胃痛宁片质量标准的研究

黄丽霞

(清远市食品药品检验所，广东 清远 511500)



胃痛宁片质量标准的研究

黄丽霞

(清远市食品药品检验所，广东 清远 511500)

目的 建立胃痛宁片的质量标准。方法 采用TLC法对处方中龙胆粉进行定性鉴别，采用HPLC法测定蒲公英提取物中咖啡酸的质量分数。结果 在薄层色谱中可检出龙胆苦苷的特征斑点；咖啡酸回归方程为A=42.128 6ρ-19.133 2(r2=1)，在6.29～62.9 μg/mL范围内线性关系良好，平均加样回收率为96.4%，RSD为0.28%(n=6)。结论 所建立的定性方法专属性强，定量方法简便、准确，能有效地控制胃痛宁片的质量。

胃痛宁片； 龙胆粉； 龙胆苦苷； 蒲公英提取物； 咖啡酸

胃痛宁片处方由蒲公英提取物、氢氧化铝、甘草干浸膏、龙胆粉、天仙仔浸膏、小茴香油组成，具有清热燥湿、理气和胃、制酸止痛的功效，用于湿热互结所致胃、十二指肠溃疡、胃炎，症见胃脘胀痛、暖气泛酸、食欲不振、大便秘结、小便短赤。其现行质量标准收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂第17册[1]，原质量标准只对其中甘草进行薄层色谱鉴别，无含量测定项，不足以全面控制胃痛宁片的质量。因此，本试验增加了定性鉴别与定量测定，对胃痛宁片质量控制方法研究具有一定的现实意义。

本品处方中含蒲公英提取物、龙胆粉等，其中蒲公英提取物富集了蒲公英药材中的有效成分，含多种活性物质[2]，尤其是咖啡酸质量分数较高，为方中君药，故采用高效液相色谱法(HPLC法)测定其质量分数；龙胆具有清热燥湿的功效，为方中臣药，故采用薄层鉴别法(TLC法)进行定性鉴别。经方法学验证，本文方法简便、准确、重复性较好，能够有效地控制产品的质量。

1 仪器与试药

Agilent Technologies 1200型高效液相色谱仪(美国安捷伦科学仪器有限公司， 包括G1322A脱气机、G1311A四元泵、G1329A自动液体进样器、G1316A柱温箱、G1314B可变波长紫外检测器、Agilent数据分析系统)，Diamonsil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；Sartorius CPA225D型电子分析天平(德国赛多利斯公司)；KQ-300型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司，频率40 kHz，功率300 W)。

龙胆苦苷对照品(批号：110770-201013)、咖啡酸对照品(批号：110885-200102)均购自中国食品药品检定研究院；胃痛宁片(承德新爱民制药有限公司，规格：0.25 g/片，批号：131201、150304、150604)。质量分数测定用甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 龙胆苦苷的TLC鉴别[3]96

2.1.1 对照品溶液的制备 取龙胆苦苷对照品0.010 04 g，置于100 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，即制成每1 mL含龙胆苦苷对照品约1 mg的溶液，作为对照品溶液。

2.1.2 供试品溶液的制备 取本品10片，除去糖衣，研细，取约0.5 g，置250 mL具塞锥形瓶中，加入甲醇50 mL，密塞，超声处理30 min，放冷，滤过，蒸至约1 mL，作为供试品溶液。

2.1.3 阴性对照溶液的制备 按胃痛宁片制备工艺制备缺龙胆粉的片剂，作为阴性对照样品，按“2.1.2”项下方法制备缺龙胆粉的阴性对照溶液，即得。

2.1.4 龙胆粉的TLC鉴别 分别精密吸取上述3种溶液各5 μL，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-水(体积比10∶2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254 nm)下检视；供试品色谱中，在与龙胆苦苷对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰。薄层色谱图见图1。

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1～3.胃痛宁片(批号分别为131201、150304、150604)； 4.龙胆苦苷对照品溶液； 5.阴性对照。

