利用中草药红茶菌微生态制剂辅助建立非免疫无疫区的试点试验研究

蒋小强，邱红辉，林长平，何萍，符乃方，蒋盛军*

(1.海南省东方市畜牧兽医局，海南东方572600;2.中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所，海南儋州571737)

利用中草药红茶菌微生态制剂辅助建立非免疫无疫区的试点试验研究

蒋小强1，邱红辉1，林长平1，何萍1，符乃方2，蒋盛军2*

(1.海南省东方市畜牧兽医局，海南东方572600;2.中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所，海南儋州571737)

口蹄疫是国际上畜牧兽医学界非常关注的一个动物疫病。当前口蹄疫的防控主要采用两种手段，一种是疫苗注射；一种，是扑杀。在发达国家，口蹄疫的防控主要依靠是扑杀手段来建立非免疫无疫区。在发展中国家，主要依靠疫苗注射来防控口蹄疫。为了推进我国的动物疫病防控工作，我国计划在一些物理隔离条件比较好、疫病防控较好的地区如海南岛、辽东半岛、胶东半岛开展口蹄疫非免疫无疫区的建设。2012年，国务院制定和颁布了国家中长期动物疫病防治规划（2012-2020年），对于海南岛、胶东半岛等地计划实现口蹄疫非免疫无疫区。在一些发达国家和地区，如日本、韩国、中国台湾地区、英国、法国等欧洲国家，都在建立的口蹄疫非免疫无疫区发生口蹄疫，由于所有家畜都没有注射口蹄疫，所有一旦发病损失惨重。

根据中草药益生菌制剂理论，利用中草药制剂形成的短效口蹄疫疫病防控效果，结合益生菌菌群持续产酸形成的长效口蹄疫防控效果，两者的有机结合产生的中草药益生菌制剂使用可以起到相对长效的口蹄疫防控效果，周期性间隔喷雾中草药益生菌制剂，就也可以起到长期高效防控口蹄疫的作用效果。

我国利用红茶菌为益生菌制剂菌群，利用甘草、菊花、罗汉果、啤酒花等中草药提取液为中草药制剂，利用红茶菌发酵上述中草药提取液，制备获得中草药红茶菌制剂。利用细胞、乳鼠以及猪为动物模型，我们开展了中草药红茶菌防控口蹄疫的体外和体内的抗病毒试验，结果表明：中草药红茶菌在体外和体内对口蹄疫病毒都有一定的杀灭和抑制作用，并且在大田试验中预防口蹄疫取得成功【1,2，3】。为了验证喷雾中草药红茶菌是否可以有效预防口蹄疫的感染，我们在某地开展了中草药红茶菌预防口蹄疫的大田试验，预期为中草药红茶菌防控口蹄疫提供新的试验证据。

1 试验点的选取和动物分组

由于是大田试验，为了保证具有口蹄疫病毒的感染源，我们选取一个以前发生过几次口蹄疫疫情的猪场开展试验，这样尽可能确保猪场的猪群携带有口蹄疫病毒。为确保试验结果的客观真实性，选取春季、冬季重复进行两次试验。至少选取体重、年龄相近（一月龄）的75头未注射过口蹄疫疫苗的小猪作为样本,采血进行ELISA口蹄疫检测，则将其随机分为空白组、试验组和疫苗注射组，每组25头猪。分别对每头猪标号，将其饲养于环境相似、距离尽量远的圈舍，分组后正常饲养两周,使猪群适应新的群体后再开展试验。

2 给药处理阶段

三组猪群的饲养管理方式应保持一致。对照组小猪在试验过程中不做任何处理；对处理组的猪口鼻喷浓度为20%的中草药红茶菌制剂100mL/头，每周喷药1次，连续喷药4周；疫苗注射组小猪在试验开始时注射口蹄疫疫苗。在试验期间观察并记录猪群的健康状况。

3 试验检测阶段

在给药处理前及试验结束后，每头猪分别称重并采血7-8mL,置于冰盒中带回试验室分离血清。用口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC抗体检测ELISA试剂盒（中国农科院兰州畜牧兽医研究所研制）检测试验猪是否存在口蹄疫感染情况。口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC抗体检测ELISA试剂盒用于检测动物血清中口蹄疫病毒非结构蛋白抗体，适用于动物群体感染状况监测和评估、发现早期隐性感染和进出境检疫，不受血清型的限制。

