Axl在胃癌组织中的表达及其临床病理意义

靳高远，汪建光，张丽柯，陈彦斌，袁鹏飞，刘德纯



Axl在胃癌组织中的表达及其临床病理意义

靳高远，汪建光，张丽柯，陈彦斌，袁鹏飞，刘德纯

摘要：目的研究受体酪氨酸激酶Axl(Anexelekto)在胃癌及癌旁组织中的表达，探讨其与胃癌患者临床病理特征的关系。方法采用免疫组织化学染色法检测2013年1月至2013年12月河南科技大学第一附属医院50例胃癌及相应癌旁组织中的Axl表达，分析其表达情况与胃癌临床病理特征的关系。结果Axl在胃癌组织中的表达高于癌旁组织(P<0.05)；胃癌组织中Axl的表达与患者分化程度、淋巴结转移、TNM分期密切相关(P<0.05)，与患者的年龄、性别、肿瘤直径大小及浸润深度无关(P>0.05)。结论Axl在胃癌组织中的表达高于癌旁组织，胃癌组织中Axl表达与胃癌分化程度、淋巴结转移及TNM分期相关，预示Axl可能参与胃癌的发生发展过程。

关键词：胃癌；受体酪氨酸激酶Axl；临床病理特征；免疫组织化学

作者单位：河南科技大学第一附属医院，河南洛阳 471003

胃癌是目前最常见的恶性肿瘤之一，发病率居第4位，致死率居第2位[1]。尽管在过去10 a胃癌发病率有所下降，但仍然是全球癌症死亡的一个主要因素[2]。多数胃癌患者在确诊时已处于进展期，错失了最佳手术时间，而导致胃癌致死率高。因此，发现一个与胃癌发生发展相关的生物靶点，将有助于胃癌的诊断和治疗[3]。研究发现，受体酪氨酸激酶Axl(Anexelekto)异常表达与结肠癌[4]、甲状腺癌[5]、肺癌[6]、肝癌[7]、胰腺癌[8]及膀胱癌[9]的发生发展及临床预后密切相关。本实验采用免疫组织化学技术(immunohistochemistry，IHC)，检测胃癌组织及癌旁组织中Axl的表达情况，探讨Axl与胃癌患者临床病理特征之间的关系，现报道如下。

1资料与方法

1.1―般资料收集河南科技大学第一附属医院2013年1月至2013年12月行胃癌根治术，并且有完整临床病理资料的50例患者的胃癌组织石蜡标本及对应的癌旁组织石蜡标本。本组男性35例，女性15例，年龄(59.00±1.25)岁。依据美国癌症联合委员会第7版胃癌TNM分期系统[10]对胃癌患者行TNM分期。所有组织均由病理科医师确诊，术前均未接受放、化疗及生物治疗。

1.2主要仪器及试剂本实验所用兔抗人Axl多克隆抗体(ab37861)购自美国Abcam公司，山羊抗兔IgG二抗(SA00001-2)购自武汉三鹰生物技术有限公司(Proteintech Group, Inc)，PBS磷酸盐缓冲液干粉(AR0030)购自武汉博士德生物工程有限公司(BOSTER)；DAB显色试剂盒(DAB-0031/1031)购自福建迈新生物技术开发有限公司。

1.3免疫组织化学方法本实验中所有石蜡组织标本经切片机连续行4 μm厚切片。实验前，将石蜡切片在60 ℃恒温烤箱中烤片2 h，常规二甲苯脱蜡，梯度乙醇水化。加3%过氧化氢甲醇溶阻断过氧化物酶，高压锅加热修复抗原20 min，加6%正常山羊血清封闭30 min，滴加一抗(浓度为1∶200)，4 ℃过夜孵育；次日复温后，PBS冲洗3次×5 min，加HRP标记的二抗(浓度为1∶500)，室温孵育60 min；PBS冲洗，加新鲜配制DAB溶液80 μL显色，显微镜下观察3～10 min，观察切片显色情况并及时置于清水中阻断。经过复染、脱水、透明后进行封片。每次实验各组均进行阴性对照，阴性对照片以PBS代替一抗。

1.4结果判断Axl阳性表达判断标准：没有染色记作0分，染色较浅(比背景染色稍高)记作1分，中等程度染色(比背景染色明显高)记作2分，较强染色记作3分，极强染色记作4分；计算阳性细胞百分比积分：分别计数300个细胞(光镜下进行)，并计算阳性个数占同类细胞的百分数：≤10%为0分，11%～25%为1分，26%～50%为2分，50%～75%为3分，>75%为4分。然后取两项积分之和，具体结果如下：0～1分,阴性(-)；2～3分,弱阳性(+)；4～6分，阳性(++)；7～8分，强阳性(+++)。本实验中将(-)、(+)归为阴性表达，(++)、(+++)为阳性表达。

