王建花
·实验研究·
高效液相色谱法测定参芪降糖颗粒中五味子甲素、五味子乙素含量
王建花
目的为控制五味子质量,探讨高效液相色谱测定参芪降糖颗粒中五味子甲素、五味子乙素含量的方法。方法色谱柱为Agilent Eclipse Plus-C18柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-水(56:44),流速1ml/min,检测波长250nm,柱温30℃。结果五味子甲素、五味子乙素线性范围分别为5.045~100.8μg/ml (r=0.9999)、5.47~109.4μg/ml (r=0.9999),五味子甲素、五味子乙素平均回收率分别为99.13%、98.66%,相对标准偏差(RSD)分别为0.9%、1.3%。结论高效液相色谱专属性、重复性好,可用于参芪降糖颗粒的质量控制。
参芪降糖颗粒;五味子甲素;五味子乙素;高效液相色谱
参芪降糖颗粒(鲁南厚普制药有限公司)由人参(茎叶)皂苷、五味子、黄芪、山药、覆盆子、麦冬、茯苓、天花粉、泽泻、枸杞子组成[1],具有益气养阴、滋脾补肾的作用,主治消渴症,用于2型糖尿病[2-6]。五味子为方中臣药,五味子甲素、五味子乙素是参芪降糖颗粒的主要有效成分,目前该制剂现行质量标准未进行质量控制,故本文采用高效液相色谱法[7-10]测定参芪降糖颗粒中五味子甲素[11-15]、五味子乙素含量,为该制剂的质量评价提供一定的参考。现报告如下。
1.1 仪器 Agilent 1260型高效液相色谱仪(美国),Sartorius CPA225D 分析天平(0.1mg)(瑞士赛多利斯公司)。
1.2 试药 参芪降糖颗粒(批号:00116003、00116004、00116005),五味子甲素(批号:110764-200408)、五味子乙素(批号:110765-2007107)均来自中国食品药品检定研究院,需五氧化二磷干燥12h以上。乙腈为色谱纯[16],水为超纯水。
2.1 对照品溶液的配制 精密称取五味子甲素、五味子乙素适量,加甲醇分别制成每1毫升中0.2018、0.2188mg的溶液,作为对照品贮备液Ⅰ、Ⅱ。精密量取贮备液各5ml置20ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,即得。
2.2 供试品溶液的制备 精密称取参芪降糖颗粒3g置锥形瓶中,精密加入甲醇10ml,称重,超声处理30min,用甲醇补足减失重量,摇匀,用以0.22μm微孔滤膜滤过,取续滤液即得。
2.3 色谱条件及系统适应性 色谱柱Agilent Eclipse Plus-C18(250mm×4.6mm,5μm),柱温30℃,流动相:乙腈-水(56:44),流速1.0ml/min,检测波长250nm。参考《中国药典》2015年版一部五味子【含量测定】项下,选择检测波长250nm。取对照品溶液和供试品溶液各10μl,供试品中五味子甲素、五味子乙素主峰与其他组分分离良好,无明显干扰。见图1,图2。
图1 对照品
图2 样品
2.4 标准曲线 分别精密吸取对照贮备溶液适量,加甲醇配成系列标准溶液,浓度依次为五味子甲素:5.045、25.22、50.45、75.68、100.8μg/ml,五味子乙素:5.470、27.35、54.70、82.05、109.4μg/ml,分别进样10μl,以对照品浓度(X)为横坐标,峰面积(Y)为纵坐标绘制标准曲线,结果表明五味子甲素在5.045~100.8μg/ml范围内线性关系良好,其回归方程为Y=20.457X-1.255(r=0.9999);五味子乙素在浓度为5.47~109.4μg/ml范围内线性关系良好,其回归方程为Y=16.905X-2.7495(r=0.9999)。
2.5 精密度考察 精密吸取同一混合对照品溶液(50μg/ml) 10μl,依法测定。结果五味子甲素、五味子乙素峰面积的RSD分别为0.7%、0.9%(n=6)。试验表明,本法精密度良好。
2.6 重复性考察 平行制备6份供试品溶液(批号:150601),分别进样10μl,按“2.3”项下色谱条件依法测定,记录主峰峰面积,结果平均每克中五味子甲素、五味子乙素平均含量分别为0.1567、0.2472mg,RSD分别为1.5%、1.0%(n=6)。试验表明,本法重复性良好。
2.7 稳定性考察 按“2.2”供试品溶液的制备项下配置供试品溶液一份(批号:150601),分别于0、2、4、8、12、24h时进行测定,考察主峰峰面积,结果五味子甲素、五味子乙素峰面积的RSD分别为0.8%、0.9%(n=6)。表明供试品溶液在制备后24h内较稳定。
2.8 准确度考察 精密吸取6份已知浓度的参芪降糖颗粒1.5g,置锥形瓶中,精密加对照品储备溶液Ⅰ1.2ml,对照品贮备液Ⅱ 1.8ml分别加入6份供试品中,分别精密加甲醇7ml,摇匀,称重,超声30min,放冷,用甲醇补足减失重量。以0.22μm微孔滤膜滤过,按“2.4”项下色谱条件依法测定,记录峰面积,计算加样回收率。结果表明,本法准确度较好。见表1。
表1 回收率测定结果
2.8样品含量测定 取三批次供试品(批号:151109①、151109②、151109③),按“2.2”项制备,按“2.3”项下色谱条件依法测定,计算含量。结果五味子甲素含量分别为0.1571、0.1549、0.1566mg/g;五味子乙素含量分别为0.2472、0.2459、0.2461mg/g。
参芪降糖颗粒原标准中未考察人参、黄芪一些成分进行了质量控制,本实验增加了对五味子甲素、五味子乙素进行含量测定。高效液相色谱法准确度高、精密度好、稳定性佳、简单易行,可考虑补充到该制剂质量标准中。
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Determination of schizandrin A and schizandrin B contents in Shenqi Jiangtang granule by high performance liquid chromatography
WANG Jian-hua.Nanjing City Food and Drug Inspection Institute,Nanjing 210000,China
ObjectiveTo investigate determination method of schizandrin A and schizandrin B contents in Shenqi Jiangtang granule by high performance liquid chromatography,in order to control schisandra chinensis quality.MethodsAgilent Eclipse Plus-C18column (250mm×4.6mm,5μm) was applied,with acetonitrilewater (56:44) as mobile phase by 1ml/min as flow velocity,determine wavelength as 250nm and column temperature as 30℃.ResultsLinearity range of schizandrin A and schizandrin B were respectively 5.045~100.8μg/ml (r=0.9999) and 5.47~109.4μg/ml (r=0.9999).Schizandrin A and schizandrin B had average recovery rate respectively as 99.13% and 98.66%,with ralative standard deviation (RSD) as 0.9% and 1.3%.ConclusionHigh performance liquid chromatography shows good specificity and repeatability,and it is feasible to control Shenqi Jiangtang granule quality.
Shenqi Jiangtang granule; Schizandrin A; Schizandrin B; High performance liquid chromatography
10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2016.18.196
2016-08-17]
210000南京市食品药品监督检验院