2012-2013年北京市密云县流感病原学分布分析



2012-2013年北京市密云县流感病原学分布分析

张巍巍1，高雷1，冯宝立1，郑兰紫1，张丽荣2*

(1.北京市密云县疾病预防控制中心，北京101500；2.吉林大学中日联谊医院 病理科)

流感是由流感病毒引起的急性呼吸道传染病，对其进行监测可以及时掌握流感病毒流行株的活动情况，并及早发现变异株，为防控政策的制定提供参考依据。2013年，全球首次发现新亚型H7N9型禽流感病毒[1-2]，针对人感染H7N9禽流感疫情防控工作，北京市卫生局组织制定了《人感染H7N9禽流感疫情防控方案》。密云县作为北京市流感监测网络成员之一，2012年在北京市流感监测方案基础上，继续开展流感监测工作，同时从2013年4月11日开始注重人感染H7N9禽流感的检测，旨在掌握密云县流感病毒流行规律及其流行病学特征，以保护人民群众的身体健康和生命安全。现将监测结果初步分析如下。

1材料与方法

1.1监测病例来源

依据流感样病例定义，于密云县医院门诊每周采集10-20件流感样病例患者的咽拭子。于24 h内冷藏送至本实验室，24 h内未能检测的-80℃保存。具体采集方法参照文献[3]。

1.2试剂

MDCK细胞由北京市疾病预防控制中心提供；抗 A(H1N1)亚型血清,抗 A(H3N2)亚型血清,抗 B型 Yamagata系病毒血清,抗B型Victoria系病毒血清,由国家疾病预防控制中心提供；豚鼠血球由兰伯瑞公司提供；RNA 提取试剂盒(QIAGEN RNeasy Mini Kit) 由QIAGEN公司提供；Real-Time PCR体系试剂盒(Taqman One step RT-PCR Kit)由美国ABI公司提供。

1.3病毒分离与鉴定

咽拭子标本完全混匀后，接种到生长成片的 MDCK 细胞，34℃ 5% CO2培养箱内吸附2 h， 37℃ 5%CO2培养箱中培养,每日观察细胞病变(CPE)。培养3-4 d后,用1%豚鼠血球进行微量血凝试验 (HA) 检测病毒的存在及滴度。将 HA≥1∶8的培养液用血凝抑制试验 (HI) 进行流感病毒滴度和型别鉴定。HA<1∶8的培养物继续细胞传代培养,直至HA≥1∶8 时再进行病毒的鉴定，连续传代2次以上，HA仍<1∶8的细胞份礼物，可以采用Real-Time PCR 方法进行核酸检测。具体方法详见文献[3]。4月11日开始，若鉴定病毒为甲型流感病毒，要采用Real-Time PCR方法对其进行人感染H7N9禽流感的检测。

Real-Time PCR方法的反应体系总体积为25 μl：引物(40 μM)0.5 μl；探针(10 μM)0.5 μl；酶 1.0 μl；2×Master Mix 12.5 μl；Rnase Free H2O 5.375 μl；40× MultiScribe and RNAase Inhibitor Mix 0.625 μl；RNA 模板5 μl。反应条件:50℃反转录30 min；95℃预热15 min；95℃变性15 sec；55℃扩增45 sec；在45℃进行单点荧光检测，共45个循环。实时荧光检测有标准的S型扩增曲线，并且Ct值<30可以判断样本为阳性。

1.4统计学处理

数据采用SPSS 13.0 进行数据统计处理，比较组间阳性率差异，P<0.05具有统计学意义。

2结果

2.1流感病毒分离阳性率变化趋势

2012年10月至2013年5月用MDCK细胞分离培养流感病毒，共检测样本618件，分离毒株121株，分离阳性率为19.6%。经血凝抑制试验和Real-Time PCR方法鉴定其型别分布为甲型H3N2亚型阳性68件(占56.2%)，甲型H1N1亚型阳性53件(占43.8%)，乙型流感阳性0件(占0%)，人感染H7N9流感阳性0件(占0%)。

