黄芪颗粒对哮喘患儿Treg和Th17细胞的影响作用*

余德豹，周国忠，吴云路，卢　韬

(绍兴市人民医院/浙江大学绍兴医院临床检验中心，浙江绍兴 312000)



黄芪颗粒对哮喘患儿Treg和Th17细胞的影响作用*

余德豹，周国忠△，吴云路，卢韬

(绍兴市人民医院/浙江大学绍兴医院临床检验中心，浙江绍兴 312000)

摘要:目的探讨黄芪颗粒对哮喘患儿CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg细胞)和辅助性T细胞17(Th17细胞)的影响作用，为临床诊疗提供参考。方法选取2013年7月至2014年5月该院收治的典型初发哮喘患儿60例，随机分为黄芪组(30例)和对照组(30例)，对照组采用普米克都保治疗，黄芪组在普米克都保治疗的基础上加用黄芪颗粒。观察两组治疗疗效和外周血Treg细胞及Th17细胞的变化。结果治疗前两组Treg细胞及Th17细胞百分比比较，差异均无统计学意义(P>0.05)；与治疗前比较，治疗后两组Treg细胞百分比均明显升高，Th17细胞百分比均明显降低，差异均有统计学意义(P<0.05)；且治疗后黄芪组与对照组Treg细胞及Th17细胞百分比比较，差异均有统计学意义(P<0.05)。黄芪组治疗总有效率高于对照组，但差异无统计学意义(P>0.05)。结论黄芪颗粒有着调节Th17细胞和Treg细胞平衡的作用，对哮喘的治疗有一定的效果，并且黄芪颗粒和西药联合使用效果更显著。

关键词:支气管哮喘；黄芪颗粒；CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞；辅助性T细胞17

支气管哮喘是儿童时期常见的反复发作的慢性疾病，是以嗜酸性粒细胞、肥大细胞、T淋巴细胞等炎性细胞浸润及细胞组分参与的气道慢性炎性疾病，近年来其发病率呈上升趋势，且发病年龄日趋小龄化，严重影响小儿的生长发育和身心健康[1]。CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg细胞)和辅助性T细胞17(Th17细胞)属于新发现的CD4+T淋巴细胞亚群，Treg细胞具有免疫抑制作用，而Th17细胞具有强致炎活性，两者在功能上相互拮抗，两者平衡可维持免疫内环境的稳定。近年来有研究发现，Treg细胞和Th17细胞在哮喘的发病机制中扮演着重要角色，弥补了由辅助性T细胞2(Th2细胞)所介导的哮喘机制的不足，从而为哮喘发病机制的研究提供了新方向[2]。黄芪颗粒是补中益气中药，含有黄芪皂苷、黄芪多糖和多种微量元素等，是一种具有免疫调节功能的中成药，可降低患者气道高反应性，调节患者免疫功能，从而对支气管哮喘有一定的治疗作用。但有关黄芪颗粒是否对哮喘患儿Treg细胞和Th17细胞产生影响的文献报道不多。笔者采用黄芪治疗哮喘未控制患儿，疗效满意。现报道如下。

1资料与方法

1.1一般资料2013年7月至2014年5月于本院小儿科哮喘专病门诊就诊及住院的典型初发哮喘患儿60例，男28例，女32例；年龄5～14岁，平均(8.80±2.56)岁；诊断均符合中华医学会儿科学分会呼吸学组制订的《儿童支气管哮喘诊断与防治指南》哮喘诊断标准[3]。所有患儿就诊时检测肺功能，进行儿童哮喘控制测试(C-ACT)，并根据临床症状、肺功能情况给予严重程度和控制水平分级。按《儿童支气管哮喘诊断与防治指南》分级治疗原则[3]，将纳入的所有受试者按随机数字表法分为两组：A治疗组(对照组)30例，其中男16例，女14例；B治疗组(黄芪组)30例，其中男12例，女18例。患儿的监护人均签署知情同意书。

1.2方法

1.2.1治疗方法对照组单纯用普米克都保行规范化的治疗；黄芪组在对照组的基础上，每日加服黄芪颗粒，饭后开水冲服，每次4 g，每日2次。

1.2.2检测方法Treg细胞和Th17细胞均采用FC500流式细胞仪(美国Beckman Coulter公司)进行分析，在治疗前后各采乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)抗凝血2 mL进行细胞计数，按试剂盒说明书进行检测。

1.2.3疗效判定标准与观察指标显效：用药1周内咳嗽消失；有效：用药1～2周咳嗽消失；无效：用药2周以上，仍有咳嗽。总有效率=(显效例数+有效例数)/总例数，并统计两组患儿气喘、咳嗽及哮鸣音消失时间。

2结果

2.1两组临床症状消失时间比较两组哮喘患儿气喘、咳嗽和哮鸣音消失时间比较，差异均无统计学意义(P>0.05)，见表1。

2.2两组临床疗效比较治疗后两组显效率和总有效率比较，差异均无统计学意义(P>0.05)，见表2。

2.3两组外周血T淋巴细胞水平比较Treg细胞和Th17细胞检测结果，见图1(见《国际检验医学杂志》网站主页“论文附件”)。治疗前，两组Treg细胞及Th17细胞百分比比较，差异均无统计学意义(P>0.05)；与治疗前比较，治疗后黄芪组与对照组哮喘患儿Treg细胞百分比均明显上升，Th17细胞百分比均明显下降，差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗后，两组患儿外周血Treg细胞及Th17细胞百分比比较，差异均有统计学意义(P<0.05)。见图2。

