落花生枝叶抗氧化作用研究*

钱春美　王璐玲　管　宇　李　宁　李永新　张晓峰

上海中医药大学附属市中医医院(上海 200071)



·方药纵横·

落花生枝叶抗氧化作用研究*

钱春美王璐玲管宇李宁李永新张晓峰△

上海中医药大学附属市中医医院(上海 200071)

摘要目的：研究花生枝叶水提液体外抗氧化作用强度及其量效关系。方法：采用生化试剂盒测定花生枝叶水提物的总抗氧化能力及对羟自由基、超氧阴离子自由基的清除能力，评价花生枝叶水提物的体外抗氧化作用。结果：花生枝叶的水提物在浓度为0.9766～125 mg/mL，总抗氧化作用与浓度有一定的量效依赖关系，且在浓度为62.5mg/mL时，趋于平稳。抗羟自由基能力与抗超氧阴离子自由基能力在0.9766～1000 mg/mL一定浓度范围内，随着浓度增长而加强，到达一定浓度时又下降。结论：花生枝叶水提液有明显的抗氧化作用，在一定浓度间，存在量效关系。

主题词抗氧化@落花生枝叶自由基

落花生枝叶性寒，味甘，微苦涩，入肝、心、肺三经，具有平肝潜阳、安神健脑、镇咳止血的功能，主治各种原因引起的失眠症，以及脑动脉硬化、高血压、小儿夜啼、多动症、气管炎等[1-2]。落花安神合剂作为我院的院内制剂，其成分为花生枝叶水提液，治疗失眠有很好的疗效，有镇静催眠，增强免疫的药效[3]。前期研究，我们发现花生枝叶水提液能降低同型半胱氨酸(Hcy)，抑制斑块的增长，具有治疗动脉粥样硬化(AS)的作用[4]。而氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)的形成对动脉粥样硬化(AS)的发生发展起到很关键的作用，主要通过刺激相关受体、分泌细胞因子等诱导内皮细胞损伤，加重AS[5]。本研究采用生化试剂盒测定花生枝叶水提物的总抗氧化能力及清除羟自由基、超氧阴离子自由基的能力。

1材料1.1试 剂花生枝叶，总抗氧化能力测定试剂盒(批号：20140118)、抗羟自由基测定试剂盒(批号：20140117)、抗超氧阴离子自由基测定试剂盒(批号：20140120)，均购于南京建成生物工程研究所。

1.2仪器7146纯水仪，Thermo；Varioscan Flash多功能酶标仪， Thermo。

2方法2.1花生枝叶水煎液提取定量称取落花生枝叶100g，加10倍量的水浸泡30min，共煎煮3次，煎煮时间分别为1h。每次药液通过6号(100目)筛子过滤，合并药液，浓缩至1∶1比例，获得水煎液A(1g生药/mL)备用。

2.2花生枝叶提取物总抗氧化能力(T-AOC)的测定将水煎液A用双蒸水稀释成125 mg/mL、62.5 mg/mL、31.25 mg/mL、15.6 mg/mL、 7.8125 mg/mL、3.9063 mg/mL、1.9531 mg/mL、0.9766 mg/mL作为测定液备用。抗氧化物质能使Fe3+还原成Fe2+，Fe2+可与邻二氮菲结合形成稳定的Fe2+-邻二氮菲络合物，可通过比色法测定，从而推知体系的总抗氧化能力。具体操作步骤，参考总抗氧化能力测定试剂盒说明书操作，于520nm波长处测各管吸光度。37℃条件下，每分钟每毫升测定液使反应体系吸光度增加0.01为一个抗氧化能力单位(U/mL)。

2.3清除羟自由基能力的测定将水煎液A用双蒸水稀释成500mg/mL、250 mg/mL、125 mg/mL、62.5 mg/mL、31.25 mg/mL、15.6 mg/mL、7.8125 mg/mL、3.9063 mg/mL、1.9531 mg/mL、0.9766 mg/mL作为测定液备用。Fe3+与H2O2反应，H2O2被分解成·OH和OH-，griess试剂使之显红色，其呈色与·OH的量成正比。具体操作步骤，参考 Fenton 测定试剂盒说明书操作，于 550nm 波长处测定各管吸光度。以近似质量浓度 VC作为对照，比较二者清除羟自由基能力的强弱。

2.4清除超氧阴离子自由基能力的测定将水煎液A用双蒸水稀释成1000 mg/mL、500mg/mL、250 mg/mL、125 mg/mL、62.5 mg/mL、31.25 mg/mL、15.6 mg/mL、7.8125 mg/mL、3.9063 mg/mL作为测定液备用。模拟机体中黄嘌呤与黄嘌呤氧化酶反应系统，产生超氧阴离子自由基O2-·，加入电子传递物质及griess氏显色剂，使反应体系呈现紫红色，测其吸光度，当被测样本中含有 O2-· 抑制剂时，则比色时测定管的吸光度低于对照管的吸光度，以VC做为标准，可计算出被测物品对O2-· 的清除能力。具体操作步骤，参考抗超氧阴离子自由基测定试剂盒说明书操作，于 550nm 波长处测定各管吸光度。以近似质量浓度 VC作为对照，比较二者清除超氧阴离子自由基能力的强弱。

3结果3.1总抗氧化能力(T-AOC)的测定从图1可以看出，花生枝叶水提物具有将强的总抗氧化能力，并且随着提取液的浓度增大，总抗氧化能力增强。表现出明显的量效依赖关系，且在浓度为62.5mg/mL时上升幅度小。

