HPLC法测定正胃片中没食子酸及橙皮苷的含量

唐德智

南宁食品药品检验所，广西　南宁　530001



HPLC法测定正胃片中没食子酸及橙皮苷的含量

唐德智

南宁食品药品检验所，广西南宁530001

【摘要】目的：建立同时测定正胃片中没食子酸、橙皮苷含量的HPLC方法。方法：采用Waters SunFireTM C18(4.6×150mm, 5μm )色谱柱；流动相为甲醇(A)-0.2%磷酸水溶液(B)系统梯度洗脱；流速为1.0ml/min；检测波长:272 nm(0～6 min，没食子酸)，283 nm(6～30 min，橙皮苷)。结果： 没食子酸进样量在0.128～2.302 μg范围内线性关系良好(r=0.9999，n=6)，平均回收率为99.64%，RSD为1.2%(n=9) ；橙皮苷进样量在0.099～1.777μg范围内线性关系良好(r=0.9997，n=6)，平均回收率为99.84%，RSD为0.8%(n=9)。结论：该方法简便、快捷、准确，可用于该制剂的质量控制。

【关键词】正胃片；没食子酸；橙皮苷；HPLC

正胃片是由猴耳环、陈皮、木香、七叶莲、甘草、次硝酸铋、氧化镁、氢氧化铝等制成的中西药复方制剂，具有清热凉血、健脾和胃、制酸止痛的功效，临床用于胃热烧灼、脘腹刺痛、呕恶吞酸、食少倦怠、慢性胃炎、胃及十二指肠溃疡等疾病，并收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂第十七册[1]。方中猴耳环、陈皮为君药，猴耳环的主要有效成分为没食子酸[2]，陈皮的主要有效成分为橙皮苷[3]。正胃片中没食子酸、橙皮苷的含量测定方法已有文献报道[4-5]，但同时测定这2种成分尚无报道。研究建立高效液相色谱法同时测定正胃片中没食子酸、橙皮苷含量。该方法简便、准确，重复性好，可用于该制剂的质量控制。

1仪器与材料

1.1仪器Waters 2695 高效液相色谱仪；Waters2489紫外检测器(美国沃特斯公司)；UV-2501紫外可见分光光度计(日本岛津公司)；S180H型超声波清洗器(德国Elma公司)；XS205DU型电子分析天平(梅特勒-托利多仪器有限公司)。

1.2材料没食子酸对照品(批号：110831-201204)、橙皮苷对照品(批号：110721-201316)均购自中国食品药品检定研究院；正胃片(批号：20120706、20120815、20130101、20130326、20130514，广西医科大学制药厂)。甲醇、磷酸为色谱纯，水为超纯水。

2方法与结果

2.1色谱条件色谱柱: Waters SunFireTM C18(4.6mm×150mm，5μm )；流动相：A为甲醇，B为0.2%的磷酸水溶液；0～6 min，19%A，6～10 min，19%→40%A；检测波长：272 nm(0～6 min，没食子酸)，283 nm(6～30 min，橙皮苷)；流速为 1.0 ml/min；柱温为30℃；进样量：10μl。

2.2样品的制备

2.2.1对照品溶液的制备精密称取没食子酸对照品和橙皮苷对照品适量，置于50 ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成1ml含没食子酸255.8μg、橙皮苷197.4μg 的混合对照品溶液。

2.2.2供试品溶液的制备取本品10片，研细，取约0.5 g，精密称定，置25 ml量瓶中，加入50%甲醇溶液约20 ml，超声处理(功率300W，频率33kHz)30 min，放置至室温，加50%甲醇溶液定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.3阴性样品溶液的制备按正胃片处方及制备工艺，分别制备缺猴耳环和陈皮的阴性样品，并按供试品溶液制备方法制备阴性样品溶液。

2.3专属性试验分别精密吸取供试品溶液、混合对照品溶液的稀释液和阴性样品溶液各10μl，在上述色谱条件下，注入液相色谱仪，记录液相色谱图。由图1可见，在与对照品色谱峰相应的位置上供试品具有相同保留时间的色谱峰，阴性样品对测定无干扰。

2.4线性关系的考察精密吸取混合对照品溶液0.5、1.0、3.0、5.0、7.0、9.0 ml分别置于10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，制成系列质量浓度的混合对照品溶液，按照上述色谱条件，每个质量浓度分别测定3次，每次进样10μl，记录峰面积。以峰面积的平均值Y为纵坐标，进样量x(μg)为横坐标，绘制标准曲线，计算回归方程，结果没食子酸的回归方程为：Y=3.415×106x+5.146×104，r=0.999 9，橙皮苷的回归方程为：Y=2.046×106x+3.367×104，r=0.9997。表明没食子酸进样量在0.128～2.302 μg范围内，橙皮苷进样量在0.099～1.777 μg范围内线性关系良好。