4 试验数据分析阶段

通过SPSS统计分析软件,分析各组之间的统计学差异，以P＜0.05表示有显著性统计学意义。

5 结果与讨论

项目试验按计划分两次在某猪场展开，每次75头猪，分为试验组、疫苗组、空白组，每组25头。用口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC抗体检测ELISA试剂盒对150头猪的血清标本的分析后，判定统计结果见表。

由表中可知一期试验、二期试验都有阳性样本存在，推测原因是该猪场由于前几年发生过口蹄疫疫情，环境中仍然有口蹄疫病毒存在，口蹄疫病毒未彻底净化，导致试验期发生感染情况。一期样本中感染率为24%，二期样本感染率为5.3%，经过卡方检验得知，二期试验发病率极显著低于一期试验（P=0.001），推测原因是猪场在一期试验检测出阳性样本后，加强了日常消毒管理，并采用漏缝地板养殖，降低了感染率。

表1 猪试验前后血清检测以及分析结果

表2 不同试验期判定结果分析

表3 三组预防口蹄疫效果分析

试验组、疫苗组、空白组预防口蹄疫成功的猪分别有42、45、41头，失败的分别有3、4、9头。经过卡方检验试验组和疫苗组的预防效果差异不显著（P=0.782）。试验组和空白组的预防效果虽未达到统计学意义上的显著水平（P=0. 097＞0.05），但从数据上可以看出红茶菌制剂确实对口蹄疫有一定的预防作用，两组间差异已接近显著水平。疫苗组和空白组的预防效果差异也不显著（P=0.147）。由于口蹄疫疫苗对口蹄疫的预防作用是确信已知的，之所以出现统计学上的不显著状况，推测原因是试验样本量偏小，造成统计分析的结果发生了偏差。

6 试验组和疫苗组治疗口蹄疫效果分析

组别成效合计治疗成功治疗失败试验组505疫苗组101

一期试验中，由试验前阳性的转为试验后阴性的，即口蹄疫痊愈的猪，试验组有5头，疫苗组有1头，两组中患病的猪在试验结束后都已痊愈。

7 小结

中草药红茶菌具有多种抗口蹄疫的作用机制，对猪口鼻喷雾中草药红茶菌，可以形成预防口蹄疫的三道防线：第一道防线，喷雾的中草药红茶菌可以分散到整个猪圈，杀灭和抑制猪圈以及周围环境的口蹄疫的存活和繁殖。这个杀灭和抑制机制，中草药提取液可以起到一定的短时作用，更重要的时红茶菌中的醋酸菌和酵母等复合益生菌可以持续产生大量有机酸拮抗口蹄疫病毒。口蹄疫病毒是一个对酸非常敏感的病毒。其次，对猪口鼻喷雾中草药红茶菌可以同时进入消化道和呼吸道，尤其是呼吸道。呼吸道是口蹄疫感染猪的主要途径。因此，中草药红茶菌可以杀灭或抑制进入消化道和呼吸道的口蹄疫病毒，形成预防口蹄疫感染的第二道防线。第三道防线，对猪口鼻喷雾的时候，猪会从口腔吸入大量中草药红茶菌，中草药红茶菌的有效抗病毒成分会进入血液，在体内起到杀灭和抑制口蹄疫病毒作用，从而形成预防口蹄疫的第三道防线。外界漂移进入的口蹄疫感染源，要进入利用中草药红茶菌防控的猪场，必须通过这三道防线，这种感染几率是非常小的。所以，利用喷雾中草药红茶菌可以有效预防猪、牛等家畜的口蹄疫。本试验的结果也再次证明这一点。由于数量相对不够大，进一步扩大猪群的试验规模，将会取得更有信服的数据。

[1]NaifangFu,Juncai Wu,Lv Lv,Jijun He,Shengjun Jiang. Anti-foot-and-mouth disease virus effects ofChinese herbal kombucha in vivo.Brazilian Journal of Microbiology.2015;46(4):1245-55.

[2]符乃方，吴俊才，符启俊，吕律，何继军，李开绵，叶剑秋，蒋盛军，蒋小强，邱红辉，高李泽，何萍，谢峥嵘，陈吉雄.中草药红茶菌的制备及其体外抗口蹄疫病毒活性.安徽农业科学,，42(17):5500－5502,2014

[3]符乃方，吴俊才，符启俊，吕律，何继军，李开绵，叶剑秋，蒋盛军，蒋小强，邱红辉，高李泽，何萍，谢峥嵘，陈吉雄.中草药红茶菌的制备及其体内抗口蹄疫病毒活性.安徽农业科学,，42(18):5892－5894，5908,2014

S853.71

B

1003-8655（2016）06-0004-02

*通讯作者，蒋盛军，博士，副研究员，18708938111@139.com