小茴香挥发油贴剂的处方前研究

陈雯雯， 云　琦， 陶　亮， 高晓黎

(1新疆医科大学药学院, 乌鲁木齐　830011； 2新疆特丰药业股份有限公司, 乌鲁木齐　830054)



小茴香挥发油贴剂的处方前研究

陈雯雯1， 云琦2， 陶亮2， 高晓黎1

(1新疆医科大学药学院, 乌鲁木齐830011；2新疆特丰药业股份有限公司, 乌鲁木齐830054)

摘要：目的对小茴香挥发油进行处方前研究，为设计优良的处方奠定基础。方法利用高效液相色谱法(HPLC)建立测定小茴香挥发油的分析方法，并进行小茴香挥发油的平衡溶解度、油水分配系数、稳定性试验、原辅料相容性试验等处方前研究。结果小茴香挥发油在2.00～120.24 μg/mL范围内线性关系良好。小茴香挥发油在蒸馏水、生理盐水、不同pH(2.0、5.0、6.8、7.4、8.0)磷酸盐缓冲液(PBS)中的平衡溶解度分别为21.47、22.89、25.55、16.08、18.29、27.36、28.94 μg/mL；在无水乙醇、95%乙醇、乙酸乙酯、丙酮、石油醚中极易溶解。小茴香挥发油的油水分配系数(log P)为3.59。小茴香挥发油稳定性试验及小茴香挥发油贴剂原辅料相容性试验第5天及第10天含量测定结果表明其受条件影响：温度>光照>湿度。结论建立的分析方法准确可靠。本研究表明小茴香挥发油几乎不溶或不溶于水及磷酸盐缓冲液，极易溶解于部分有机溶剂。小茴香挥发油在高温和光照下不稳定，易降解；在高湿下较稳定。

关键词：小茴香挥发油； 平衡溶解度； 油水分配系数； 稳定性； 原辅料相容性

小茴香的维吾尔医用名为阿日帕巴地洋(Arapaibedian)，为伞形科多年生草本植物茴香(Foeniculum vulgare Mill.)的干燥成熟果实。小茴香挥发油为其经水蒸气蒸馏法提取的挥发油。2010 版《中国药典》一部记载[1]：小茴香散寒止痛，理气和胃。用于寒疝腹痛、睾丸偏对坠、痛经、少腹冷痛、脘腹胀痛、食少吐泻。挥发性成分是小茴香果实中的主要成分，含3～6%。小茴香挥发性成分主要是反式茴香脑，约占挥发油含量的65%～78%。临床实验表明，小茴香热敷肚脐治疗术后腹胀、肠梗阻、腹泻、痛经等均具有很好的疗效[2-4]。药效学实验表明，小茴香挥发油热敷大鼠脐部有预防术后腹腔黏连的作用，并有促进渗透的作用和促进胃肠蠕动的作用[5]、抗炎镇痛的作用[6]。本研究建立小茴香挥发油的HPLC分析方法，进行小茴香挥发油的平衡溶解度、油水分配系数、稳定性及原辅料的相容性等处方前研究。这对药物与制剂的开发有重要的指导意义。

1仪器与试药

1.1仪器LC-20AD高效液相色谱仪(日本岛津)，PHS-3C精密pH计(上海雷磁仪器厂)，THZ-82水浴恒温振荡器(江苏省金坛市仪器制造有限公司)，BSA224S万分之一电子天平(赛多利斯科学仪器北京有限公司)。

1.2试药小茴香挥发油(自制)，反式茴香脑对照品(梯希爱上海化成工业发展有限公司，IORRJ-SP)，生理盐水(国药集团新疆制药有限公司，20140208)，无水乙醇(天津市永晟精细化工有限公司，20150305)，乙腈(SIGMA-ALDRICH，色谱纯)，甲醇(SIGMA-ALDRICH，色谱纯)，冰乙酸(天津市福晨化学试剂厂，20140225)，辛癸酸甘油酯(河南正通化工有限公司，20131202)，二乙二醇单乙基醚(嘉法狮上海贸易有限公司)。

2方法与结果

2.1小茴香挥发油中反式茴香脑分析方法的建立

2.1.1色谱条件色谱柱：ZORBAX-C18(4.6×150 mm，5 μm)；流动相：乙腈∶水∶冰乙酸=55∶45∶0.03；流速：0.8 mL/min；检测波长：260 nm；柱温：室温(25℃)；检测时间：25 min；进样量：5 μL。