3讨论

哮喘的发病机制十分复杂，Th2细胞占优势的Th1/Th2型免疫应答失衡，是哮喘发病的一个重要免疫学机制。哮喘患者Th1型免疫反应减弱而Th2型免疫反应异常增强，出现以产生干扰素(IFN)为标志的Th1细胞反应低下，而Th2细胞分泌的白细胞介素(IL)等细胞因子则促进变应原特异的免疫球蛋白E(IgE)增加和气道嗜酸性粒细胞、肥大细胞浸润，导致气道慢性炎症和气道高反应性[4]。但这一理论不能完全阐明哮喘的发病机制，新近研究显示Treg细胞和Th17细胞也参与了哮喘的病理过程，Treg细胞具有免疫抑制作用，其通过分泌白细胞介素-10(IL-10)和转化生长因子-β(TGF-β)发挥作用，抑制T淋巴细胞增殖及Th1、Th2的细胞因子反应，从而阻止哮喘的发生。Th17细胞属于CD4+T淋巴细胞新亚群，其产生的白细胞介素-17(IL-17)能有效地介导中性粒细胞动员的兴奋过程，从而有效地介导支气管组织的炎性反应，加重哮喘症状[5-6]。此外，有研究显示哮喘机体Treg/Th17细胞功能发生失衡，表现为Treg细胞功能减弱、Thl7细胞功能增强[7-8]。因此，提出Treg细胞和Th17细胞的免疫失衡也是哮喘发病的重要机制之一。

黄芪颗粒是中医名方之一，对机体免疫系统具有显著的调节作用。黄芪颗粒具有益气固表、止汗功效，常用于表虚自汗，易感风邪所致病症，能补肺健脾,增强抵御外邪的能力。临床上已经将其应用于多种疾病的辅助治疗，并取得了一定疗效。既往研究显示，黄芪颗粒可通过影响Thl/Th2细胞因子而发挥治疗哮喘的作用[9]。此外，Treg/Th17在哮喘发病中也起到重要作用，因此关于黄芪颗粒是否可调节哮喘机体Treg/Th17细胞水平的问题值得研究。

在笔者的研究中，将哮喘患儿随机分为两组，对照组采用普米克都保治疗，黄芪组采用普米克都保联合黄芪颗粒治疗。普米克都保的主要成分为布地奈德干粉剂，具有良好的耐受性，吸入后10%的药物进入肺内，约80%在肝脏内被首次代谢。它有明显的抗过敏、抗炎作用，可抑制支气管痉挛，同时可降低组胺及乙酰胆碱引起的气道高反应性，抑制运动诱发哮喘，其引起的全身不良反应要明显低于相同有效剂量下的其他吸入激素。有研究表明，布地奈德可以通过下调Th17及其细胞因子，上调Treg及其细胞因子，从而纠正Th17/Treg失衡,使之向Treg倾斜，有效抑制Th17的过度免疫反应，从而发挥抗炎、解痉、平喘作用[10-11]。本研究结果显示，对照组患儿临床治疗总有效率为80.00%，临床症状有所缓解，且治疗后Treg细胞百分比明显升高、Th17细胞百分比明显降低(P<0.05)，说明与上述研究结果相符。当在普米克都保的基础上加用黄芪颗粒治疗哮喘时，结果显示黄芪组患儿临床治疗总有效率为86.67%，略高于对照组，但差异无统计学意义(P>0.05)，可能是由于采用黄芪颗粒治疗的时间太短，使效果不够明显。但从细胞分子水平上观察，治疗后黄芪组Treg细胞百分比明显升高，Th17细胞百分比明显降低(P<0.05)，且治疗后黄芪组与对照组Treg细胞及Th17细胞百分比比较差异均有统计学意义(P<0.05)。说明黄芪颗粒能在短时间内有效地调节Treg细胞和Th17细胞水平，更重要的是可以看出黄芪颗粒联合普米克都保治疗能更好地调节Treg/Th17免疫失衡,治疗哮喘的效果更为显著。其分子机制可能是黄芪颗粒通过某种因子一方面抑制Th17细胞的表达，使哮喘患儿Th17细胞减少，另一方面促进Treg细胞增殖和分化，使两者达到平衡，从而维持机体免疫内环境的稳定，减少哮喘的发作。

综上所述，黄芪颗粒对哮喘患儿Treg细胞和Th17细胞具有重要的影响作用，可以通过升高Treg细胞水平，下调Th17细胞水平，使Treg/Th17细胞达到平衡。其与普米克都保联合应用的疗效更佳，可减少激素的用量，从而大大减少激素引起的不良反应的发生，这为临床治疗哮喘提供了一条更为有效的途径。

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基金项目：浙江省卫计委科技项目(JSW2013-B031)。

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.05.029

文献标识码：A

文章编号：1673-4130(2016)05-0649-02

(收稿日期：2015-09-24)

△通讯作者,E-mail：zhougzhong@sohu.com。

△通讯作者,E-mail：zhougzhong@sohu.com。

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