猪繁殖与呼吸综合征免疫抗体水平检测与分析

李卫忠

(新疆维吾尔自治区吉木萨尔县吉木萨尔镇畜牧兽医站,新疆吉木萨尔 831700)

猪繁殖与呼吸综合征免疫抗体水平检测与分析

李卫忠

(新疆维吾尔自治区吉木萨尔县吉木萨尔镇畜牧兽医站,新疆吉木萨尔 831700)

为了解新疆吉木萨尔县庆欣养殖专业合作社和吉木萨尔县鑫盛源生猪养殖合作社猪繁殖与呼吸障碍综合征(PRRS)免疫抗体水平及其生长的规律,采集了该场共60份血清,采用间接ELISA方法检测PRRS免疫抗体水平并进行分析。结果表明,2个猪场的PRRS免疫抗体阳性率分别为73.33%、83.33%,其中抗体水平均达到了国家规定的70%免疫阳性率,但整体水平需通过进一步加强免疫,以提高整体猪蓝耳病抗体水平。

猪;繁殖;免疫抗体;抗体

1 前言

1.1 概述

猪繁殖与呼吸障碍综合征（PRRS），俗称猪蓝耳病。是由猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒（PRRSV）引起的一种高度传染性疾病，临床上以母猪发热、厌食、流产、产死胎、木乃伊胎、弱仔等繁殖障碍以及仔猪呼吸道症状和高死亡率为特征，是目前危害养猪业的主要疾病之一。

1.2 猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒的发病机理及症状特征

主要呈现特征性间质性肺炎和淋巴结的轻度或中度肿大。流产或死产的胎儿及胎盘很少发现显微病变。对繁殖母猪进行攻毒实验，发现母猪感染PRRSV后可引起胎儿脐带出血、扩张，呈现坏死性脐动脉炎的变化，使得脐血管的正常血液循环受损，结果导致胎儿缺氧而死亡。

病毒能够通过精液与胎盘进行传播，感染母猪与带毒母猪主要表现为发情障碍。一些孕猪出现早产状况，还有一些孕猪在后期出现流产状况，产弱仔、木乃伊胎以及死胎，一部分在产后出现无乳现象。

2 实验材料与方法

2.1 试验材料

2.1.1 待测样品采集

2015年1月至2015年3月期间，采集了庆欣养殖场和鑫盛源养殖场猪血清样品60份，根据猪群的日龄不同，进行前腔静脉采血，将盛有血清的EP管放置于-20℃冰箱保存备用。

2.1.2 实验试剂

试剂由兰州兽医研究所提供，其中包括PRRS阳性血清4.0ml，阴性血清4.0ml，10倍洗液235mL，样品稀释液120ml，酶标抗体70ml，TMB底物液60ml，终止液60ml。

2.1.3 实验仪器

单道和多道微量移液器、全波长酶标仪、隔热式恒温培养箱、小型高速冷冻离心机、微量搅拌器、超净工作台、量杯、量筒。

2.1.4 试剂的准备

（1）用样品稀释液40倍稀释被测样品。

（2）洗涤液的准备：浓缩洗涤液使用前应恢复至室温（18～25℃），并摇动使沉淀盐溶解。使用前浓缩洗涤液应用蒸馏水或去离子水10倍稀释。

2.2 实验步骤

2.2.1 操作流程

使用前所有试剂应恢复至室温（18～25℃）。试剂应轻轻旋转或振荡混合。每个样品使用一个独立的吸头。

（2）在包被孔内加入100µl没有稀释的阴性对照，每次检测加两孔。

（3）在包被孔内加入100µl没有稀释的阳性对照，每次检测加两孔。

（4）在相应的孔中加入100µl已稀释好的样本。

（5）18～25℃孵育30±2min。

（6）吸取各孔的液体弃入废液筒。

（7）用大约300µl洗涤液洗涤板孔，共洗涤3～5次。每次洗涤后应吸去孔内的液体。注意：应避免包被孔干燥。在最后一次洗涤液吸去后，将每块板中残留的洗涤液扣拍到吸水材料上。

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（8）每孔加入100µl辣根过氧化物酶标记的抗猪IgG抗体。

（9）18～25℃孵育30±2min。

（10）重复步骤6和7。

（11）每孔加入100µlTMB底物液。

（12）18～25℃孵育15±1min。

（13）每孔加入100µl终止液，终止反应。

（14）测量并且记录样本和对照的吸光值A（650）。

（15）计算结果。

2.2.2 检测原理

猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体检测试剂盒（IDEXX PRRS X3 Ab）是用于检测猪血清和血浆中PRRSV IgG抗体的酶联免疫吸附试验。将重组的PRRSV抗原包被在微量反应板上将待检样品在反应孔中孵育时，针对PRRSV的特异性抗体与包被的抗原形成抗原抗体复合物。洗去包被孔中没有结合的成分后，加入辣根过氧化物酶（HRPO）标记的抗猪抗体，它与孔中的猪抗体结合。

2.2.3 结果判定

实验有效性判定：

若试验有效则阳性对照的平均值减去阴性对照的平均值必须大于或等于0.150；此外，阴性对照的平均值（NCx）必须小于或等于0.150。

判定标准

PRRS抗体的有无（阳性/阴性）通过计算每个样品的S/P值判定。

（1）如果S/P值低于0.4，样品应判定为PRRS抗体阴性。

（2）如果S/P值大于或等于0.4，样品应判定为PRRS抗体阳性。

3 结果

3.1 猪血清PRRS抗体检测结果

应用PRRS抗体ELISA检测试剂盒检测吉木萨尔县庆欣养殖专业合作社和吉木萨尔县鑫盛源生猪养殖合作社猪血清各60份，检测结果见表1。

表1 两个猪场PRRS抗体阳性率检测结果

3.2 试验结果

由表1结果得到，吉木萨尔县庆欣养殖专业合作社阳性率为73.33%，吉木萨尔县鑫盛源生猪养殖合作社阳性率为83.33%，都达到了国家要求的免疫抗体合格率70%，但吉木萨尔县庆欣养殖专业合作社免疫抗体阳性率普遍较低，由于此病一旦爆发，将造成难以估计的损失，故两个猪场均可在现水平上，从疫苗到防疫人员各个环节加强管理，以待猪蓝耳抗体阳性率不断提高。

4 讨论

高致病性猪蓝耳病是由猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒变异株引起的一种高致死性传染病，是养猪业必须正视的一个重大问题，已被农业部定为强制免疫范畴。免疫是防控重大动物疫病的重要措施，是避免和减少动物疫情发生的关键。根据实验结果分析，虽然两个猪场猪蓝耳病的阳性率都超过了国家要求的免疫抗体合格率70%，但其阳性率不同，而且猪蓝耳抗体合格率普遍较低。

[1] 刘安石，钟兰兰，杨亚，等.草分枝杆菌对猪繁殖与呼吸综合征免疫抗体水平的影响[J].中国兽医杂志，2013，49（5）：42-44.

[2] 曾显成，陈晓实，罗先，等.猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）抗体水平检测与分析[J].福建农业学报，2011，26（4）：552-556.