高效价Rh系统抗体致新生儿溶血病研究

贺坤华，马丽琼，崔会芬，沈　俊，胡映峰

(云南省曲靖市第一人民医院输血科，云南曲靖 655000)



临床研究·

高效价Rh系统抗体致新生儿溶血病研究

贺坤华，马丽琼，崔会芬，沈俊，胡映峰

(云南省曲靖市第一人民医院输血科，云南曲靖 655000)

摘要:目的调查Rh系统抗体引起新生儿溶血病(HDN)患儿的抗体特异性和效价，探讨直接抗人球蛋白试验(DAT)阳性在血清学检测中的重要性。方法对新生儿鉴定母婴血型，做HDN三项试验(DAT、游离抗体试验和放散试验)和间接抗人球蛋白试验(IAT)，并检测母婴红细胞放散液中可致敏新生儿红细胞的血型抗体特异性和效价。结果2例新生儿DAT均呈强阳性；患儿1 IAT阳性、患儿2阴性。2例新生儿均检出高效价致敏红细胞的抗体，分别为：患儿1检出抗-Ce，其中抗-C效价为128，抗-e为64；患儿2检出抗-D，效价为256。结论DAT阳性对确诊新生儿Rh溶血病具有决定性作用，对HDN试验的后续展开分析具有方向性作用。

关键词:新生儿溶血病；直接抗人球蛋白试验；Rh系统；抗-Ce；抗-D

新生儿溶血病(HDN)是因母婴血型不合，母体内免疫球蛋白G(IgG)类血型抗体经胎盘进入胎儿体内引起的免疫性溶血性贫血。Rh系统较ABO系统引起的HDN病情重、进展快，且多见于Rh阴性妇女[1]。在Rh溶血病的发生中，母亲为Rh(D)阴性的患儿中Rh(D)阳性者以抗-D引起的最为多见，其他Rh系统抗体的发生频率由高到低依次为抗-E、抗-c、抗-C和抗-e[2]。为了确诊新生儿Rh溶血病，现将工作中发现的2例高效价抗-Ce、抗-D引起的HDN报道如下。

1资料与方法

1.1一般资料患儿1：患儿母亲22岁，孕2产2，孕39+4周足月，无输血史，第1胎出生后3 d死亡；患儿出生后全身皮肤、巩膜重度黄染伴有严重贫血，经检测患儿系抗-Ce引起的Rh系统HDN。患儿2：患儿母亲20岁，孕2产2，孕40+2周足月，无输血史；患儿出生后全身皮肤、巩膜黄染伴有严重贫血，排除因葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G-6-PD)缺乏引起，经检测患儿系抗-D引起的Rh系统HDN。

1.2仪器与试剂A、B、O 标准红细胞，筛检细胞，谱红细胞(批号：20141021)及2-巯基乙醇均为上海市血液生物医药有限公司生产；ABO、Rh 血型鉴定卡，不规则抗体筛检卡，HDN不完全抗体检测卡均为长春博讯生物有限公司生产；KA-2200型台式离心机为日本久保田公司生产；TD-3A型血型血清学用离心机、FYQ型免疫微柱孵育器均为长春博研科学仪器有限责任公司生产。

1.3方法(1)血型鉴定、抗体筛选及鉴定均按文献[3]方法进行鉴定。(2)血清中不规则抗体鉴定：抗体筛查提示有不规则抗体者，将血清经2-Me处理与谱细胞反应，其中细胞谱中有C和e抗原的细胞均呈阳性反应，进一步对患儿红细胞进行吸收放散试验。吸收放散试验：用(O，CCDEE)、(O，ccDee)红细胞分别吸收产妇血清，吸收后的血清及乙醚放散液分别再与(O，CCDEE)及(O,ccDee)2种细胞进行反应。

2结果

2.1患儿及其父母红细胞血型见表1。

表1　　患儿及其父母红细胞血型

表2　　患儿及产妇抗体筛查试验

S：筛选细胞；+：阳性；-：阴性。

2.2患儿及产妇抗体筛查试验患儿1、产妇1、产妇2血清和红细胞放散液与S1、S2、S3筛选细胞反应均呈阳性，提示有不规则抗体存在；患儿2血清抗体筛查试验阴性，但直接抗人球蛋白试验(DAT)强阳性，不能排除不规则抗体的存在，患儿2红细胞乙醚放散液抗筛阳性，进一步检测证实为抗-D，考虑为患儿血清中的抗-D已完全致敏红细胞，因此患儿血清抗筛阴性，而放散液抗筛阳性。见表2。

2.3患儿DAT、游离抗体试验和放散试验见表3。

表3　　患儿DAT、游离抗体试验和放散试验结果

+：阳性；-：阴性。

2.4患儿及产妇血清中不规则抗体鉴定患儿1及产妇抗体筛查提示有不规则抗体，将患儿1及产妇血清经2-Me处理与谱细胞反应，其中细胞谱中有C和e抗原的细胞均呈阳性反应，进一步对患儿红细胞进行吸收放散试验。在患儿1及产妇血清和红细胞放散液中均检出抗-Ce；在患儿2红细胞乙醚放散液中和产妇血清中均检出抗-D。见表4。

