脐血干细胞移植对脑卒中后遗症病人康复疗效及血液NSE、NGF水平的影响

唐　映 ，杨万章 ，刘杰文， 冉春风

1．广东省深圳市第九人民医院(深圳 518116)；2．广东省深圳市第六人民医院；3．广东省深圳市第五人民医院



脐血干细胞移植对脑卒中后遗症病人康复疗效及血液NSE、NGF水平的影响

唐映1，杨万章2，刘杰文3， 冉春风1

1．广东省深圳市第九人民医院(深圳 518116)；2．广东省深圳市第六人民医院；3．广东省深圳市第五人民医院

摘要：目的观察脐血干细胞移植移后脑卒中后遗症病人康复疗效及血液神经元特异性烯醇化酶(NSE)、神经营养因子(NGF)的变化。方法将符合纳入标准的脑卒中后遗症病人60例，按随机方法分为治疗组和对照组，各30例。治疗组采用脐血干细胞联合常规康复治疗，对照组单独采用常规康复治疗。观察治疗1月后，Fugl- Meyer运动功能评分及外周血NSE、NGF水平变化。结果两组病人治疗1月后，治疗组Fugl- Meyer评分较对照组明显升高，差异有统计学意义 (P<0．05)，两组病人血液NSE浓度变化不明显，差异无统计学意义(P>0．05)，NGF浓度治疗组较对照组明显升高，差异有统计学意义 (P<0．05)。结论脐血干细胞移植治疗脑卒中后遗症病人有良好疗效。

关键词：脑卒中后遗症；脐血干细胞；神经元特异性烯醇化酶；神经营养因子

随着老龄化人口的增加，脑卒中的发病率越来越高，脑卒中是现代成人致残的第一原因。随着现代医学科技的发展，脐血干细胞应用越来越广泛，开始成为治疗脑卒中后遗症病人的手段之一。神经元特异性烯醇化酶(NSE)是参与糖酵解途径的烯醇化酶，神经元特异性烯醇化酶的水平变化与脑损伤呈正相关，即神经元损伤的范围和程度越重，血液中的神经元特异性烯醇化酶越高[1]。神经营养因子(NGF)是近年来在神经再生、损伤修复领域内的研究热点。脑神经细胞的损伤程度与NGF的表达水平密切相关，NGF水平增高不但能够提高神经元的抗损伤能力，还具有促进损伤神经再生和修复的作用[2]。本研究观察脐血干细胞移植后对脑卒中后遗症病人的康复疗效及NSE、NGF水平变化。

1资料与方法

1．1临床资料回顾分析深圳市第六人民医院2006年6月—2008年1月治疗的脑卒中恢复期病人60例，经医院伦理委员会审核通过，并病人及家属知情同意。病人分别来自中国、美国、英国、加拿大、意大利等国家。所有病人均知情同意及根据其自愿选择治疗方案随机分为治疗组(脐血干细胞移植组)和对照组(常规康复治疗组)，每组30例。两组性别、卒中分型例数、年龄、病程，差异无统计学意义(P>0．05)，具有可比性。详见表1。

表1　两组病人一般情况比较(±s)

1．2入选标准符合1995年全国第四届脑血管病的诊断标准，经颅脑CT或MRI确诊的出血性或缺血性脑卒中初次发病者，均存在肢体运动功能障碍，年龄42岁～70岁，病程超过6个月且在2年之内，意识清楚，生命体征稳定。

1．3排除标准伴有严重心、脑、肾等重要脏器疾病；既往有痴呆、精神病史者。

1．4脐血干细胞来源脐血干细胞由深圳北科生物技术有限公司提供，均为脐血源的神经干细胞。干细胞来自健康分娩孕妇的脐带血，经分离、提取、培养、扩增及向神经干细胞诱导传代(4～6)代。每份细胞数量约1×107/mL～1．5×107/mL，其中约80%间质干细胞，20%神经前体细胞。

1．5方法对照组常规康复治疗方法。常规康复治疗方法包括：运动训练、手功能训练、言语训练、作业治疗、针灸、神经肌肉电刺激、电子生物反馈。脐血干细胞移植组：在常规康复治疗方法上加脐血干细胞移植治疗。脐血干细胞移植方法及疗程：腰椎穿刺脑脊液循环途径(鞘内注射)。每例病人取左侧屈膝位，定位L3/4或L2/3椎间隙，局部消毒，铺洞巾，用2%利多卡因穿刺点局部浸润麻醉，然后用9号腰椎穿刺针进针，由椎间隙进硬膜外腔，再继续进针至有落空感时，抽出针芯，每例病人用2 mL注射器向蛛网膜下腔推注脐血干细胞悬液(1．0～2．0)mL，细胞数(3．0～4．0)×1010/L，术后去枕平卧6 h。每5 d移植1次，4次为1个疗程。