2.1.2对照品溶液的制备精密称定反式茴香脑对照品50 mg于100 mL容量瓶中，用无水乙醇定容至刻度，摇匀，即得对照品储备液。精密吸取对照品储备液2 mL于25 mL容量瓶中，用无水乙醇定容至刻度，摇匀，即得对照品溶液。

2.1.3供试品溶液的制备精密称定小茴香挥发油50 mg于50 mL容量瓶中，用无水乙醇定容至刻度，摇匀，精密吸取2 mL于25 mL容量瓶中，用无水乙醇定容至刻度，摇匀，即得供试品溶液。

2.1.4标准曲线的建立精密吸取对照品储备液0.1、0.3、0.5、1、2、4、6 mL于25 mL容量瓶中，用无水乙醇定容至刻度，摇匀，得系列浓度溶液，进入HPLC检测，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标进行线性回归，得回归方程：Y=48 184X+5 482.2，r=0.999 9。结果表明：小茴香挥发油在2.00～120.24 μg/mL范围内线性关系良好。

2.1.5精密度试验精密吸取同一份对照品溶液5 μL，连续进样6次，结果反式茴香脑峰面积的RSD为0.14%，精密度符合要求。

2.1.6重复性试验精密吸取6份供试品溶液，各5 μL，进入HPLC检测，测定反式茴香脑含量，结果其含量的RSD为0.65%，重复性符合要求。

2.1.7稳定性试验精密吸取同一份供试品溶液5 μL，分别于0、2、4、6、8、10、12、24、36、48 h进入HPLC检测，结果反式茴香脑含量的RSD为0.21%，稳定性符合要求，说明供试品溶液在48 h内稳定。

2.1.8加样回收率试验取已知浓度的供试品溶液9份，精密吸取供试品溶液浓度的80%、100%、120%的对照品储备液加入供试品溶液中，分别配制低、中、高浓度的混合供试品溶液，用无水乙醇定容至刻度，摇匀，进入HPLC检测，测定反式茴香的含量，计算回收率低、中、高3个浓度分别为101.16%、100.91%、100.00%，RSD分别为0.67%、0.52%、0.11%，回收率符合要求，结果见表1。

表1　小茴香挥发油加样回收率

2.2平衡溶解度的测定很多药物是有机弱酸或有机弱碱，它们以分子型存在时有较大的透过性，而离子型药物难以通过皮肤[7]。表皮内pH值为4.2～5.6，真皮内pH值为7.4左右。透皮制剂中常用磷酸盐缓冲液，因此选择pH为2.0、5.0、6.8、7.4、8.0的磷酸盐缓冲液作为溶剂，测定小茴香挥发油在常用溶剂及不同pH值磷酸盐缓冲液中的溶解度。取过量的小茴香挥发油于具塞试管中，分别加入20 mL的蒸馏水、生理盐水、不同pH2.0、5.0、6.8、7.4、8.0磷酸盐缓冲液，置于37℃的恒温水浴振荡器中振荡24 h，取饱和溶液进入HPLC检测，计算小茴香挥发油在不同溶剂中的平衡溶解度。结果见表2，小茴香挥发油在水中和不同pH磷酸盐缓冲液中的溶解能力极小。另外，根据2010版《中国药典》测定溶解度方法及评价标准，小茴香挥发油在常用溶剂无水乙醇、95%乙醇、乙酸乙酯、丙酮、石油醚中极易溶解。

表2　小茴香挥发油平衡溶解度测定结果

2.3油水分配系数的测定油水分配系数为药物在油相和水相中平衡浓度比值的对数值，本试验采用摇瓶法[8]测定小茴香挥发油的油水分配系数。精密吸取100 mL蒸馏水和100 mL正辛醇于具塞锥形瓶，将锥形瓶放置水浴恒温(20～25℃)振荡器，相互饱和24 h，加入50 mg小茴香挥发油，继续放入恒温振荡器上振荡24 h使之达到平衡，静置分层；分别精密吸取正辛醇相和水相各2 mL至25 mL容量瓶中，无水乙醇定容，过滤，进入HPLC分别测定正辛醇相和水相中药物浓度，按公式计算油水分配系数logP值：log P= log P(C0/CW)，式中C0为正辛醇相中药物浓度，Cw为水相中药物浓度。结果测得小茴香挥发油在正辛醇相中浓度为313.00 μg/mL，在水相中浓度为0.08 μg/mL。因此小茴香挥发油的油水分配系数log P为3.59。

