孕妇弓形虫病防治研究进展

王鑫磊，李 倩，张 莉,2，李海龙,2*

(1. 大理大学基础医学院寄生虫学教研室，云南大理 671000；2. 云南省自然疫源性疾病防控技术重点实验室，云南大理671000)

孕妇弓形虫病防治研究进展

王鑫磊1，李 倩1，张 莉1,2，李海龙1,2*

(1. 大理大学基础医学院寄生虫学教研室，云南大理 671000；2. 云南省自然疫源性疾病防控技术重点实验室，云南大理671000)

弓形虫病是一种世界性分布的人兽共患寄生虫病，在人和动物中广泛传播。孕妇感染弓形虫后多表现为隐性感染，无明显的临床表现，但该虫可通过垂直传播影响胎儿发育，造成早产、流产、畸形和死胎等不良妊娠现象。论文对弓形虫病流行病学、感染因素、免疫学、诊断和治疗等方面阐述弓形虫感染对孕妇的影响，为孕妇弓形虫病的防治提供参考。

弓形虫；感染；孕妇

弓形虫病(Toxoplasmosis)是由刚地弓形虫(Toxoplasmagondii)引起的一种危害十分严重的人兽共患寄生虫病，呈世界性分布。人类感染弓形虫多呈隐性感染，而感染弓形虫的孕妇，可经胎盘血流垂直传播给胎儿，导致胎儿脑、眼、心、肺、肌肉和淋巴结等部位病变，引起早产、流产、畸形或死胎，此种传播方式导致的弓形虫病称之为先天性弓形虫病(Congenital toxoplasmosis)。及时对妊娠妇女弓形虫的感染检测与预防，可以避免先天性弓形虫病的发生。为此，本文对孕妇弓形虫病的流行病学、免疫学、感染因素和诊断及治疗等相关研究进展进行综述。

1 孕妇弓形虫的感染率及感染因素

孕妇的弓形虫抗体调查研究显示，亚洲的日本、中国台湾地区的阳性率分别为10.3%和11.8%[1-2]，欧洲克罗地亚和法国阳性率为31.4%，其感染因素与普遍养宠物猫、狗等有关[3-4]；非洲刚果阳性率为84.7%[5]，埃塞俄比亚则为83.6%[6]。弓形虫感染因素主要与卫生条件差和教育水平偏低等密切有关。由于我国幅员辽阔，民族风俗习惯和饮食差异较大，各地区孕妇弓形虫感染率不尽相同，安徽淮南地区弓形虫感染率为3.91%，青岛地区弓形虫感染率为6.26%[7-8]，感染因素主要与常吃生食、烧烤、火锅等饮食习惯或者与猫、狗等宠物接触密切相关。

2 弓形虫感染对孕妇和胎儿的影响

孕妇弓形虫感染多数无症状， Castilho-Pelloso M P等[9]对204例IgM阳性孕妇调查，其中146例为隐性感染。孕妇弓形虫感染后，病原可通过胎盘感染胎儿，直接影响胎儿发育，其临床表现复杂。Pengsaa K等[10]对20例先天性弓形虫病患儿研究发现，脉络膜视网膜炎为14/20(70%)例，颅内钙化为12/20(60%)例，脑积水为10/20(50%)例，其中多数感染者其症状和体征缺乏特异性。妊娠妇女不同时期感染弓形虫，胎儿受损的组织和症状不同，如妊娠早期弓形虫感染会导致流产、致畸和神经管缺陷，妊娠晚期主要导致眼睛和脑部损伤等。

3 孕妇弓形虫感染的免疫学研究

3.1 孕期弓形虫感染与细胞免疫

孕妇易受弓形虫感染与妊娠期孕妇的免疫功能降低有关。妊娠期孕妇细胞免疫的功能上调，弓形虫感染激活孕妇的细胞免疫，使其处于活跃状态对抗弓形虫的感染[11]。弓形虫感染后获得性免疫主要为细胞免疫，其中T细胞、巨噬细胞和NK细胞为抑制和杀伤弓形虫的主要效应细胞，其中CD8+T细胞和CD4+T细胞是抗弓形虫感染的主要免疫细胞，呈前后相继表达状态。Suzuki Y等[12]研究发现，CD8+T细胞在弓形虫感染慢性阶段主要通过分泌IFN-γ等细胞因子起主要作用，IFN-γ可诱导CD8+T穿过血脑屏障进入中枢神经系统，清除或破坏脑内的弓形虫包囊，起到抗弓形虫感染作用； CD4+T细胞是弓形虫感染中IFN-λ的主要来源，主要在抗感染免疫中诱导和活化CD8+T细胞作用；但在CD4+T细胞缺乏的情况下，CD8+T细胞仍可被活化和诱导，而且CD4+T细胞缺乏的小鼠存活天数可达到180 d，且虫负荷增加。此外，T细胞还可通过释放IL-2等细胞因子增强巨噬细胞、NK和CTL等细胞参与杀伤虫体，调节细胞免疫及促进T细胞增殖。