1．6评定指标

1．6．1运动功能评定利用Fugl- Meyer(Fugl- Meyer Assessment， FMA) 运动功能评定量表评定康复治疗前后的运动功能。该方法总分 100 分， <50 分为严重运动障碍(Ⅰ级)； 50分～84 分明显运动障碍(Ⅱ级)； 85分～95 分中度运动障碍(Ⅲ级)；96分～99分轻度运动障碍(Ⅳ级) 。

1．6．2血液NSE 、NGF测定治疗前及治疗30 d后抽取外周血(3～4)mL，分离出血清后置-80℃冰箱保存备用。NSE、NGF均采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测， 试剂盒由美国Rapidbio公司提供。具体操作步骤见试剂盒说明书。

2结果

两组病人治疗1月后，治疗组功能障碍程度， 由治疗前Ⅰ级～Ⅱ级， 进步为Ⅱ级～Ⅲ级， Fugl- Meyer评分较对照组明显升高，差异有统计学意义(P<0．05)。详见表2。

表2　两组病人治疗前后

两组病人血液NSE浓度变化不明显，差异无统计学意义(P>0．05)，NGF浓度治疗组较对照组明显升高，差异有统计学意义 (P<0．05)。详见表3。

表3　两组血液NSE与NGF浓度比较(±s)

3讨论

脑血管病是当代社会中发病率高、病残率高的疾病之一，急性期过后往往遗留有不同程度的口眼歪斜、半身不遂及语言不利等症状，给社会和家庭带来沉重负担，如何降低其致残率，提高生活自理能力，重返家庭和社会。康复医学界不断在探索的难题，除传统药物治疗外，目前最常采取的手段是现代康复与传统康复的综合应用，包括运动、言语训练、神经生物电刺激、针灸、理疗等治疗促进神经功能恢复，取得了一定的疗效。脑血管病后遗症期恢复进展缓慢，治疗周期时间长，应用脐血干细胞移植治疗配合常规的康复训练取得了满意的效果。

脐血干细胞来源丰富，采集方便，其中的间充质干细胞， 其体外扩增能力、细胞原始性均高于骨髓， 并可向神经细胞分化。脐血干细胞移植已经应用在白血病、肿瘤、免疫系统缺陷疾病、脑瘫、脑和脊髓损伤的疾病治疗中。大量的动物模型实验证实脐血干细胞移植可以明显改善神经损伤的进展。如脑卒中、肌萎缩、帕金森病、阿尔茨海默病及脊髓损伤，目前已经有诱导脐血干细胞向受损的神经组织分化的临床试验[3]。应用脐血干细胞移植治疗脑出血病人，神经功能得到明显改善，证实急性期脑出血病人的移植优于后遗症病人[4]。急性期病人病情大多尚未平稳，恢复的程度充满希望，很多病人和家属往往在后遗症期才考虑同意脐血干细胞移植手段。

NSE是神经元损伤的特性性标志，NSE 可作为判断脑血管病病人病情严重程度、临床转归及预后的重要生化指标，监测血清或脑脊液中NSE含量可以作为脑组织损伤和水肿程度以及评估神经功能缺损程度的临床判断指标[5-6]。脐血干细胞除了干细胞都具有的自我更新分化潜能以外，还能够分泌某些神经营养因子，神经营养因子是一类对神经元的发育存活和凋亡起重要作用的蛋白质，其成员包括NGF，只有神经营养因子持续存在，才能保证神经节细胞的正常功能[7-9]。

本研究应用脐血干细胞移植治疗脑卒中后遗症病人取得了良好疗效，通过脐血干细胞移植治疗的脑卒中后遗症病人，对比单独接受常规康复训练的病人，神经损伤功能障碍程度下降，Fugl- Meyer评分明显提高。移植后病人外周血NSE变化不明显，考虑神经元细胞的损伤在脑卒中后遗症期已基本稳定，变化不明显，且观察时间短，短期内变化不大。脐血干细胞能促进神经营养因子的分泌，提高神经细胞周围神经营养因子的含量，因此移植后NGF的含量较前是增高的，能保证濒死神经元细胞的营养，支持神经元的营养存活，进一步证实了脐血干细胞移植具有改变中枢神经损伤的局部环境，并帮助损伤的神经再生，还能帮助部分损伤的神经恢复局部功能[10]。