本研究为了解病毒变化趋势，对监测样本不同型别的病毒分离阳性率按照不同月份进行分析，结果显示2012年12月份阳性率最高，为37.7%，其次为2013年1月份，阳性率为32.1%，2013年5月份阳性率最低，为0%。进一步分析所分离的流感病毒阳性分布情况，结果显示监测期间以甲型流感流行为主，同时存在甲型H3N2亚型和甲型H1N1亚型流感病毒，但不同亚型流行时间有所不同。10月至次年3月主要以甲型H3N2亚型流感病毒为主，并于2012年12月达到高峰。而甲型H1N1流感病毒主要集中在2012年12月至次年4月，于2013年1月达到高峰。乙型流感病毒和人感染H7N9流感病毒均未检出。监测期间各种流感病毒亚型在不同月份中的分布趋势见图1。

图1　不同月份流感病毒分离阳性率

2.2流感样病例的性别分布

在所监测的618例病例中，女性患者293例，自其咽拭子样本中分离病毒67株，分离阳性率为22.9%；男性患者325例，自其咽拭子样本中分离病毒54株，分离阳性率为16.6%；经χ2检验，男女性别之间的阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。

2.3流感病毒的年龄分布

不同年龄组的流感病毒阳性率不同：0-5岁年龄组分离阳性率最低，为6.9%(2/29)，6-15岁年龄组分离阳性率为10%(3/30)，16-25岁年龄组病毒分离阳性率为15.0%(41/273)，26-55岁年龄组病毒分离阳性率为27.9%(60/215)，≥56岁年龄组分离阳性率为21.1%(15/71)。各年龄组病毒阳性率无统计学差异(P>0.05)。

3讨论

本文针对2012年10月至2013年5月冬春季密云县医院门诊流感样病例的监测结果进行分析，可反映本地区流感病毒的流行特征。研究表明，在监测期间以甲型流感病毒流行为主，主要为甲型

H3N2亚型和甲型H1N1亚型流感病毒，而与去年同期相比，流感病毒的主要毒株为乙型流感病毒，包括B型Victoria系和B型 Yamagata系。两个年度的5月份均未检出流感病毒。本研究发现2009年甲型H1N1病毒已经作为季节性的流感病毒在今年传播。同时研究发现，密云县去年的流感病毒高峰期在次年的2月份，而本次监测在12月份，高峰期略有提前[4]。

对流感病毒感染者的性别比例进行分析，男女性别之间的阳性率无统计学意义(P>0.05)。本监测结果同时表明， 26-55年龄组流感病毒感染率最高，占总阳性数目的49.6%，提示中青年对流感病毒易感，需特别加强防护，这于相关文献报导一致[5]。

本监测主要采用细胞培养法分离鉴定流感病毒，该方法是流感病毒病原学检测的金标准，对于连续传代2次，血凝滴度仍小于8的细胞培养物，本监测采用Real-TimePCR方法对样本中病毒进行核酸检测。这样可以提高病毒含量低样本的检测率[6]。

本文对密云县医院2011年10月至2012年5月门诊流感患者病毒检出情况及相关特征做出简要分析，3月，我国开始出现人感染H7N9禽流感疫情，经过两个月的主动监测和采取一系列的防控措施，我县没有人感染H7N9禽流感病例。

参考文献：

[1]权菊香，牛杨洋，董奇文，等.2013年我国H7N9型禽病毒流感分析.中国临床药理学杂志，2013,29(6):426-428.

[2]郭湖潭.人感染H7N9禽流感的流行、治疗及防控.国际流行病学传染学杂志，2013,40(3):145-146.

[3]中华人民共和国卫生行业标准 流感性感冒诊断标准.

[4]张巍巍.北京市密云县2011年10月-2012年5月流感监测结果分析.中国卫生检验杂志.2013,23(2)：453-454.

[5]黄芳，石伟先，崔淑娟，等．北京地区2010年10月至2011年4月急性呼吸道感染病毒流行特征分析．国际病毒学杂志，2011，18(4)：97-100．

[6]石伟先，黄芳，崔淑娟，等.实时荧光PCR法、胶体金快速检测法及病毒分离培养法在甲型流感病毒检测中的临床应用分析.中国卫生检验杂志.2011,21(11).

(收稿日期：2014-12-22)

作者简介：张巍巍(1983-)，女，硕士，主管检验师，工作于北京市密云县疾病预防控制中心检验科

文章编号：1007-4287(2016)01-0126-02 1007-4287(2016)01-0128-03

*通讯作者