图1 胃痛宁片中龙胆苦苷鉴别的薄层色谱图

Figure 1 TLC identification of gentiopicroside in Weitongning tablets

2.2 咖啡酸质量分数的测定[3]352

2.2.1 色谱条件 色谱柱：Diamonsil C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：甲醇-磷酸盐缓冲液(体积比23∶77)[取NaH2PO41.56 g，加水使溶解成1 000 mL，再加1%(体积分数)H3PO4溶液调pH至3.8[4]]；流速：1.0 mL/min；检测波长：323 nm；柱温：40 ℃；进样量：10 μL。分别精密吸取对照品、供试品、阴性对照溶液10 μL，分别注入液相色谱仪，按上述方法测定，记录色谱图。理论板数按咖啡酸峰计算不低于3 000，各组分峰的分离度符合要求。见图2。

mAUt/min6040200806040200604020002468101214t/min02468101214t/min024681012141ABC1

1.咖啡酸。
图2 对照品(A)、供试品(B)、阴性对照(C)溶液的HPLC色谱图
Figure 2 HPLC chromatograms of control (A),test sample (B) and negative control (C) solution

2.2.2 对照品溶液的制备 精密称取经P2O5减压干燥12 h的咖啡酸对照品12.58 mg，置于50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，得质量浓度为251.6 μg/mL的对照品储备液。精密吸取咖啡酸对照品储备液2 mL,置50 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，得咖啡酸对照品质量浓度为10.064 μg/mL的对照品溶液。

2.2.3 供试品溶液的制备 分别取不同批号的胃痛宁片，除去包衣，研细，过100目筛,取细粉约1.0 g，精密称定，置50 mL具塞锥形瓶中，精密加入甲酸-甲醇(体积比5∶95)10 mL，称定质量，超声处理30 min，取出，放冷，再称定质量，用甲酸-甲醇(体积比5∶95)补足减失的质量，摇匀，离心，取上清液作为供试品溶液。

2.2.4 阴性对照溶液的制备 按胃痛宁片制备工艺制备缺龙胆粉的片剂，作为阴性对照样品，再按“2.2.3”项下方法制成阴性对照溶液。

2.2.5 线性关系的考察 分别精密吸取对照品储备液0.5、1、2、3、4、5 mL，分别置20 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，按“2.2.1”项下色谱条件测定，以峰面积(A)对质量浓度(ρ)绘制标准曲线，得回归方程A=42.128 6ρ-19.133 2，r2=1，胃痛宁片中咖啡酸质量浓度在6.29～62.9 μg/mL范围内与峰面积呈良好线性关系。

2.2.6 精密度试验 精密吸取“2.2.2”项下咖啡酸对照品溶液，连续进样6次，按“2.2.1”项下色谱条件下测定咖啡酸色谱峰峰面积，结果其RSD为0.16%(n=6)，表明本法精密度良好。

2.2.7 重复性试验 分别取同一批胃痛宁片(批号：131201)约1.0 g，精密称定，共6份，按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.2.1”项下色谱条件测定，结果咖啡酸峰面积的RSD值为0.66%(n=6)，表明本方法重复性较好。

2.2.8 稳定性试验 取同一批胃痛宁片(批号：131201)约1.0 g，精密称定，按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，分别于0、1、2、4、8、12 h 进样10 μL，分别按“2.2.1”项下色谱条件测定咖啡酸色谱峰峰面积，结果其RSD值为0.61%(n=6)，表明咖啡酸在12 h内基本稳定。

2.2.9 加样回收率的测定 取已知质量分数的胃痛宁片(质量分数为96.596 7 μg/g)1 g，共6份，精密称定，置50 mL具塞锥形瓶中，分别精密加入咖啡酸对照品储备液(251.6 μg/mL)0.32、0.32、0.40、0.40、0.48、0.48 mL，再分别加入甲酸-甲醇(体积比5∶95)9.68、9.68、9.60、9.60、9.52、9.52 mL，称定质量，超声处理30 min，取出，放冷，再称定质量，用甲酸-甲醇(体积比5∶95)补足减失的质量，摇匀，离心，取上清液。分别按“2.2.1”项下色谱条件测定，按外标法(以峰面积)计算咖啡酸质量分数。得咖啡酸的平均回收率为98.1%，RSD值为0.21%。见表1。

