HER-2在涎腺肿瘤中的蛋白表达、基因扩增及临床意义

李峰 孙晓菊

HER-2在涎腺肿瘤中的蛋白表达、基因扩增及临床意义

李峰 孙晓菊

目的探讨涎腺良性肿瘤及恶性肿瘤中HER-2基因扩增、蛋白表达及临床意义。方法采用免疫组化检测43例涎腺恶性肿瘤及10例良性肿瘤中HER-2蛋白表达；采用免疫荧光原位杂交(FISH)检测HER-2基因扩增情况。结果HER-2蛋白表达于涎腺良性肿瘤及恶性肿瘤中的阳性表达率分别为72.09%、10.00%,恶性肿瘤明显高于良性肿瘤(P＜0.05)；HER-2基因扩增在涎腺良性肿瘤及恶性肿瘤中的阳性率分别为20.00%、76.74%,恶性肿瘤明显高于良性肿瘤(P＜0.05)。结论涎腺恶性肿瘤中HER-2基因扩增及蛋白表达阳性率均高于涎腺良性肿瘤,可作为其分子靶向治疗的靶点。

涎腺肿瘤；HER-2基因；免疫组织化学

随着对涎腺肿瘤研究的不断深入,遗传学检查对于涎腺肿瘤诊断和治疗具有越来越不容忽视的重要意义。HER-2为Ⅰ型生长因子受体中的一种穿膜糖蛋白,也叫C-erbB-2或neu,此基因位于17号染色体的q11.2～q12上,在C-erbB-2和表皮生长因子受体(EGFR)之间存在交叉通讯。HER-2的生物学是复杂的,与细胞的分化和增生都有关系［1］。由于这种扩增的基因可预示对人HER-2单克隆抗体反应具有治疗意义,因此评估肿瘤细胞中HER-2的状态有十分重要的临床意义。现将研究结果报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集本院2002年1月～2015年6月43例涎腺恶性肿瘤存档蜡块。其中女19例,男24例。年龄26～78岁,平均年龄56.3岁。黏液表皮样癌11例、腺泡细胞癌11例、腺样囊性癌11例、多形性低度恶性腺癌10例。腮腺14例、颌下腺10例、舌下腺7例,舌、腭部、唇等小涎腺12例。良性肿瘤10例,其中腺淋巴瘤3例、多形性腺瘤4例、基底细胞腺瘤3例。将收集蜡块重新制作苏木精-伊红染色(HE)切片,并经病理科医师重新确诊。

1.2 试剂与方法

1.2.1 免疫组织化学染色方法检测 鼠抗人HER-2单克隆抗体、二抗和即用型二步法PV检测试剂盒、DAB显色剂,抗体稀释倍数为1：100,按说明书步骤进行操作。

1.2.2 FISH方法 FISH样本制备→探针制备→探针标记→杂交→(染色体显带)→荧光显微镜检测→结果分析。在Olympus BX51型荧光显微镜下观察,以＞75%的细胞核内≥2个HER-2信号判断杂交成功。

1.2.3 判断标准 免疫组织化学结果判读：阳性细胞比例＜10%为阴性,10%～30%为弱阳性,＞30%为强阳性。

荧光原位杂交结果判读：Ratio＜1.8为阴性结果,提示该样本无HER-2基因扩增；Ratio＞2.2为阳性结果,提示样本中HER-2基因发生扩增；Ratio1.8～2.2时,可以选择增加计数细胞至100个,或重做FISH实验来判断最终结果。

1.3 统计学方法 采用SPSS17.0统计学软件对数据进行统计分析。计数资料以率(%)表示,采用χ2检验。P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 HER-2/neu基因产物在涎腺肿瘤中的表达情况：HER-2/neu蛋白主要定位于细胞膜,主要呈圆环状,棕黄色,部分区域可表达于细胞质中。涎腺良性、恶性肿瘤HER-2蛋白阳性表达率分别为10.00%、72.09%。涎腺恶性肿瘤中HER-2蛋白表达明显高于涎腺良性肿瘤(P＜0.05)。见表1。

2.2 HER-2/neu基因在涎腺肿瘤中的扩增情况：HER-2基因扩增,表现为数十个绿色信号点,聚集成簇,不扩增表现为正常两个绿色信号点。涎腺良性、恶性肿瘤基因扩增阳性率分别为20.00%、76.74%,涎腺恶性肿瘤中HER-2基因扩增明显高于涎腺良性肿瘤(P＜0.05)。见表1。

表1 HER-2在涎腺肿瘤中的蛋白表达、基因扩增比较(n,%)

3 讨论

肿瘤的发生是由于癌基因的激活或抑癌基因的丢失及失活导致其所编码蛋白发生质和量的改变,干扰细胞生长、分化及代谢等重要过程,使得正常细胞发生转变的结果［2］。头颈部恶性肿瘤中涎腺癌为较常见类型,目前临床对涎腺癌治疗仍以手术切除为主、放化疗为辅的综合治疗,但术后常复发或转移。因此寻找新型的治疗方法,如分子靶向治疗已成为涎腺癌治疗的研究新热点［3］。

研究证实,HER-2在多种恶性肿瘤中有基因扩增及高表达,与肿瘤发生、发展、转移及侵袭密切相关。临床前期研究发现HER-2高表达及基因扩增加可提高涎腺恶性肿瘤的转移潜能,表现出较多的侵袭性临床病理特征［4］。本组实验对10例涎腺良性肿瘤及43例涎腺恶性肿瘤进行免疫组织化学及免疫荧光方法检测HER-2蛋白表达及基因扩增情况,结果显示涎腺恶性肿瘤中HER-2蛋白表达及基因扩增均明显高于涎腺良性肿瘤,差异具有统计学意义(P＜0.05)。目前针对HER-2受体蛋白的单克隆抗体Herceptin与化疗药物联合使用可以明显增加患者治疗的敏感性［5］。由此推测HER-2蛋白表达及基因扩增可用于涎腺肿瘤常规的病理检查,可作为涎腺恶性肿瘤术后治疗方案的参考依据之一。

［1］吕克文,金宝忠,赵尔杨.HER-2基因在涎腺恶性肿瘤中表达及临床意义的研究.口腔医学研究,2007,23(5):498-501.

［2］王红霞,陈昊,闫蓉,等.涎腺癌组织中EGFR和HER-2表达及临床意义.临床与实验病理学杂志,2014,30(8):900-904.

［3］陈昊,王红霞,闫蓉,等.3种恶性涎腺上皮性肿瘤EGFR和HER-2表达的差异及意义.广东医学,2013,34(21):3255-3258.

［4］郑美云,沈国婴,陈艺玲,等.不同基因片段的HER-2抗体在免疫组化上的应用.诊断病理学杂志,2015,22(5):39.

［5］刘红芹,王冬梅,屈浩,等.特异性HER2单克隆抗体的制备及初步应用.细胞与分子免疫学杂志,2010,26(5):456-458.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2016.01.080

2015-10-09］

110016 辽宁省沈阳市人民医院口腔科

孙晓菊