复发性外阴阴道假丝酵母菌病（RVVC）的病原学分析

刘九菊

甘肃省华亭县妇幼保健院 甘肃省华亭县 744100

复发性外阴阴道假丝酵母菌病（RVVC）的病原学分析

刘九菊

甘肃省华亭县妇幼保健院 甘肃省华亭县 744100

复发性外阴阴道假丝酵母菌病(recurrent vulvovaginal candidiasis，RVVC)指确诊的VVC 患者经过治疗，临床症状和体征消失，真菌学检查阴性后又出现症状，且真菌学检查阳性或在1年内反复发作4次或4次以上[1]。RVVC病因复杂，复发的因素较多，病情非常顽固，临床治疗很棘手。为此，我们对120例 RVVC患者阴道分泌物做直接涂片和革兰氏染色镜检的同时，进行科玛嘉假丝酵母菌显色培养鉴定。

复发性；外阴阴道；假丝酵母菌病

1 材料与方法

1.1 标本来源

2012年6月～2014年6月来自本院妇科门诊的RVVC患者120例，年龄24～48岁；标本采集前要求患者3d内无阴道冲洗、放药和性生活史，采用灭菌一次性女性拭子自阴道内壁或宫颈口处旋转采集分泌物2份，放入无菌干燥试管中，立即保温送检，1份做培养，1份做涂片染色镜检。

1.2 实验材料

仪器日立OLYMPUS 普通光学显微镜。革兰氏染色购自台湾贝索公司，API 20C AUX 酵母菌鉴定卡购自法国生物梅里埃公司，科玛嘉（CHROMagar）假丝酵母菌显色培养基干粉购自郑州博赛生物科技有限公司，由本院细菌室严格按说明配制成7cm直径平板。

1.3 实验方法

培养方法及鉴定标准：分泌物分段划线接种于科玛嘉假丝酵母菌显色培养基，35℃培养24～48小时后观察结果，培养7天不生长为阴性。根据培养基上菌落产生的颜色差异和菌落特征来进行假丝酵母菌株鉴定。显色不确定的菌株，应用法国梅里埃API20C CAX条鉴定复核。

涂片染色法：取分泌物放于滴加2滴的生理盐水法玻片上，涂片混匀至模糊透过字迹为宜，在显微镜10×40倍镜下找到圆形的芽生孢子及菌丝判定为假丝酵母菌阳性。若盐水涂片镜检阴性，待涂片自然干燥、固定后，进一步行革兰氏染色法，在显微镜10×100倍镜下确诊，涂片和革兰氏染色下都未找到孢子及菌丝方可判定假丝酵母菌阴性 。

2 结果

本组120例RVVC患者标本涂片染色法阳性为99份，阳性率为82.5%，培养法阳性为112份，阳性率为93%，共分离出假丝酵母菌116株，其中白色假丝酵母菌78株占67.2%，光滑假丝酵母菌14株占12.1%，热带假丝酵母菌12株占10.3%，克柔假丝酵母菌6株占5.2%，近平假丝酵母菌4株占3.5%。

3 讨论

近年来随着RVVC中非白假丝酵母菌VVC[2]的上升，涂片法已不能满足临床诊治的需要，需进行阴道分泌物假丝酵母菌的培养鉴定。涂片法只能说明假丝酵母菌感染，而不能确定是具体哪个种的假丝酵母菌，如近年来分离率上升的光滑假丝酵母菌只有酵母相而无菌丝相，没有菌丝，只有芽生胞子,显微镜下很难鉴别,只有靠培养才能确诊,光滑假丝酵母菌对碱性的环境PH耐受力高于白色假丝酵母菌 ,虽然较白色假丝酵母菌毒力小,但是对唑类抗真菌药 ,尤其是咪唑类常表现为耐药,容易反复发作 ,迁延发展成RVVC。分泌物真菌培养在诊断中意义较大,可提高诊断的准确性。本次我们重点对120例RVVC妇女的病原学分析，共分离出116株假丝酵母菌，其中有4例同时感染2种假丝酵母菌。与2010年调查复发组VVC对比发现，白色假丝酵母菌优势下降，约67.2%，非白假丝酵母菌分离率上升，约32.8%，以光滑假丝酵母菌（12.1%）和热带假丝酵母菌（10.3%）占多数。与国内文献报告[3]相一致。随着唑类药物的应用 ,非白色假丝酵母菌的检出率明显增高。非白色假丝酵母菌比例明显升高可能与其生物学特性、耐药性、耐碱性、无菌丝相等有关。光滑假丝酵母菌没有菌丝 ,只有芽生胞子，显微镜下很难鉴别，容易被漏诊或误诊，目前，直接涂片法已不能满足临床诊治的需要。只有靠培养才能确诊，培养方法是病原体诊断的“金标准”。传统真菌培养鉴定方法由于试验过程繁琐，回报的时间相对较长等原因在基层医院开展较少。近年来新型的科玛嘉显色培养法[4]，因操作简单，结果快速准确，在国内外临床微生物室应用越来越广。科玛嘉假丝酵母菌显色培养基对生殖道等标本进行初代培养，阳性率高于传统的沙氏培养基（SDA），并且对混合感染区别能力更强。

阴道分泌物在直涂片镜检的基础上，同时进行科玛嘉假丝酵母显色培养在诊断中意义更大，两种方法结合应用，可进一步提高标本的阳性率和诊断的准确性。

[1]中华妇产科分会感染性疾病协作组，外阴阴道念珠菌病诊治规范(草案)[J].中华妇产科杂志,2004,39(06):430.

[2]张军民,席丽艳,鲁长明等.医院分离深部真菌菌株流行病学调查和药敏试验研究[J].中华检验医学杂志,2007,30(02):27-29.

[3]王芳,冉崇兰,王薇.复发性外阴阴道假丝酵母菌病的菌种及药敏分析197例[J].实用妇产科杂志,2012,28(06):505-507.

[4]刘辉,李桂珍,刘琳等.科玛嘉真菌显色培养基的临床应用[J].实验与检验医学,2013,31(02):190-191.