3.2 孕期弓形虫感染与体液免疫

孕期弓形虫感染，特别是在孕前期、孕中期可改变Th2细胞优势免疫应答环境，破坏胎盘细胞，损害胚胎视网膜和脑等中枢神经系统，导致不良妊娠，造成胎儿流产、死胎或畸形。为探明先天性弓形虫病与血清中弓形虫特异性抗体IgM和IgG和IgA之间的关系，Amin A等[13]采集264份孕妇流产后的血清，检测发现IgM(+)IgG(+)IgA(-)的血清有8/264(3.0%)例，其中IgG阳性率峰值出现在孕20周～24周，但此期孕妇流产是否与弓形虫感染有关还有待验证；检测发现IgM(+)IgG(+)IgA(+)的血清有15/264(15%)例，其中IgG阳性率峰值出现在孕8周～12周，此期提示遭受弓形虫感染；检测发现IgM(+)IgA(-)IgG(-)的血清13/264(4.9%)例，IgM阳性率峰值出现在孕1周～4周，表明弓形虫近期或急性感染，孕妇流产率增加，然而IgM阳性可持续数年，很容易因其假阳性造成误诊。当孕妇血清中IgM和IgG值太低或者接近临界值时，弓形虫感染情况很难测定[14]。

4 诊断方法

4.1 病原学诊断

妊娠妇女首次弓形虫感染大多数无典型临床症状，有研究表明在确诊弓形虫感染诊断的12名受检孕妇中，仅有6人出现症状 ，常规病原学检测操作复杂，需经取材、染色等步骤，由于所取样本弓形虫含量较低而导致检出率低，临床较少应用。

4.2 免疫学诊断

孕妇弓形虫感染主要是检测孕妇血清IgM、IgG的阳性率。临床检测弓形虫感染抗体常用的检测方法有乳胶凝集试验(LAT)、酶联免疫吸附试验(ELISA)和Sabin-Feldman染色法(DT试验)。LAT是以乳胶微粒为载体的凝集反应，Fan C K等[15]采用LAT检测255份血清样本，其中161例阳性，阳性率为63.1%，特异性为97.1%，敏感性为96.3%。ELISA自动化和标准化较高，可检测弓形虫IgM、IgG、IgA、IgE等抗体及循环抗原(Cag)， Elahian F Z等[16]采用此法测试50例疑似弓形虫感染的孕妇，IgG 阳性率为96%。DT试验是弓形虫特有的血清免疫学诊断法，鉴于其高特异性和敏感性，一直是诊断弓形虫病的金标准，但此法操作复杂，需要较昂贵的仪器设备，适用于实验室等科研场所。

4.3 分子生物学诊断

特异性遗传标记B1基因和529 bp序列广泛应用于弓形虫病诊断和检测中。B1基因有35个拷贝，特异性高，可通过PCR方法进行基因体外扩增，被应用于孕妇产前诊断。有研究采用PCR法分别检测65例和49例先天性弓形虫病，敏感性为81%和100%，用PCR法检测75例先天性弓形虫病，阳性48例，敏感性为64%，认为PCR检测阴性并不能完全排除孕妇弓形虫感染。以弓形虫529 bp序列为靶基因的RT-PCR和以内外两对引物先后扩增为依据的套式PCR，都可以在低浓度的模板中提取较高浓度和纯度的靶片段。Calderaro A等[17]采用套式PCR和RT-PCR法检测46例疑似弓形虫感染的孕妇血清，套式PCR敏感性为103个/mL速殖子，RT-PCR敏感性为102个/mL速殖子，试验表明RT-PCR技术敏感性和特异性更高，可以在较低浓度弓形虫DNA条件下应用。套式PCR分半套式PCR和单管套式PCR两种，半套式PCR检测方法是由Howe等通过弓形虫的SAG2位点设计引物而创造的，被广泛应用于感染弓形虫食物的检测和临床弓形虫病的诊断。孔德祥等[18]用半套式PCR检测方法检测弓形虫P30基因血清样本，最低可以检测到18 fg的弓形虫DNA，但半套式PCR操作复杂，临床诊断较少使用。单管套式PCR最初是一种DNA扩增方法需降低弓形虫污染而建立的PCR方法，郑秀红等[19]研究表明，单管套式PCR检测方法最低可以检测出0.116 fg的标准模DNA，但在人弓形虫病检测和诊断中较少使用。