1.5统计学处理用SPSS 21.0软件统计并分析数据，计数资料采用χ2检验(必要时采用Fisher精确概率法)，以α=0.05为检验水准，P<0.05表示具有统计学意义。

2结果

2.1Axl在胃癌组织及癌旁组织中的表达Axl表达主要定位在细胞膜与细胞质中，呈棕黄色弥漫或散在分布，见图1。本组50例胃癌组织标本中Axl阳性28例，阴性22例，阳性表达率为56.0%(28/50)。癌旁组织中Axl阳性18例，阴性32例，阳性表达率36.0%(18/50)。Axl在胃癌组织中的表达高于癌旁组织(χ2=4.026，P=0.045)，有统计学意义。

图1　Axl在胃癌组织的表达(SP，×100)

2.2Axl表达与胃癌临床病理特征之间的关系Axl在胃癌组织中的表达与患者年龄、性别、肿瘤大小、浸润深度无关；而与分化程度、淋巴结转移、TNM分期相关，(分别为P=0.035，P=0.013，P=0.027)，见表1。

表1Axl 表达与胃癌临床病理特征之间的关系

临床病理特征Axl阴性阳性χ2P值年龄≤60岁1217>60岁10110.1920.661性别男1421女870.7580.384肿瘤大小<4cm78≥4cm15200.0620.804分化程度低分化1612中/高分化6164.4610.035①浸润深度T1/T288T3/T414200.3440.558淋巴结转移无93有13256.1580.013①TNM分期Ⅰ/Ⅱ149Ⅲ/Ⅳ8194.9190.027①

注：①P<0.05，差异有统计学意义。

3讨论

Axl是TAM家族(Tyro3，Axl和Mer)成员之一，TAM家族调控细胞增殖、转移、浸润、细胞因子释放与凋亡等一系列病理及生理过程[11-13]。生长停滞特异性基因6(growth arrest specific gene 6，Gas6)蛋白是Axl的配体， Gas6与Axl的结合能够导致受体二聚化以及自身的磷酸化，并活化细胞内酪氨酸激酶的活性，引发一系列的信号传导过程和生物学效应，介导肿瘤的发生发展。1991年在慢性粒细胞性白血病(chronic myeloid leukemia，CML)患者中首次分离得到Axl[14]。随后，Dufies等[15]发现Axl高表达是对酪氨酸激酶抑制剂耐药CML细胞的特点，且敲除Axl可使耐药细胞对伊马替尼敏感，证明Axl参与耐药分子机制，并且Axl是CML中酪氨酸激酶抑制剂耐药的一个新型标记。近年来，Axl与肿瘤关系的报道逐渐增多，研究发现Axl通过激活特定的信号转导通路参与肿瘤细胞的增殖、转移以及肿瘤细胞凋亡的抑制，是肿瘤发生发展过程中重要的调节因素[16]。

本研究通过免疫组织化学染色法检测胃癌及相应癌旁组织中Axl的表达情况，发现Axl在胃癌组织中表达高于癌旁组织，与Sawabu等[17]的研究结果相似，提示Axl可能在胃癌发生过程中发挥着重要作用，并有可能成为胃癌诊断及治疗策略的靶点。Axl在结直肠癌的转移和浸润过程中起着重要的作用，并且预示着结直肠癌患者的不良预后[4]。本研究中胃癌组织Axl表达与胃癌分化程度、淋巴结转移、TNM分期相关，提示Axl可能与胃癌细胞的恶性程度有关，介导了胃癌的侵袭和转移，可作为胃癌潜在的预后标记，其具体机制有待于进一步研究。

综上所述，本研究通过免疫组织化学染色法检测胃癌及癌旁组织中Axl的表达情况，发现Axl在胃癌组织中表达高于癌旁组织，提示Axl在胃癌的发生过程中发挥着重要作用。同时，Axl的表达情况与胃癌细胞的分化程度、淋巴结转移状态及TNM分期相关，提示Axl可能参与胃癌进展过程，可能是胃癌诊断、治疗及预后评估的潜在生物学标记。

参考文献：

[1]Nagini S.Carcinoma of the stomach:a review of epidemiology, pathogenesis,molecular genetics and chemoprevention[J].World J Gastrointest Oncol,2012,4(7):156-169.

[2]Colquhoun A,Arnold M,Ferlay J,et al.Global patterns of cardia and non-cardia gastric cancer incidence in 2012 [J].Gut,2015,64(12):1881-1888.

[3]Cancer Genome Atlas Research Network.Comprehensive molecular characterization of gastric adenocarcinoma[J].Nature,2014,513(7517): 202-209.

[4]Dunne PD,McArt DG,Blayney JK,et al.AXL is a key regulator of inherent and chemotherapy induced invasion and predicts a poor clinical outcome in early-stage colon cancer [J].Clin Cancer Res,2014,20(1):164-175.

