同位素稀释-固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱技术同时测定畜禽肉中四类兽药残留

□骆月霞 惠州市质量计量监督检测所

同位素稀释-固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱技术同时测定畜禽肉中四类兽药残留

□骆月霞 惠州市质量计量监督检测所

本次研究，主要利用同位素稀释-固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱检测方法对畜禽肉中4类兽药残留进行检测。4类兽药主要指青霉素类、喹诺酮类、磺胺类和硝基咪唑类，把此技术有效应用到实际的样品检测中，经多级质谱准确质量数值的测定，可对目标化合物进行准确分析。

同位素稀释；固相萃取；超高效液相色谱；串联质谱；残留

在一些牲畜感染性疾病的防治工作中，兽药起到较好的作用，且在畜牧业的生产、渔业养殖、兽类饲养中的应用较为广泛。硝基咪唑类、磺胺类、喹诺酮类和青霉素类兽药属于常用的抗病菌药物，但滥用、不合理应用兽药、不按照休药期给药，均会造成动物性食品内兽药残留情况越来越严重。因此，采用安全方法测定畜禽肉中4类兽药残留具有重要意义。

1 材料和方法

1.1 材料

色谱纯甲醇主要购自德国；色谱纯甲酸主要购自美国；乙二胺四乙酸二钠盐、纯磷酸氢二钠购自国药集团化学试剂有限公司；水为源自Milli-Q系统的纯净水。各种标准物质的纯度见表1。

1.2 溶液配制

1.2.1 标准溶液的配制

称取以上标准品10 mg放于10 mL的容量瓶内，用甲醇进行定容，将其配制为1 g/L的储备液，将其完全密封并储存至-18 ℃的冰箱中，然后再吸取已配制好的标准溶液50 μL，置于10 mL容量瓶中，用甲醇定容，配制成5 mg/L的混合标准溶液，将其完全稀释，作为标准溶液，准备测量。

1.2.2 试剂配制

将1 000 mL 0.1 mol/L柠檬酸溶液和620 mL 0.2 mol/L磷酸氢二钠溶液完全混合，pH值调整到4.0，配制成Na2EDTA-Mcllvaine溶液。

1.3 方法

1.3.1 提取

称取1.8 g匀浆的试样置于50 mL的离心管内，并加入10 μL的内标混合液，放于避光处2 min左右，之后加10 mL Na2EDTA-Mcllvaine溶液与乙腈（7∶3）的混合提取液，将其涡旋40～60 s，超声提取10 min，经12 000 r/min离心10 min后，提取上清液。然后加10 mL Na2EDTA-Mcllvaine溶液与乙腈（7∶3）的混合提取液，重复以上步骤，合并提取液，且在40 ℃下做氮吹缩减约6 mL，以备净化[1]。

1.3.2 净化

主要使用3 mL甲醇、水、Na2EDTA-Mcllvaine的缓冲液活化柱，用3 mL水冲洗以上提取液的上样，抽干后使用甲醇3 mL与5% 氨水甲醇溶液洗脱，在45 ℃下进行氮吹到干，之后加入1 mL乙腈∶水为1∶9的溶液进行溶解，并涡旋混合1 min。

2 结果

2.1 色谱条件

本次研究中，选择Waters Acquity UPLC BEH C18(100 mm×2 mm×1.7 μm)的色谱柱分离4类兽药，对化合物保留较强，且色谱峰峰形好，能进行较好分离，以去除干扰杂质；选用甲醇、乙腈作为强洗脱的流动相。该试验过程中，分别设置0.1%、0.05%、0.2%甲酸水溶液作为研究的流动相，研究结果表明，0.1%甲酸水溶液体系能够提供一个很好的离子化的条件，且峰面积的信号非常强。

2.2 萃取溶剂

因4类药物酸碱性存在差异，且易溶在乙腈和甲醇当中，比较整个Na2EDTA-Mcllvaine-乙腈甲醇、乙腈以及Na2EDTA-Mcllvaine-甲醇复合的提取液的提取效果。

2.3 净化条件

本次研究中，主要选用德国生产的5种（MCX、WAX、MAX、HLB和WCX）固相的萃取小柱，重点监测其净化的效果以及保留行为。由于MCX的固相萃取柱的pKa值所适合使用的范围在3～10，而且药物的pKa值范围非常宽。因此，MCX的固相进行的萃取小柱对于不同类型药物起到的吸附作用较明显。

2.4 阳性定性确证于样品监测

结果显示，阳性样品4例，其中，猪肉的样品中有磺胺二甲嘧啶2例，含量为98.5、250.1 μg/kg；而猪肉的样品中含有磺胺邻二甲氧嘧啶1例，含量为97.1 μg/kg。检测4例阳性的猪肉样品，其中磺胺二甲嘧啶80.2、250 μg/kg、磺胺邻二甲氧嘧啶96.1 μg/ kg，表明两种方法用于检测过程中，其结果大体相似，证实此种方法的处理技术在整个畜禽肉内4类兽药残留检测中适用。

3 结语

本文主要分析在畜禽肉中检测过程中，使用固相萃取-同位素稀释-超高效液相色谱-串联质谱技术来检测4类兽药残留，针对不同方法了解其应用效果。

[1]其其格,郭根成.餐饮业蔬菜水果和畜禽肉中农兽药残留的调查分析[J].农村牧区机械化,2014,21(4):45.

[2]王玉珏,魏萍,刘光磊,等.动物性食品药物残留的监管[J].畜牧兽医科技信息,2015,10(5):23-24.