不同标志物在甲状腺滤泡性肿瘤中的表达及其意义的实验研究

沙春艳(白城医学高等专科学校 吉林 白城 137000)

不同标志物在甲状腺滤泡性肿瘤中的表达及其意义的实验研究

沙春艳
(白城医学高等专科学校 吉林 白城 137000)

甲状腺滤泡癌恶性度较甲状腺乳头状癌高，早期易发生血道转移，预后差，发病隐蔽，常误诊为其他良性病变为提高甲状腺滤泡癌诊断准确率，应探求应用免疫组化染色技术等辅助检测手段做出病理诊断。

甲状腺；滤泡癌；乳头状癌；病理诊断

1.引言

甲状腺滤泡癌恶性度较甲状腺乳头状癌高，早期易发生血道转移，预后差，发病隐蔽，常误诊为其他良性病变。为提高甲状腺滤泡癌诊断准确率，应探求应用免疫组化染色技术等辅助检测手段做出病理诊断。为此本实验研究CK19、PCNA、VEGF和TTF-1在甲状腺滤泡性肿瘤中的表达情况，探讨其在甲状腺滤泡癌与甲状腺瘤鉴别诊断中的应用价值和意义。

2.资料和方法

2.1 研究对象

收集吉林大学病理生物学教育部重点实验室1998年—2007年首次手术治疗67例甲状腺肿瘤标本，标本均经病理复查核诊。其中甲状腺滤泡癌26例，甲状腺滤泡型腺瘤41例；男性22例，女性45例；年龄21～66岁，高峰年龄42.8岁。患者术前均未接受放化疗，临床资料完整。

2.2 主要试剂

CK19鼠抗人单克隆抗体，PCNA鼠抗人单克隆抗体，VEGF鼠抗人单克隆抗体，TTF-1鼠抗人单克隆抗体，U1traSensitiveTM S-P（即用型），多聚赖氨酸，柠檬酸盐缓冲液（0.01M，pH6.0），均由福建迈新生物技术开发有限公司提供。

2.3 实验方法

采用S-P法及其试剂盒说明书进行CK19、PCNA、VEGF 和TTF-1免疫组化染色。

2.4 染色结果判定

采用双盲法观察免疫组织化学染色结果，以细胞质或细胞核出现棕黄色颗粒为阳性表达。

CK19表达情况的判断：无阳性细胞，即为阴性记为0；1%～10%阳性细胞为弱阳性（+）；11%～50%为中等阳性（++）；>50%为强阳性（+++）。

PCNA表达情况的判断：观察高倍镜下每张切片计数100个肿瘤细胞PCNA阳性细胞数，以百分率表达，<20%为阴性。

VEGF表达情况的判断：整个切片未见阳性着色为阴性（-），阳性细胞<25%为轻度阳性（+），25%～50%为中度阳性（++），50%以上为强阳性（+++）。前两者为低表达，后两者为高表达。

TTF-1定量分析：在40倍物镜下，每个样本随机选20个视野，每个视野随机测试10个阳性瘤细胞，用交互式方法测量每个阳性细胞核灰度值，在200个视野中测试背景灰度并取平均值，计算每个目标细胞核阳性单位（PU）值。

2.4 统计方法

采用SPSS 11.0统计学软件包处理。

3.结果

3.1 一般形态学观察

甲状腺滤泡癌：肿瘤由大小不等滤泡、梁状或实性巢状滤泡上皮细胞组成，窦样血管丰富。肿瘤细胞有不同程度异型性，核分裂相常见，常有包膜和血管浸润。

甲状腺腺瘤：25例单纯型腺瘤肿瘤组织由大小一致、排列拥挤、内含胶质、与成人正常甲状腺相似的滤泡构成；12例胶样型腺瘤肿瘤组织由大滤泡或大小不一滤泡组成，滤泡内充满胶质并互相融合成囊，瘤间质少；3例胎儿型腺瘤肿瘤组织主要由小而一致、仅含少量或无胶质的小滤泡构成，上皮细胞为立方形，似胎儿甲状腺组织，间质呈水肿粘液样，易发生出血、囊性变。1例胚胎型腺瘤瘤细胞小大小一致，分化好，呈片状或条索状，偶见不完整小滤泡，无胶质，间质疏松呈水肿状。