本研究考虑脐血干细胞移植后促进了神经元细胞的分化、再生，加上不断分泌的神经生长因子，加速了神经细胞的生长和修复，加快了神经损伤的恢复，提高了肢体运动功能。这为脑卒中后遗症病人的治疗提供了一种新途径，也为神经系统疾病的治疗提供了新的探索方法。

参考文献：

[1]唐映，胡国恒，苏卓娃，等．接受脐血干细胞移植者血液神经元特异性烯醇化酶和β1-微球蛋白表达的变化[J]．中国组织工程研究与临床康复，2009，13(32)：6223-6226．

[2]章显宝，汪瑛，王震，等．项丛刺针法对缺血性脑卒中后遗症大鼠BDNF、NGF以及神经行为学的影响[J]．上海针灸杂志，2014，33 (2)：181-184．

[3]党建红，金志军．脐血干细胞的生物学特性及其应用[J]．国际妇产科学杂志，2011，38(2)：89-96．

[4]李秀云，张国华．脐血干细胞移植治疗脑出血的疗效分析[J]．中华全科医学，2011，9(11)：1724-1725．

[5]黄招君，李辉华，李名生．神经元特异性烯醇化酶与急性脑梗死的相关性研究[J]．中国医药科学，2013，3(23)：12-14．

[6]宁海波，徐秀芝，林黎明．脑血管病与神经元特异性烯醇化酶的关联[J]．武警后勤学院学报，2014，23(4)：365-368．

[7]Mead B， Logan A， Berry M， et al．Intravitreally transplanted dental pulp stem cells promote neuroprotection and axon regeneration of retinal ganglion cells after optic nerve injury [J]．Invest Ophthalmol Vis Sci， 2013，54(12)：7544-7556．

[8]Johnson TV， Bull ND， Martin KR．Neurotrophic factor delivery as a protective treatment for glaucoma [J]．Exp Eye Res， 2011， 93(2)：196-203．

[9]孙颖健，郑雅娟．干细胞移植治疗视网膜神经节细胞损伤性疾病的研究进展[J]．国际眼科杂志，2015，15(4)：630-632．

[10]陈嫁婧，李治．脐血干细胞治疗脑卒中的作用机制[J]．中国医药指南，2013，11(11)：66-67．

(本文编辑王雅洁)

Effects of Umbilical Cord Blood Stem Cells Transplantation on Rehabilitation，and the Levels of NSE and NGF in Patients with Stroke Sequela

Tang Ying，Yang Wanzhang，Liu Jiewen，Ran Chunfeng

The Ninth People's Hospital of Shenzhen，Shenzhen 518116，Guangdong，China Corresponding Author：Liu Jiewen(The Fifth People’s Hospital of Shenzhen，Shenzhen，Guangdong，China)

Abstract：ObjectiveTo observe the effects of umbilical cord blood (UCB) stem cells transplantation on rehabilitation，and the levels of neuronspecific enolase(NSE) and nerve growth factor (NGF) in patients with stroke sequela．MethodsSixty patients with stroke sequela were randomly divided into two groups：The control group(n=30) treated with routine rehabilitation treatment，and the treatment group(n=30)treated with UCB stem cells transplantation plus routine rehabilitation treatment．After one month of treatment，the Fugl-Meyer motor function score and the levels of peripheral blood NSE，NGF were observed．ResultsAfter one month treatment， the Fugl- Meyer score in treatment group was higher than that in control group(P<0.05).The NGF concentration in treatment group was significantly higher than that in control group(P<0.05)．Conclusion UCB stem cells transplantation has effect on stroke sequela.

Key words：stroke sequela；umbilical cord blood stem cells；neuronspecific enolase；nerve growth factor

(收稿日期：2015-06-10)

中图分类号：R743R255

文献标识码：A

doi：10．3969/j．issn．1672-1349．2016．05．010

文章编号：1672-1349(2016)05-0481-03

通讯作者：刘杰文，E-mail：fengqin361@163．com