3.2清除羟自由基能力的测定从图2可以看出，花生枝叶水提物浓度在0.976563～7.8125mg/mL，抗羟自由基的能力随着提取液的浓度增大。浓度在15.625～500mg/mL，其抗羟自由基的能力反而下降。

3.3清除超氧阴离子自由基能力的测定从图3可以看出，花生枝叶水提物浓度在3.9063～250mg/mL， 清除超氧阴离子自由基能力随着提取液的浓度增大。浓度在250～1000mg/mL，其清除超氧阴离子自由基能力逐渐下降。

4讨论落花生又名“花生”或“长生果”，其富有丰富的营养成分，为素食之佳品，王翘楚教授以中医“天人相应”理论为指导，并受到李时珍《本草纲目》所记载的“合欢树叶能顺乎自然界阴阳消长规律，有“昼开夜合”的现象，故取合欢皮、合欢花入药用作治疗不寐”的启发，指导应用于临床实践中[6]。落花安神口服液是我院院内制剂，在临床上治疗失眠有显著效果。前期在治疗失眠的实验研究中，发现其能治疗心血管疾病。文献表明，失眠或睡眠不佳与心血管疾病有很大的关联，尤其是血压、血脂代谢异常。失眠患者容易出现心率加快、血压升高、心血管症状明显加重。失眠患者的交感神经张力的增加，血压、心率、血小板聚集和血液黏稠度增加，心室颤动阈值降低，动脉样硬化斑块破裂，血小板聚集，从而引起心血管疾病[7]。其中，血脂代谢异常导致的高脂血症以及脂质氧化是动脉粥样硬化发生发展过程中起关键作用的致病原因。花生枝叶可有效地抗氧化，通过抑制Ox-LDL预防AS疾病，有效改善睡眠质量。而自由基是生物体生化反应的普遍介质。现代研究表明，许多疾病如心脑血管疾病、肝硬化、癌症以及人体衰老等过程都与自由基的作用有关[8]。

近年来，相关研究证实花生枝叶主要含有原儿茶酸、对羟基苯甲酸、对甲氧基苯甲酸、对羟基桂皮酸、对甲氧基桂皮酸、异香草酸、异阿魏酸、落花生苷、狗筋蔓内酯、长春花苷、柑橘苷等，其均有抗氧化作用[9-10]。且有相关实验证实，花生枝叶有一定的体外抗氧化作用[11]。目前，最常用的自由基清除测定方法是ABTS法、DPPH法、ORAC法、羟自由基清除能力和超氧自由基清除能力等[12]。本实验采用生化试剂盒法测得提取物抗氧化能力，该方法操作简便，灵敏快速。研究表明，随着质量浓度上升，花生枝叶水提液的总抗氧化能力不断升高，且有剂量依赖。在浓度较低的时候，花生枝叶水提液对羟自由基和超氧都有显著的清除作用。随着质量浓度越来越高时，对羟自由基和超氧都有显著的清除作用显著偏弱。这可能与在铁离子及氧存在时黄酮类化合物自动氧化生成超氧化物或过氧化氢，表现出一定的促氧化作用有关[13]。花生枝叶水提液随着质量浓度的升高，清除超氧阴离子自由基、抗羟自由基能力先增加，后降低但其总的抗氧化能力却是逐渐增强。相对于化学合成的抗氧化单体，花生枝叶属于农作物，药食两用中药，顺应自然。作为单味药，对防治心血管疾病有一定的疗效，在中医药领域中还是不多见的。但花生枝叶水提物成分多样，其中含有很多鞣质等其他物质，若对其进行分离纯化，其体外抗氧化能力是否会变化？通过氧化性改善心血管疾病的疗效有多少？我们将在后期实验中结合临床需要进一步探索。

参考文献

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[5] 徐瑞霞,李建军.氧化型低密度脂蛋白胆固醇与动脉粥样硬化[J].中国医学前沿杂志,2012,4(8):33-37．

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[11] 翟红强,赵会杰.硒对花生抗氧化作用的初步研究[J].中国油料作物学报, 2007,29(1): 58-62.

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(收稿2015-12-16；修回2016-02-20)

The research of peanut leaves antioxidation

Shanghai Municipal Hospital of Traditional Chinese Medicine Affililated to Shanghai TCM University(Shanghai 200071)

Qian ChunmeiWang LulingGuan Yuet al

KEY WORDSAntioxidant activity@Peanut leavesFree radicals

ABSTRACTObjective: To explore the strength of peanut leaves antioxidant effects in vitro and the dose-dffect relationship. Methods: Explored the total antioxidant capacity and hydroxyl radicals, superoxide anion radical scavenging activity of peanut foliage water extract by biochemical assay kit and to evaluate the peanut foliage antioxidant capacity. Results: Foliage water extract from the peanut leaves between the concentration of 0.9766 and 125 mg/mL had a certain degree of dose-dependent. The total antioxidant effect leveled off with the concentration of 62.5 mg/mL, anti-hydroxyl free radical and superoxide anion radical capacity within a certain concentration range between 0.9766 and 1000 mg/mL grew as the concentration strengthed and decreased later. Conclusion: Peanut foliage water extract has the significant antioxidant effects and dose-effect relationship exists among a certain concentration.

通讯作者△

【中图分类号】R284

【文献标识码】A

doi:10.3969/j.issn.1000-7369.2016.06.042

*上海市卫生局课题(20114057)