2.2.10 样品的测定 分别取3批胃痛宁片(批号：131201、150304、150604),每批重复操作2次。分别按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.2.1”项下色谱条件测定，按外标法计算咖啡酸的质量分数。结果3批胃痛宁片中咖啡酸质量分数分别为96.597 6、95.246 1、95.658 1 μg/g，RSD值为0.74%。

表1 胃痛宁片中咖啡酸的加样回收率测定结果

Table 1 Recovery results of caffeic acid in Weitongning tablets(n=6)

样品量/g样品中的量/μg加入量/μg测得量/μg回收率/%1.012497.79480.512175.38296.371.006697.23480.512174.89996.461.002996.877100.64194.33896.841.004196.993100.64193.72296.111.016498.181120.768214.30196.151.006897.254120.768213.88396.57平均回收率=96.4%;RSD=0.28%

3 讨论

采用甲醇作为龙胆苦苷的提取溶剂，对比了超声提取[5]与回流提取[3]962种方法的提取效果，二者所测定的指标性成分质量分数基本一致。但考虑到回流操作相对复杂,而且一旦超出规定的回流时间，质量分数损失较大，可能是龙胆苦苷为裂环烯醚萜苷类化合物，受热易分解所致；因此选择了耐用性较好、操作较为简便的超声提取法。

蒲公英属菊科，有清热解毒、利尿健胃的功效。2015年版《中国药典》一部选用咖啡酸作为蒲公英质量分数测定的指标成分，因此本试验选用胃痛宁片中君药蒲公英提取物中的咖啡酸作为定量的指标成分。

由于咖啡酸水溶液不稳定，故本试验分别考察了体积分数70%、100%甲醇，体积分数70%、100%乙醇，甲酸-甲醇(体积比5∶95)、甲酸-乙醇(体积比5∶95)，100%乙醇作为提取溶剂，及超声30、60 min的提取效果，结果显示，以甲酸-甲醇(体积比5∶95)超声30 min的效果最好。

[1] 中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准·中药成方制剂第17册：WS3—B—3287—98 [S].北京:中华人民共和国卫生部药典委员会,1998：198.

[2] 潘见,梁娟,谢慧明,等.蒲公英提取物的质量标准研究[J].时珍国医国药,2008,19(9)：2064-2065.

[3] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：2015年版一部[M].北京:中国医药科技出版社,2015.

[4] 卢宏军.蒲公英药材中咖啡酸的含量测定[J].黑龙江医药,2013,26(3)：370-371.

[5] 路长荣，王卫峰.HPLC法测定胃痛宁片中龙胆苦苷的含量[J].陕西中医,2008,29(7)：891-892.

(责任编辑：刘晓涵)

Study on quality standards of Weitongning tablets

HUANG Lixia

(QingyuanInstituteforDrugControl,Qingyuan511500,China)

Objective To establish the quality standards for Weitongning tablets. Methods TLC was employed for qualitative identification of Gentiana powder,and HPLC was developed for the determination of caffeic acid in Dandelion extract. Results The TLC spots of gentiopicroside were characteristic. It showed a good linearity for caffeic acid within 6.29-62.9 μg/mL (r2=1). The regression equation wasA=42.128 6ρ-19.133 2,and the average recovery was 96.4% (RSD=0.28%,n=6). Conclusion The established method is specific,quantitative,simple and accurate,which could effectively control the preparations' quality.

Weitongning tablets; Gentian powder; Gentiopicroside; Dandelion extract; caffeic acid

2016-04-22

黄丽霞(1975—)，女，学士，副主任药师，从事药品质量控制研究，电话：0763-3111211，Email：826039052@qq.com。

时间：2016-09-30 14:59

http://www.cnki.net/kcms/detail/44.1413.R.20160930.1459.006.html

R284.1

A

1006-8783(2016)05-0593-03

10.16809/j.cnki.1006-8783.2016042201