表4　　产妇及患儿红细胞乙醚放散液与谱细胞反应结果

①：患儿1血清；②：患儿1红细胞乙醚放散液；③：产妇1血清；④：患儿2红细胞乙醚放散液；⑤：产妇2血清；/：无数据；+：阳性。

2.5吸收放散试验为进一步确证抗-Ce为独立抗体抗-C或抗-e还是联合抗体抗-Ce，对产妇1血清进行吸收放散试验，经试验证实只有联合抗体抗-Ce，无独立的抗-C和抗-e抗体。结果证明患者细胞被抗-Ce联合抗体所致敏。见表5。

2.6抗体效价测定抗人球法：产妇1抗-C为256，抗-e为128；患儿1抗-C为128，抗-e为64；产妇2抗-D为512；患儿2抗-D为256；产妇抗体效价高于患儿。

2.7输注红细胞制品选择患儿1应选择表型为ccDEE的O型红细胞输注；患儿2应选择O型Rh阴性的红细胞输注。

表5　　产妇1血清与(O，CCDEE)及(O，ccDee)红细胞

+：阳性；-：阴性。

3讨论

HDN是新生儿黄疸中常见的一种疾病，黄疸常发生于新生儿出生后24 h内，且进展快，伴有贫血、肝脾肿大，重者可伴有水肿和心力衰竭。在国内以ABO-HDN 为主，其次为 Rh-HDN。引起该病的血型抗体主要为ABO、Rh血型系统抗体，亦可见于其他血型系统抗体[4]。抗体主要由输血或妊娠免疫刺激产生。

新生儿Rh溶血病很少发生在第1胎。分析原因为：(1)第1胎所产生抗-D抗体效价较低，一般对胎儿无明显影响；(2)自然界中少有与人类红细胞上Rh血型抗原相同或相似的抗原存在,以至孕妇血清中Rh血型系统抗体很少存在天然抗体或免疫性抗体[5]。RhD阴性孕妇妊娠次数的增加会导致抗-D的产生概率明显增加[6]，且妊娠胎次越多，溶血越严重。因此，对曾有过生产史、流产史或输血史的孕妇，应高度重视Rh血型系统及其他血型系统引起的HDN。

本研究结果显示，2例患儿均系母婴Rh血型不合，无ABO血型不合，可以排除合并ABO-HDN。2例患儿DAT均呈强阳性，值得注意的是患儿1间接抗人球蛋白试验(IAT)阳性、患儿2阴性，曾一度怀疑是否有继续试验的价值。继续试验患儿2红细胞乙醚放散液IAT阳性，为后续试验的展开分析提供了帮助，2例患儿均检出高效价致敏红细胞的抗体。骆宏等[7]报道过1例IgG抗-D合并IgG抗-B引起的HDN。因此，在做溶血试验时，O型Rh阳性的HDN患儿不能以血型排除溶血病的可能，单一IAT阴性并不能排除患儿有不规则抗体，单一血型抗体或多系统血型抗体合并均会导致HDN。

由于新生儿的A(B)抗原密度较成人低，被结合的抗体也很少，因此许多ABO-HDN直抗通常为阴性或弱阳性。而Rh-HDN的直抗都相当强，一般大于或等于2+，因此新生儿直抗强弱是区别ABO-HDN和Rh-HDN的重要标志[8]。并可依据直抗强弱决定放散方法，直抗大于或等于2+时常用乙醚放散，反之则常用热放散。患儿经血清学检测鉴定了抗体的特异性，检测排除其他诊断，综合所有试验结果分析，2例患儿均系高效价Rh系统抗体引起的HDN。立即联系临床医生，制订患儿的输血策略，为患儿进行了换血疗法和综合治疗，黄疸逐渐消退，贫血纠正，病愈出院。

综上所述，DAT阳性时要警惕Rh血型系统和其他血型系统引发的溶血病， DAT阳性对HDN试验的后续展开分析具有方向性作用。为了确诊新生儿Rh溶血病，应结合HDN三项试验和IAT试验结果进行综合分析，避免漏检影响诊疗效果。

参考文献

[1]陈蕤，穆士杰，张献清，等．抗-cE联合抗体致新生儿溶血病1例[J]．临床血液学杂志:输血与检验版，2011，24(1)：119-120．

[2]张钦辉，高峰，朱永明．临床输血学[M]．上海：上海科学技术出版社，2000：97-102．

[3]刘达庄．免疫血液学[M]．上海：上海科学技术出版社，2002：128-144．

[4]寇丽筠，陈宏础，丛玉隆，等．临床基础检验学[M]．北京：人民卫生出版社，1999：79．

[5]朱碎永，朱燕英，林甲进．新生儿Rh溶血病的检查分析及预防[J]．中国优生与遗传杂志，2007，15(3)：68-69．

[6]徐华，叶世辉，邵超鹏，等．Rh阴性孕妇血型D抗原同种免疫反应研究[J]．中国输血杂志，2010，23(4)：276-279．

[7]骆宏，汪传喜，罗广平，等．IgG抗-D合并IgG抗-B所致新生儿溶血病的试验诊断[J]．中国输血杂志，2009，22(10)：799-801．

[8]高峰．临床输血与检验[M]．2版．北京：人民卫生出版社，2007：114．

(收稿日期：2015-11-29)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.05.032

文献标识码：A

文章编号：1673-4130(2016)05-0654-03