2.4小茴香挥发油定性试验参照《中国药典》2010年版第一部附录XIX C《原料药与药物制剂稳定性试验指导原则》及《化学药物(原料药和制剂)稳定性研究技术指导原则》原料药稳定性考察项，进行小茴香挥发油的影响因素试验[9]。以小茴香挥发油的外观性状、含量测定为评价指标，考察温度、湿度及光照对小茴香挥发油的变化影响。

2.4.1高温试验称取小茴香挥发油8份，每份2 mL，置称量瓶中，加盖密封，于60℃和40℃烘箱中放置10 d，分别于第0天、第5天、第10天取样，按考察项目(性状、含量测定)要求检测。结果温度可显著影响小茴香挥发油的稳定性，温度越高，其含量变化率越大，外观形状无变化，见表3。

表3　小茴香挥发油高温试验结果

2.4.2高湿度试验称取小茴香挥发油8份，每份2 mL，置称量瓶中，加盖密封，在25℃下分别置于RH92.5%(KNO3饱和水溶液)和RH(75±1)%(NaCl饱和水溶液)的恒温密闭容器中放置10 d，分别于第0天、第5天、第10天取样，按考察项目(性状、含量测定)要求检测。结果RH92.5%和RH(75±1)%对小茴香挥发油的稳定性影响不显著，其含量变化率较小，外观形状无变化，见表4。

表4　小茴香挥发油高湿度试验结果

2.4.3强光照射试验称取小茴香挥发油4份，每份2 mL，置称量瓶中，加盖密封，放在装有日光灯的光照箱或其他适宜的光照装置内，于照度为(4 500±500)Lx的条件下放置10 d，分别于第0天、第5天、第10天取样，按考察项目(性状、含量测定)要求检测，特别要注意供试品的外观变化。结果光照对小茴香挥发油的稳定性有一定影响，其含量略有下降，外观形状无变化，见表5。

表5　小茴香挥发油强光照射试验结果

2.5小茴香挥发油与辅料相容性试验参照《中国药典》2010年版第一部附录XIX C《原料药与药物制剂稳定性试验指导原则》及《化学药物(原料药和制剂)稳定性研究技术指导原则》原料药稳定性考察项，进行小茴香挥发油提取物与辅料的相容性试验。以挥发油和不同稀释剂混匀后的外观性状、含量测定为评价指标，考察温度、湿度及光照对其的影响。

2.5.1高温试验取挥发油及选定的稀释剂，以2∶3的比例混合置于称量瓶中，加盖密封，于60℃和40℃烘箱中放置10 d，分别于第0天、第5天、第10天取样，以小茴香挥发油中反式茴香脑含量为指标进行检测。结果温度可显著影响反式茴香脑的含量，温度越高，其含量变化率越大，外观形状无变化，见表6、7。

2.5.2高湿度试验取挥发油及选定的稀释剂，以2∶3的比例混合置于称量瓶中，加盖密封，在25℃下分别置于RH92.5%(KNO3饱和水溶液)和RH(75±1)%(NaCl饱和水溶液)的恒温密闭容器中放置10 d，分别于第0天、第5天、第10天取样，以反式茴香脑含量为指标进行检测。结果RH92.5%和RH(75±1)%对反式茴香脑含量影响不显著，其含量变化率较小，外观形状无变化，见表8、9。

2.5.3强光照射试验 取挥发油及选定的稀释剂，以2∶3的比例混合置于称量瓶中，加盖密封，放在装有日光灯的光照箱或其他适宜的光照装置内，于照度为(4500±500) Lx的条件下放置10 d，分别于第0天、第5天、第10天取样，以反式茴香脑含量为指标进行检测。结果光照对反式茴香脑含量影响有一定影响，其含量略有下降，外观形状无变化，见表10。

表6　原辅料相容性高温试验结果(60℃)

表7　原辅料相容性高温试验结果(40℃)

表8　原辅料相容性高湿度试验结果(RH92.5%)

表9　原辅料相容性高湿度试验结果[RH(75±1)%]

表10　原辅料相容性强光照射试验结果

3讨论

本研究建立了小茴香挥发油HPLC检测方法，其方法准确、可靠、专属性好。小茴香挥发油平衡溶解度研究结果表明，小茴香挥发油几乎不溶或不溶于水及不同pH磷酸盐缓冲液；极易溶解于无水乙醇、95%乙醇、乙酸乙酯、丙酮、石油醚等有机溶剂中，且可以任一比例互溶，不存在平衡溶解度。