3.2 CK19在甲状腺滤泡癌与腺瘤中的表达

表达于细胞质，其中见棕黄色颗粒为阳性，两者之间的差异有高度统计学意义（P<0.01）。见表1。

表1 CK19在甲状腺良恶性滤泡性肿瘤组织中的表达

3.3 PCNA在甲状腺滤泡癌与腺瘤中的表达

阳性细胞可显示颗粒状和弥漫性两种类型核着色，肿瘤细胞核内出现清晰棕黄色颗粒为阳性，两者之间的差异有高度统计学意义（P<0.01）。见表2。

表2 PCNA在甲状腺良恶性滤泡性肿瘤组织中的表达（%）

3.4 VEGF在甲状腺滤泡癌与腺瘤中的表达

阳性表达主要位于细胞质或细胞膜，阳性着色为棕黄色，呈颗粒状，甲状腺滤泡癌阳性表达率明显高于甲状腺腺瘤（P＜0.01）。见表3。

表3 VEGF在甲状腺良恶性滤泡性肿瘤组织中的表达

3.5 TTF-1在甲状腺滤泡癌与腺瘤中的表达

细胞核为其在甲状腺表达部位，主要见于甲状腺滤泡细胞，阳性胞核淡黄色，边界清楚，散在分布；两者结果比较差异无统计学意义（P>0.05）。表4。

表4 TTF-1在甲状腺良恶性滤泡性肿瘤组织细胞中的表达

4.讨论

4.1 CK19在甲状腺滤泡性良恶性肿瘤中的表达意义

本实验表明，3例甲状腺腺瘤患者弱阳性表达，阳性表达率为7.69%；甲状腺滤泡癌中阳性表达强度（包膜浸润处明显）及表达率（92.31%）均明显增强，说明CK19有助于区别甲状腺良恶性滤泡性肿瘤。在良性甲状腺滤泡性病变组织中出现少量CK19明显中强阳性，一定要仔细寻找原发灶，以免漏诊[1]。

4.2 PCNA在甲状腺滤泡性良恶性肿瘤中的表达意义

本实验表明，PCNA在甲状腺滤泡癌与甲状腺腺瘤中的阳性表达范围未重叠，增殖指数分别为67.01%和8.26%，表明PCNA在甲状腺滤泡癌中表达率较高，在甲状腺腺瘤表达率较低，提示在鉴别诊断中敏感性较高。

甲状腺滤泡癌PCNA阳性表达率高证明癌细胞增殖活性较高，甲状腺腺瘤中阳性表达率低说明细胞增殖活性较低。其与肿瘤细胞分化有关，反映了细胞增殖活性与甲状腺滤泡性肿瘤生物学行为之间的关系[2]。其增殖指数可作为判断甲状腺滤泡性肿瘤良恶性的参考指标，可提供重要预后信息。

4.3 VEGF在甲状腺滤泡性良恶性肿瘤中的表达意义

VEGF在甲状腺癌生长和转移中地位重要[3]，高水平表达并以旁分泌方式刺激甲状腺癌血管生成，促进甲状腺癌发展。

本实验显示，VEGF在甲状腺滤泡癌和甲状腺腺瘤的阳性表达率分别为65.38%和21.95%。VEGF高表达是疾病活跃标志，在甲状腺滤泡性肿瘤恶变中可起重要作用，有助鉴别诊断良恶性滤泡性肿瘤。

4.4 TTF-1在甲状腺滤泡性良恶性肿瘤中的表达意义

TTF-1可特异性地在甲状腺上皮或滤泡旁上皮细胞表达，且位于细胞核内，是一种良好标记物。

本实验表明，甲状腺滤泡癌和甲状腺腺瘤患者的PU值分别为（14.9±2.4）和（16.1±1.3），均能很好表达呈由高到低的趋势，但两组表达值差异无统计学意义，与既往研究一致[4]。可见该标志物尚不能作为甲状腺滤泡性良恶性肿瘤的鉴别指标。

综上所述，联合检测CK19、PCNA和VEGF有助于提高甲状腺滤泡性良恶性肿瘤的诊断正确率，TTF-1在甲状腺滤泡性良恶性肿瘤中都能很好表达但对鉴别诊断帮助不大。当怀疑恶性肿瘤来自甲状腺时可检测TTF-1表达情况，为肿瘤来源正确判断提供参考。

[1]腾晓东，王丽君，姚洪田，等.细胞角蛋白19、gelectin- 3、HBME-1在甲状腺病变上的表达及鉴别诊断意义[J].中华病理学杂志，2004，33（3）:212-216.

[2]孙青，鹿伟，张传森，等.甲状腺肿瘤增殖细胞核抗原表达的免疫组化研究[J].第一军医大学学报，2001，21（1）:17-18.

[3]张矛.血管内皮生长因子与甲状腺癌[J].国外医学内分泌学分册，2001，21（2）:76-78.

[4]魏正俐，姚红，赵丽芹，等.甲状腺转录因子-1在甲状腺良、恶性病变中表达的定量研究[J].中国药物与临床，2006，6（11）：809-812.

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1009-5624（2016）06-0178-03