5 预防

自从20世纪70年代人们对弓形虫生活史进一步研究后，发现猫粪中的弓形虫卵囊会污染土壤，避免接触猫及猫粪和污染的土壤及食物等可有效预防弓形虫感染。生食肉类和未洗干净的水果及蔬菜，饮用未消毒的牛奶和生水也可导致弓形虫感染，因此不食生肉或未烹熟的动物制品、乳制品可以有效预防孕妇弓形虫感染。孕妇弓形虫感染与教育水平有关，教育水平低的孕妇弓形虫感染率较高，而受过健康教育的孕妇要比普通妇女弓形虫感染率低63%[20]，提高教育水平，定期复查和进行孕前健康知识指导，可有效避免先天性弓形虫病的发生。

6 治疗

目前主要采用乙胺嘧啶、磺胺嘧啶和螺旋霉素治疗弓形虫病。螺旋霉素因其毒性较小，血清和胎盘中分布浓度高，可使胎盘中的弓形虫集落数减少60%以上，是孕妇弓形虫感染的首选药物，但研究表明超过58%受感染孕妇外周血中可检测到残留弓形虫DNA[21]。研究人员自1985年-2005年对经螺旋霉素、乙胺嘧啶和磺胺嘧啶治疗的667例弓形虫感染的孕妇进行跟踪调查，发现112例(17%)胎儿发生先天性弓形虫病，其中26%感染胎儿多年后有视网膜脉络膜炎等病症[22]。Oz H S等[23]证实地克株利(杀球灵)可以改善雌性小鼠孕期弓形虫感染的胃肠道症状和预防垂直传播，副作用小，但该药主要用于家禽球虫病的预防和治疗，应用于临床治疗孕妇弓形虫病还有待验证。

7 展望

孕妇弓形虫感染随着孕期检测诊断技术的发展，先天性弓形虫病的发生率逐渐减少，但其发病机制仍有待研究。抗生素是治疗孕妇弓形虫病的重要手段，但孕妇先天遗传背景和免疫力不同，其治疗效果差异较大，且抗生素透过胎盘效力有限，对胎儿治疗效果不理想，且多有贫血、骨髓抑制和降低心率等毒性作用。新药如地克株利由于临床应用实践周期长，不能有效解决当下孕妇弓形虫感染问题，需要进一步考证。此外，接种疫苗预防先天性弓形虫病在动物模型获得成功，但在人类是否可以成功接种疫苗预防孕妇弓形虫病尚未可知，有待进一步研究。

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Progress on Prevention and Treatment of Toxoplasmosis in Pregnant Woman

WANG Xin-lei1，LI Qian1，ZHANG Li1,2，LI Hai-long1,2

(1.Departmentofparasitology,DaliUniversity,Dali,Yunnan, 671000,China; 2.YunnanProvincialKeyLaboratoryofZoonosesControl,Dali,Yunnan, 671000,China)

Toxoplasmosis is a worldwide zoonotic parasitic disease caused byToxoplasmagondii, has been described as the most widespread zoonotic infection of humans and other animals. Most pregnant women infectes withT.gondiishow latent infection, no obvious symptoms. The vertical transmission ofT.gondiiaffects fetal health, causes premature birth, miscarriage, stillbirth, malformations or other adverse pregnancy phenomena. This paper elaborated effects on pregnant women infectingT.gondiifrom epidemiology, infection factors, immunology, diagnosis and treatment, which provided a reference for the prevention and control of toxoplasmosis in pregnant women.

Toxoplasmagondii; infection; pregnant women

2015-11-10

国家自然科学基金项目(81560331)；云南省应用基础研究计划项目(2015FD042)；大理大学博士科研启动基金项目(KYBS201217)；大理大学应用开发研究基金项目(KYYY201302)

王鑫磊(1983-)，男，河北张家口人，硕士，主要从事寄生虫感染与免疫学研究。 *通讯作者

S852.7；R382.5

A

1007-5038(2016)05-0082-04