自身抗体联合检测对糖尿病肾病诊断的应用价值

王　波,董金颖,常　波

(1.大连市中心医院 检验科，辽宁 大连116001；2.大连医科大学 检验医学院医学检验2010级，辽宁 大连116044；

3.大连市儿童医院，辽宁 大连116001)



自身抗体联合检测对糖尿病肾病诊断的应用价值

王波1*,董金颖2,常波3

(1.大连市中心医院 检验科，辽宁 大连116001；2.大连医科大学 检验医学院医学检验2010级，辽宁 大连116044；

3.大连市儿童医院，辽宁 大连116001)

摘要：目的探讨联合检测抗心磷脂抗体(ACLA)、抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)、抗肾小球基底膜(GBM)抗体及C反应蛋白(CRP)、胱抑素C(Cys C)、微量白蛋白(mAlb)在糖尿病肾病诊断中的应用价值，为糖尿病肾病的临床诊断和治疗提供依据。方法收集56例糖尿病肾病(DN)患者血清标本作为糖尿病肾病组、40例健康人血清作为对照组。采用ELISA法检测标本血清中ACLA，采用IIF法检测ANCA和抗GBM抗体，采用免疫比浊法测定CRP、Cys C和mAlb。结果进行统计学分析。结果糖尿病肾病组血清中ACLA和ANCA的阳性率较对照组显著增高(P<0.01)，抗GBM抗体的阳性率也较对照组明显增高(P<0.05)；DN组CRP、Cys C和U-mAlb的水平较非DN组均明显增高，两组有显著性差异(P<0.01)；联合检测ACLA、ANCA和抗GBM抗体的阳性率较单独检测明显升高(P<0.05或P<0.01)。结论联合检测血清中ACLA、ANCA和抗GBM抗体可提高糖尿病肾病诊断的阳性率，对糖尿病肾病的诊断具有重要应用价值。

关键词：糖尿病肾病; 自身抗体; 抗中性粒细胞胞浆抗体; 抗心磷脂抗体; 抗肾小球基底膜抗体

(ChinJLabDiagn,2016,20:0262)

糖尿病肾病(DN)是由糖尿病本身引起的肾脏损害，可致肾功能减退甚至衰竭，是导致糖尿病患者死亡及致残的主要原因[1]。因此如何早期诊断糖尿病肾病，预防肾功能损害的发生与发展尤为重要。本研究通过对抗心磷脂抗体(ACLA)、抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)和抗肾小球基底膜抗体(抗GBM抗体)的单独及联合检测，对C反应蛋白(CRP)、胱抑素C(Cys C)和尿微量白蛋白(U-mAlb)水平的检测，分析检测结果与糖尿病肾病的相关性，为糖尿病肾病早期诊断和早期治疗提供依据。

1材料和方法

1.1研究对象

选择大连市中心医院2014年12月至2015年3月糖尿病肾病患者56 例(DN组)，均符合1999年WHO制定的糖尿病肾病诊断标准[2]。(除外严重肝胆疾病、恶性肿瘤、高血压病、泌尿系感染、糖尿病酮症酸中毒及心功能不全，无原发性肾病史，否认糖皮质激素服用史)。其中男25例，女31例；年龄34-69岁，平均43.7岁；糖尿病病程5-11年。选择40例同期来我院体检的健康成人(除外肝、胆、肾、心脑血管疾病、糖尿病、营养不良等疾病)作为正常对照组(非DN组)，其中男23例，女17例；年龄27-55岁，平均40.6岁。

1.2仪器与试剂

ANCA IgG检测试剂盒，由欧蒙(杭州)医学实验诊断有限公司提供；ACLA IgA/G/M检测试剂盒，由欧蒙(德国)医学实验诊断股份公司提供；抗GBM抗体lgG检测试剂盒，由欧蒙(杭州)医学实验诊断有限公司提供；Cys C的检测试剂由西门子提供，在全动生化分析仪Advia 2400型上检测，配套校准、质控品均由有限公司提供；CRP、U-mAlb由IMMAGE 800特定蛋白分析仪测定，试剂及配套校准、质控品由Beckman Coulter提供。

1.3标本采集与处理

清晨空腹抽取静脉血5 ml，3 000 r/min离心10 min分离血清,置于-20℃保存待测。采用ELISA法检测血清中的ACLA；采用间接免疫荧光法(IIF)血清中的ANCA和抗GBM抗体；采用免疫比浊法测定血清中CRP、Cys C的含量；按照标准操作规程收集24 h尿液并统计尿量，混匀后取适量采用速率散射比浊法测得U-mAlb的含量，计算出24 h U-mAlb。

1.4数据处理

2结果

2.1DN组和非DN组的CRP、CysC和U-mAlb的水平比较

采用t检验对DN组和非DN组CRP、CysC和U-mAlb的水平比较，DN组CRP、CysC和U-mAlb的水平较非DN组均明显增高，两组有显著性差异，结果见表1。

