指纹脱落细胞的STR检验

郑和成，刘程静，胡利平，张秀峰（.楚雄州公安局，云南楚雄675000；.昆明医科大学法医学院，云南昆明650500）



指纹脱落细胞的STR检验

郑和成1，刘程静1，胡利平2，张秀峰2
（1.楚雄州公安局，云南楚雄675000；2.昆明医科大学法医学院，云南昆明650500）

关键词：法医遗传学；DNA指纹法；短串联重复序列；指纹；脱落细胞

现场遗留的帽子、口罩、衣服、手套等生物学检材，一般含有较多脱落细胞，DNA检验比较容易，然而对于指、掌纹短时间接触部位，由于所含脱落细胞少，且部分细胞核DNA容易降解，STR分型成功率较低。本研究对指纹脱落细胞分别应用Chelex－100、QIAamp DNA Investigator Kit、MagAttract M48 DNA Manual Kit磁珠及直接扩增法进行STR检验，并比较分析。

1　材料与方法

1.1样本来源

取100片洁净载玻片，25名志愿者每人分别在4块载玻片上按1枚清晰指纹样本，提取志愿者口腔拭子作为对照。将指纹脱落细胞检材分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ四组，每组25份，涵盖所有志愿者的指纹脱落细胞。

1.2DNA提取

Ⅰ组：剪取0.2 cm×0.2 cm纱布2块，采用两步擦拭法进行提取，置于1.5mL离心管中，加入20μL 5% Chelex－100、2μL 10mg/mL蛋白酶K，56℃消化过夜，100℃加热8min，离心后取上清液。

Ⅱ组：剪取0.5 cm×0.5 cm纱布2块，采用两步擦拭法进行提取，置于1.5mL离心管中，按照QIAamp DNA Investigator Kit说明书提取DNA模板，洗脱体积为20μL。

Ⅲ组：剪取0.5 cm×0.5 cm纱布2块，采用两步擦拭法进行提取，置于1.5mL离心管中，按照MagAttract M48 DNA Manual Kit磁珠法提取DNA模板，洗脱体积为20μL。

Ⅳ组：剪取0.5 cm长纱布丝一根，用蒸馏水浸湿后擦拭指纹部位，置于200μL扩增管中。

1.3扩增和检测

扩增采用Identifiler®Plus试剂盒（美国AB公司），使用10μL体系，按照说明书中的试剂配比，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组每管试剂混合物均为9μL，模板均为1μL，Ⅳ组每管试剂混合物均为9μL，四组均用28个循环进行扩增。使用3130型遗传分析仪（美国AB公司）进行检测，GeneMapper®ID 3.2软件进行STR分析。

2　结果与讨论

检验结果表明，Ⅰ组检出7例可供比对的STR分型，检出率为28%；Ⅱ组检出6例，检出率为24%；Ⅲ组检出7例，检出率为28%；Ⅳ组检出19例，检出率为76%。

通过对指纹脱落细胞DNA进行四种方法的STR检验，结果显示，直接扩增法的检出率明显高于其他三种。利用Chelex－100法提取指纹脱落细胞DNA，虽然操作方法相对便捷，且没有造成DNA的损失，但加入22μL液体后就稀释了DNA的浓度，使得进入扩增体系的DNA模板含量减少，从而检出率也就降低。利用QIAamp DNA Investigator Kit法、MagAttract M48 DNA Manual Kit磁珠法检验，优点是可以清除较多杂质，提取到较纯的DNA模板，但在提取过程中还存在DNA的损失和稀释，造成指纹脱落细胞STR分型检出率低。利用直接扩增法检验指纹脱落细胞DNA，可以最大程度地保留核DNA的含有量，提高指纹脱落细胞STR分型的检出率，同时检验方法更加简单快捷。

直接扩增法检验指纹脱落细胞DNA在检出率和快捷程度上都具有较强的优势，然而本研究针对的是没有污染和杂质的理想指纹检材，因此在实际检案中遇到可能留有嫌疑人指、掌纹的部位和工具等，且污染程度低、杂质少时，可采用直接扩增法检验脱落细胞的STR基因型。对于杂质较多的指、掌纹脱落细胞的DNA检验，最好采用另三种方法，这些方法能够去除一定的杂质，特别是QIAamp DNA Investigator Kit法、MagAttract M48 DNA Manual Kit磁珠法，不但能够去除杂质，还可得到相对较纯、浓度较高的DNA模板，有利于含杂质较多的指、掌纹脱落细胞DNA的检验。

（本文编辑：李成涛）

·教育与管理·

收稿日期：（2015－04－07）

通信作者：张秀峰，男，博士，讲师，主要从事法医物证学教学、科研和鉴定；E－mail：191797683＠qq.com

作者简介：郑和成（1982—），男，主检法医师，主要从事法医DNA检验研究；E－mail：769398851＠qq.com

基金项目：云南省教育厅科学研究基金项目（2014Y180）；云南省科技厅－昆明医科大学应用基础研究联合专项基金（2014FZ005）

文章编号：1004－5619（2016）02－0136－01

中图分类号：DF795.2

文献标志码：B

doi：10.3969/j.issn.1004－5619.2016.02.015