理想的经皮吸收药物的油水分配系数对数值为1～4，也有许多学者的研究表明[10]药物透皮吸收的

最佳分配系数log P为2～3。本研究测定的小茴香挥发油的油水分配系数log P为3.59，因此小茴香挥发油这一脂溶性药物较适合做透皮吸收制剂。小茴香挥发油稳定性试验及小茴香挥发油贴剂原辅料相容性试验第5天、第10天含量测定结果表明其受条件影响：温度>光照>湿度，说明小茴香挥发油在高温条件下极其不稳定，随温度的升高，反式茴香脑含量有显著变化；光照下较不稳定，反式茴香脑含量略有下降；高湿对其影响不大。因此，在今后的处方设计及制备工艺中，要尽量避免高温和光照，以免小茴香挥发油有效成分的损失。

参考文献：

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M]. 北京：中国医药科技出版社，2010：44.

[2]韩惠琴，王素花，黄瑞珍.小茴香干热敷治疗术后腹胀临床体会[J]. 中国实用医药，2010，5(27)：116-118.

[3]方新社.食盐加小茴香治疗肠梗阻62例[J]. 中国中西医结合消化杂志，2006，14(5)：339-342.

[4]谭闽英，李 霞.小茴香方治疗痛经86例[J]. 中国民间疗法，2001，9(6)：50-51.

[5]滕光寿，王成果，毛峰峰，等.小茴香挥发油对术后腹腔黏连的预防作用探讨[J]. 国际中医中药杂志，2011，33(2)：118-120.

[6]滕光寿，刘曼玲，毛峰峰，等.小茴香挥发油的抗炎镇痛作用[J]. 现代生物医学进展，2011，11(2)：344-347.

[7]崔福德.药剂学[M]. 北京：人民卫生出版社，2011:456-457.

[8]饶小勇，尹姗，张国松，等.HPLC测定白头翁皂苷D的油水分配系数及平衡溶解度[J]. 中国中药杂志，2014，39(9)：1593-1595.

[9]张磊，程雪梅，玄振玉，等.骆驼蓬总生物碱提取物与常用药剂辅料相容性研究[J].中国药学杂志，2013，48(1)：43-46.

[10]苏德森，王思玲.物理药剂学[M]. 北京：化学工业出版社，2004：114-115.

(本文编辑施洋)

Pre-formulation study on fennel oil patch

CHEN Wenwen1， YUN Qi2， TAO Liang2， GAO Xiaoli1

(1CollegeofPharmacy，XinjiangMedicalUniversity，Urumqi830011，China；

2XinjiangTefengPharmaceuticalCo.Ltd，Urumqi830054，China)

Abstract:ObjectiveTo study the pre-formulation of fennel oil so as to design the formulation. Methods A high performance liquid chromatography (HPLC) method was established to determine the content of fennel oil. Based on the method, equilibrium solubility, oil/water partition coefficient, stability test and material compatibility on fennel oil were investigated. ResultsA good linear relationship was obtained at the range from 2.00 to 120.24 μg/mL of fennel oil. The equilibrium solubility of fennel oil in distilled water, saline, and different pH (2.0, 5.0, 6.8, 7.4, 8.0) PBS were 21.47, 22.89, 25.55, 16.08, 18.29, 27.36, 28.94 μg/mL， respectively. The fennel oil was easily soluble in ethanol, 95% ethanol, ethyl acetate, acetone, and petroleum ether. The oil/water partition coefficient (log P) of fennel oil was 3.59. The results of stability test and material compatibility test in 5 and 10 days showed that the content of fennel oil was affected by these conditions: temperature>light>humidity. ConclusionThe HPLC assay was accurate and reliable. The study showed that fennel oil was almost insolubled in water and PBS, and it was easily soluble in some organic solvents. It proved that the fennel oil was unstable and decomposed easily under high temperature and light condition, and it was more stable under high humidity.

Keywords:fennel oil; equilibrium solubility; oil/water partition coefficient; stability; material compatibility

[收稿日期：2015-9-12]

doi:10.3969/j.issn.1009-5551.2016.02.015

中图分类号：R943

文献标识码：A

文章编号：1009-5551(2016)02-0189-05

作者简介：陈雯雯(1991-)，女，硕士，研究方向：新药研发。通信作者：高晓黎，女，教授，博士生导师，研究方向：新药研发，E-mail:xli_g@sina.com。

基金项目：新疆维吾尔自治区高技术研究发展项目(201417110)