组别nCRP(mg/dl)CysC(ml/min)U-mAlb(mg/l)非DN组400.79±0.531.13±0.317.58±5.35DN组561.26±0.682.61±1.7643.72±7.98t值3.6495.24424.863P值<0.01<0.01<0.01

2.2DN和非DN患者3种抗体的阳性率比较

采用完全随机设计两样本率四格表χ2检验对DN组和非DN组3种抗体的阳性率进行比较，DN组3种抗体的阳性率均高于非DN组，两组差异有统计学意义，结果见表2。

表2　糖尿病肾病组与对照组ACLA、ANCA和抗GBM抗体的阳性率比较(n/%)

2.3ACLA、ANCA和抗GBM抗体单独检测和联合检测的敏感性、特异性及阴阳性预测值的比较

用四格表计算ACLA、ANCA和抗GBM抗体，3种抗体联合检测对DN诊断的敏感性、特异性和阴阳性预测值，用χ2检验观察3种抗体联合检测与各个抗体单独检测的相关性。 可见ACLA、ANCA和抗GBM抗体3种抗体联合检测的敏感性为62.50%，均高于任意一种指标的单独检测，可提高DN 的早期诊断率。而且与ACLA、ANCA和抗GBM抗体单独检测的敏感度的差异有显著性(**P<0.01，*P<0.05)，体现了抗体联合检测的优越性。且3种抗体联合检测阴阳性预测值也略升高，体现了3种抗体联合检诊断结果相比较于单独检测，与标准诊断方法诊断结果相符合概率更大，结果见表3。

表3　ACLA、ANCA和抗GBM抗体单独检测和联合检测的敏感性(%)、特异性(%)及阴阳性预测值的比较(%)

注：与联合检测比较，*P<0.05，χ2值为5.149；**P<0.01，χ2值分别为16.000和19.394

3讨论

DN是糖尿病主要的并发症，已成为终末期肾脏病的主要病因之一。DN也是糖尿病(DM)微血管病变最危险的并发症之一，在1型糖尿病及2型糖尿病发病率中分别为30%-40%与15%-20%。通常临床上一旦出现持续性蛋白尿，肾功就会呈现进行性恶化[3]。因此应用相关指标对DN能早期明确地诊断、预防、延缓肾脏病变的进展并进行治疗，是提高DN患者生活质量的重要前提。

糖尿病时多种因素可直接或间接导致血管壁受损，内皮细胞受损和血小板活化时ACLA被免疫激活，后者又可加重血管损伤并使前列环素合成减少和血小板聚集，促使血栓形成，产生各种慢性并发症，尤其是血栓并发症[4]。有研究显示在尚无微血管病变的糖尿病患者中ACLA-IgGBI和ACLA-IgMBI就已明显升高，出现肾脏病变则更为明显，达到尿毒症时尤其显著，ACLA进行性增高的程度可能预示糖尿病病变进展的程度，对判断病情及预后有一定的参考价值[5]。本研究中DN组血清ACLA阳性率明显高于正常对照组(P<0.01)，提示ACLA在DN的发生、发展过程中具有重要意义。

肾脏是原发性小血管炎最常受累的部位，而ANCA是系统性血管炎的血清标志性抗体。文献报道，80%原发性小血管炎有肾脏受累的临床表现，病理检查100%有肾脏受累，国内大中心研究表明近90%的患者有受累[6]。在ANCA相关的肾小球病变患者，中性细胞胞浆蛋白酶3可直接损伤肾血管内皮细胞导致严重蛋白尿和进行肾功能损害。ANCA相关性小血管炎在我国并非少见，但基层医师往往认识不足，部分地区和单位尚不能开展检查，容易造成漏诊和误诊。因此在DN患者中，如果出现急性肾功能损害，同时伴有其他多系统损害，要考虑到ANCA相关性血管炎的可能，及时的ANCA检查能早诊断，早治疗，改善预后。本研究中糖尿病肾病组ANCA水平较对照组升高(P<0.01)，说明ANCA的升高对于早期诊断糖尿病肾病具有重要指导意义。

抗GBM抗体相关疾病，多表现为新月体性肾炎，肾小球广泛受累。在中等程度的肾衰竭和镜下血尿患者中出现抗GBM抗体往往预示着重症肾病，抗体阳性意味着患者存在极大的风险，会发展成永久性肾衰竭和致命性的肺出血。而在少尿型肾衰竭中，抗GBM抗体检测阳性则意味着将发展成终末期肾病。有研究发现抗GBM抗体与ANCA作用相似，并且在同一患者中出现相似变化，可能是ANCA使肺出血-肾炎综合征抗原暴露而引起抗GBM抗体疾病[7]。本研究发现DN组血清抗GBM抗体阳性率较正常对照组明显增高(P<0.05)，提示抗GBM抗体在DN的发生、发展中具有一定意义。