[5]Avilla E,Guarino V,Visciano C,et al.Activation of TYRO3/AXL tyrosine kinase receptors in thyroid cancer[J].Cancer Res,2011,71(5):1792-1804.

[6]Wu Z,Bai F,Fan L,et al.Coexpression of receptor tyrosine kinase AXL and EGFR in human primary lung adenocarcinomas [J].Hum Pathol,2015,46(12):1935-1944.

[7]Lee HJ,Jeng YM,Chen YL,et al.Gas6/Axl pathway promotes tumor invasion through the transcriptional activation of Slug in hepatocellular carcinoma[J].Carcinogenesis,2014,35(4):769-775.

[8]Koorstra JB,Karikari CA,Feldmann G,et al.The Axl receptor tyrosine kinase confers an adverse prognostic influence in pancreatic cancer and represents a new therapeutic target[J].Cancer Biol Ther,2009,8(7):618-626.

[9]Sayan A,Stanford R,Vickery R,et al.Fra-1 controls motility of bladder cancer cells via transcriptional upregulation of the receptor tyrosine kinase AXL[J].Oncogene,2012,31(12):1493-1503.

[10] Qiu MZ,Wang ZQ,Zhang DS,et al.Comparison of 6th and 7th AJCC TNM staging classification for carcinoma of the stomach in China[J].Ann Surg Oncol,2011,18(7):1869-1876.

[11] Shiozawa Y,Pedersen E,Patel L,et al.GAS6/AXL axis regulates prostate cancer invasion, proliferation, and survival in the bone marrow niche [J].Neoplasia,2010,12(2):116-127.

[12] Song X,Wang H,Logsdon C,et al.Overexpression of receptor tyrosine kinase Axl promotes tumor cell invasion and survival in pancreatic ductal adenocarcinoma [J].Cancer,2011,117(4):734-743.

[13] Li Y,Wang X,Bi S,et al.Inhibition of Mer and Axl receptor tyrosine kinases leads to increased apoptosis and improved chemosensitivity in human neuroblastoma[J].Biochem Biophys Res Commun,2015,457(3):461-466.

[14] O’Bryan JP,Frye RA,Cogswell PC,et al.Axl,a transforming gene isolated from primary human myeloid leukemia cells, encodes a novel receptor tyrosine kinase[J].Mol Cell Biol,1991,11(10):5016-5031.

[15] Dufies M,Jacquel A,Belhacene N,et al.Mechanisms of AXL overexpression and function in imatinib-resistant chronic myeloid leukemia cells [J].Oncotarget,2011,2(11):874-885.

[16] Wang X,Saso H,Iwamoto T,et al.TIG1 promotes the development and progression of inflammatory breast cancer through activation of Axl kinase[J].Cancer Res,2013,73(21):6516-6525.

[17] Sawabu T,Seno H,Kawashima T,et al.Growth arrest-specific gene 6 and Axl signaling enhances gastric cancer cell survival via Akt pathway[J].Mol Carcinog,2007,46(2):155-164.

Expression of Axl in Gastric Cancer and its Clinicopathological Significance

JIN Gao-yuan, WANG Jian-guang, ZHANG Li-ke, CHEN Yan-bing, YUAN Peng-fei, LIU De-chun

(First Affiliated Hospital, Henan University of Science and Technology, Luoyang 471003,China)

Abstract:ObjectiveTo explore the expression of Anexelekto(Axl) in gastric cancer and adjacent paracancerous tissues, and evaluate the association between Axl expression and the clinicopathological characteristic of patients with gastric cancer. MethodsThe expression of Axl in 50 gastric cancer and adjacent paracancerous tissues collected from January to December in 2013 were detected by immunohistochemical (IHC) staining. Besides, the relationship bewteen the expression of Axl and the clinicopathological characteristic of patients with gastric cancer were analyzed.ResultsAxl expression in gastric cancer was higher than adjacent paracancerous tissues (P<0.05). The positive expression of Axl was related to tumor differentia-tion, lymph node metastasis status and the TNM stage (P<0.05), but not related to age, gender, tumor size, and tumor depth. ConclusionThe expression of Axl in gastric cancer tissues was higher than adjacent paracancerous tissues, which positive expression of Axl was correlated with tumor differentiation, lymph node metastasis and TNM stage. It indicates that Axl may participate in the tumorgenesis and development of gastric cancer.

Key words:gastric cancer；receptor tyrosine kinase Axl；clinicopathological characteris-tics; immunohistochemistry

通信作者：刘德纯，男，博士，教授，E-mail：liudechun2008@126.com

作者简介：靳高远(1987-)，男，河南郑州人，医师，从事肿瘤的基础研究与临床治疗工作。

收稿日期：2016-01-08

中图分类号：R735.2

文献标志码：A

DOI：10.15926/j.cnki.issn1672-688x.2016.01.002

文章编号：1672-688X(2016)01-0005-03