3 结果

3.1 物理鉴别 外观性状对比结果见表1。破壁前颜色浅黄色，破壁后浅较深，偏褐色。半年期存放的与刚破壁后的样品，颜色无区别。破壁前样品为浅黄色细粉末，手搓有滑腻感，较为松散，在白板上流动性比较好；而破壁后的松花粉稍有黏附性，易吸潮，不能飞散。在气味方面，破壁前样品有松花粉特有的香味，和松子的味道比较相似。但是，自然条件下存放半年以上产品稍有酸败味；破壁后产品气味较浓，破壁后半年以上产品酸败味较浓烈。水试对比结果见表1。破壁产品悬浮水中，搅拌后现象更明显，部分沉于水底。破壁前产品则飘浮水上面、搅拌悬浮很少、停止搅拌后立即浮于水面。

表1 物理鉴别结果

3.2 显微鉴别结果 结果显示，破壁前后在放大500倍情况下，有非常明显的区别。未破壁的自然松花粉是类圆形，细胞体两端各上附着1个膨大气囊。经破壁后的样品，只可见细胞碎片（图1～3）。

图1 破壁前（500倍）

图2 破壁前（1000倍）

图3 破壁后（500倍）

3.3 化学鉴别 从表2可以看出，破壁前后多糖及黄酮含量差别明显。同样的产品，在不同存放时期内，含量会稍有变化，主要是由于产品暴露在空气中时，有效成分发生氧化分解反应，含量随之而降低。

表2 黄酮、多糖检测结果

4 讨论

因为破壁只是用物理或化学破坏细胞壁的过程，对其他成分则无影响，所以破壁前后的的松花粉在营养物质种类是一致的，但是在人体生物利用度上有所区别。有关松花粉的研究揭示，天然松花粉进行破壁处理后，能使其中的营养成分得以充分、快速释放。所以，破壁后的松花粉营养吸收更加快捷，吸收率更高。破壁松花粉由于细胞壁被完全破碎，细胞内部的有效成分多糖黄酮等暴露，其颜色较细胞壁表面深，所以破壁粉的颜色偏淡黄褐色。

由于颜色、气味、外观主观能动性大，专业人士在没有对比的情况下，很难做出明确的判断。但是，用水试法鉴别：破壁后的松花粉放入水中搅拌后基本悬浮在水中；而没有破壁的松花粉放入水中搅拌后静置1～5 min后会漂浮在水面上，在水的中间及底部基本没有花粉。根据这一特点，普通消费者可轻易的鉴别出破壁与否。造成这种现象发生的主要原因是破壁同时将松花粉细胞两端的气囊破碎缘故。而专业的研究人士则可以通过检测有效成分或显微鉴别，来区分鉴别两者。

松花粉中活性多糖是近年来的研究重点，其主要具有抗肿瘤、抗氧化等功能。松花粉中黄酮类化合物同样含量丰富，主要为黄酮、黄酮醇类、二氢黄酮醇类和少量黄院醇类，此类化合物具有抗炎、抗氧化等作用。所以，通过检测这两者成分，可以更确切了解破壁前后的产品质量。

参考文献

[1] 邓倩,童珊珊,丁丽霞.松花粉活性成分分析方法及药理作用的研究进展[J].药物分析杂志,2012,32(1):173-178.

[2] 肖安菊.松花粉掺伪鉴别[J].黄石理工学院学报,2010,26(2): 40-42.

[3] 魏凯.泰山松花粉多糖的提取及其免疫增强功能的研究[D].泰安:山东农业大学,2011:12-60.

[4] 陈胜发,彭修娟.松花粉中总黄酮含量测定方法的研究[J].科技视界,2014(16):32-32.

作者简介：阮伟万（1980.10-），主管中药师。E-mail：rww8010@163.com

【中图分类号】R927.11

【文献标志码】A 【DOI】10.12010/j.issn.1673-5846.2016.03.004