2.5仪器精密度试验精密吸取“2.4”项下中间质量浓度的混合对照品溶液10μl，在上述色谱条件下, 重复进样6次，记录色谱峰峰面积，结果没食子酸、橙皮苷峰面积的RSD分别为1.2%、0.9%。

2.6稳定性试验取同一供试品溶液(批号：20130101)，按上述色谱条件，分别于配制后0、2、4、8、12、24h进样，记录色谱峰面积，结果没食子酸、橙皮苷峰面积的RSD分别为1.6%、1.3%，表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.7重复性试验称取同一批样品(批号：20130101)0.5 g，平行称取6份，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,在上述色谱条件下测定，测得没食子酸平均含量为6.44 mg/g，RSD为1.5%；橙皮苷平均含量为4.83 mg/g，RSD为1.3%。

2.8回收率试验精密称取已知含量的同一批号样品(批号：20130101 )约0.25g，平行称取9份，置25 ml量瓶中，分别加入没食子酸和橙皮苷混合对照品溶液(含没食子酸0.3268mg/ml、含橙皮苷0.2434mg/ml)适量，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定，计算回收率。结果没食子酸平均回收率为99.64%，RSD为1.2%；橙皮苷平均回收率为99.84%，RSD为0.8%。

2.9样品测定取5批正胃片，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项色谱条件测定，将测得峰面积代入标准曲线，计算样品中没食子酸、橙皮苷含量，结果见表1。

表1　样品测定结果　(n=5)

3结果与讨论

3.1提取条件的选择实验对不同浓度的甲醇和乙醇进行了提取效率的比较实验，结果表明甲醇提取效果优于乙醇。采用不同浓度的甲醇提取，考察结果表明：采用50%甲醇提取，提取效率最高。另对比了不同提取方法(超声、回流、索氏提取)对正胃片的提取效果，结果表明：超声提取的效率高，方法简便。

3.2提取时间的选择以没食子酸、橙皮苷为指标，对提取时间进行了考察，结果表明：提取30min后有效成分峰面积达到最大，确定提取30min作为提取时间。

3.3检测波长的确定分别取没食子酸、橙皮苷对照品溶液在200～400nm波长范围进行紫外光谱扫描，结果显示没食子酸和橙皮苷分别在272nm和283nm处有最大吸收。为提高分析灵敏度和准确度，宜尽量选择在最大吸收波长下测定没食子酸和橙皮苷的含量。实验采用程序波长切换技术，根据各组分的出峰顺序，在不同时间段分别用其相应的最大吸收波长同时测定含量。

3.4流动相的选择参考药典及相关文献中没食子酸、橙皮苷的含量测定方法[6-7]，采用等度洗脱法进行实验，但分离结果均不理想，故考虑梯度洗脱。实验分别考察了甲醇-水、乙腈-水、甲醇-0.2%磷酸水溶液、乙腈-0.1%磷酸水溶液等不同比例的流动相，最终采用甲醇-0.2%水磷酸溶液作为流动相进行梯度洗脱，可将2个组分完全分离，且基线稳定，峰形好，出峰快。

参考文献

[1]卫生部药品标准[S].中药成方制剂.第17册.1998:58-59.

[2]江苏新医学院.中药大辞典[S].上海:上海科学技术出版社,1999:1183-1184.

[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京：中国医药科技出版社，2010.

[4]何连枝, 丘振文, 罗丹冬. HPLC法测定正胃片中橙皮苷的含量[J].中华实用中西医杂质,2007,20(17) :1549-1550.

[5]陈业光,李德潮.HPLC法测定正胃片中没食子酸的含量[J].中成药，2008,30(9)：13-14.

[6]徐海燕,金艺,张红霞,等.HPLC同时测定胃力片中柚皮苷、橙皮苷与新橙皮苷的含量[J].中成药,2010,32(8):1355-1356.

[7]陈艳伟,张欢,杨世磊,等.HPLC同时测定猴耳环消炎胶囊中没食子酸与槲皮素的含量[J].中国实验方剂学杂志,2013,19(9):126-127.

(收稿日期：2015.12.17)

【中图分类号】R284.1

【文献标志码】A

【文章编号】1007-8517(2016)03-0012-02

作者简介：唐德智，男，副主任中药师，主要从事中药制剂质量控制研究。E-mai:tangdz7497@163.com