Cys C亦称半胱氨酸蛋白酶抑制蛋白C，可自由通过肾小球滤过膜，在近曲小管全部重吸收并迅速代谢分解。肾脏是清除循环Cys C的惟一器官，故血Cys C浓度与肾功能损害程度高度相关，当肾小球出现轻微损伤时，血中Cys C的浓度即可出现升高，并随病情加重而逐渐增高，且血清Cys C不受炎症因素、感染、溶血、肿瘤及肝功能等因素影响，并与性别、年龄、饮食、肌肉量无关，是一种反映肾小球滤过率变化的理想内源性标志物。因此，Cys C可作为肾功能损伤的早期评价指标[8]。本研究结果发现，糖尿病肾病患者血清中Cys C水平升高，并明显高于对照组(P<0.01)。表明肾小球滤过率降低，肾小球存在早期损伤，这可为早期监测糖尿病患者肾脏功能提供重要依据。CRP是反映机体炎症的敏感指标。近来的研究表明，糖尿病患者血清中CRP的水平升高。有研究显示，发现DM患者组血清CRP浓度明显高于正常组，而且升高水平与肾脏损伤程度呈正相关。CRP通过炎症反应引发机体的氧化应激直接损伤肾小球内皮细胞；炎症反应还可促进糖基化及脂化终末产物修饰血管壁蛋白，引起血管壁增厚，弹性下降，促进动脉硬化的发生发展，进而造成肾脏的损伤[9]。本研究检测了糖尿病肾病患者血清中CRP的水平变化，结果显示糖尿病肾病组CRP的水平均升高，与上述文献相一致，说明炎症因素的影响存在于糖尿病肾病中。

U-mAlb是可自由通过肾小球滤过膜的小分子蛋白质，正常人体中mAlb几乎全部被近曲小管重吸收。当肾小球发生病变时，mAlb滤过量超过肾小管最大吸收量，从而引起尿中mAlb含量升高，升高的程度与肾小球损伤的程度呈正相关。因此， U-mAlb检测有助于肾小球病变的早期诊断。同时，白蛋白尿减少也是DN治疗的靶目标之一[10]。本研究中对于U-mAlb的检测结果显示，DN组的U-mAlb含量显著差别于非DN组，验证了尿微量蛋白检测对早期发现糖尿病肾损伤有重要意义。

由于单项检测ACLA、ANCA和抗GBM抗体的各自的敏感性和特异性不同，为了弥补单项检测的不足，本研究对3种抗体联合检测在糖尿病肾病早期诊断中的应用进行了探讨。研究结果显示，ACLA、ANCA和抗GBM抗体3种抗体联合检测的敏感度为62.50%，高于3种抗体单独检测的敏感度，而且与ACLA、ANCA和抗GBM抗体单独检测的敏感度的差异有显著性，体现了抗体联合检测的优越性，表明3种抗体联合检测可提高DN的早期诊断率。且3种抗体联合检阴阳性预测值也略升高，体现了3种抗体联合检诊断结果相比较于单独检测，与标准诊断方法诊断结果相符合的概率更大。

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Application value of combined detection of autoantibodies for diagnosis of diabetic nephropathyWANGBo,DONGJin-ying,CHANGBo.(DepartmentofClinicalLaboratory,DalianMunicipalCenteralHospital,DalianLiaoning116001,China)

Abstract:ObjectiveTo discuss application value of combined detection of anti-cardiolipin antibodies (ACLA),antineutr-ophil cytoplasmic antibodies (ANCA),anti-glomerular basement membrane (GBM) antibodies and the level of C-reactive protein (CRP),Cystatin C(Cys C),urine albumin(mAlb) in patients with diabetic nephropathy (DN) on the diagnosis of diabetic nephropathy,in order to provide references for diagnosis and treatment of diabetic nephropathy.Methods56 cases of DN patients serum (as diabetic nephropathy group),and 40 cases of healthy people serum (as the control group) were collected.ACLA in serum was detected by ELISA,ANCA and anti-GBM antibodies were detected by IIF,and the levels of CRP,Cys C and mAlb were measured by immunoturbidimetry.Then,the positive rate of ACLA,ANCA and anti-GBM antibodies and the correlation of serum levels of CRP,Cys C and mAlb with DN were analyzed statistically.ResultsThe positive rate of ACLA and ANCA in serum of diabetic nephropathy group?is significantly higher than that in control group(P<0.01) and the positive rate of anti-GBM antibodies in DN patients also increased obviously (P<0.05);The levels of Cys C,mAlb and CRP are all significantly higher in DN patients than that in control group (P<0.01); The positive rate of combined detection of ACLA,ANCA and anti-GBM antibodies in DN was higher than that of detection alone (P<0.05 orP<0.01).ConclusionThe combined detection of serum ACLA,ANCA and anti-GBM antibodies can improve positive rate and has important application value for diagnosis of diabetic nephropathy.

Key words:Diabetic nephropathy;Autoantibodies;Antineutrophil cytoplasmic antibodies Anti-cardiolipin antibodies;Anti-GBM antibodies

(收稿日期：2015-04-27)

文献标识码：A

中图分类号：R587.2

文章编号：1007-4287(2016)02-0262-04

*通讯作者