猪乙型脑炎痘苗和检测技术研究进展

王家涛　崔克

摘要：猪乙型脑炎是一种人兽共患的病毒性传染病，严重威胁养猪业发展和公共卫生安全。文章对猪乙型脑炎疫苗和检测技术的研究现状进行综述，为预防和检测该病提供参考。

关键词：猪乙型脑炎；疫苗；检测技术

猪乙型脑炎又称日本乙型脑炎，由黄病毒科黄病毒属乙型脑炎病毒引起，是一种急性中枢神经系统人兽共患传染病，国际兽医局将该病列为B类传染病。该病不仅危害集约化养猪业，造成巨大的经济损失，也影响人类健康，严重威胁公共卫生安全。目前尚无有效的治疗方法，强化检测技术和疫苗质量的提高是控制该病的有效手段，现将猪乙型脑炎疫苗和检测技术的研究进展情况进行综述。

1 疫苗研究进展

1.1 常规疫苗

目前，在畜牧业生产中用于预防猪乙型脑炎的常规疫苗有灭活苗和减毒活疫苗，其中灭活苗由北农科院畜牧兽医研究所采用猪乙型脑炎强毒株WH-1株研制成功，并于1996年获准投入市场，该疫苗接种各类猪群后无应激反应、胎内感染及病毒血症，安全性好，保护率高，但是存在免疫保护期短、免疫剂量大等不足之处。减毒活疫苗也由湖北农业院畜牧兽医研究所研发，其使用SA14-14-2毒株，经接种地鼠肾原代细胞增殖，将病毒液冻干制成。研究表明，病毒活疫苗安全性高、免疫原性好，特别是对后备母猪及初产母猪可产生高效的细胞免疫和体液免疫。缺点在于可能出现毒力返强，存在潜在的致病危险，同时地鼠肾原代细胞未通过WHO认证，这严重影响了疫苗的应用范围。

1.2 基因工程疫苗

随着分子生物学、分子免疫学、基因工程学等生物技术的发展，科研人员对猪乙型脑炎基因工程疫苗进行了大量的研究，取得一系列成果。

近年来，科研人员采用反向遗传学基因工程技术构建嵌合病毒作为防治猪乙型脑炎的新型疫苗，即：重组嵌合病毒疫苗。如将猪乙型脑炎病毒的E基因替换猪瘟病毒的E基因，构建猪乙型脑炎-猪瘟嵌合病毒，免疫小鼠及猪后，均产生了乙型脑炎病毒特异性抗体。将猪乙型脑炎病毒的prM和E基因代替黄热病毒的同种基因，构建乙型脑炎-黄热嵌合病毒，实验证明，具有较高的安全性和特异性抗体水平，免疫抗体转阳率达99.1%，并且已在澳大利亚注册成功。同时，构建成功的含有猪乙型脑炎病毒prM或E基因的重组痘苗病毒，免疫小鼠和猪后也可防护猪乙型病毒的攻击。

核酸疫苗作为另一类基因工程疫苗也取得了大量的研究成果。目前的研究主要集中在猪乙型脑炎病毒的prM、E和NS1基因上，Ashok NS等证实了含有E基因的核酸疫苗保护作用有限，仅刺激抗体产生低水平的细胞免疫，而含部分E基因的核酸疫苗则在小鼠体内产生了较高的中和抗体水平和细胞免疫反应，对其保护率可达71%。Konishi等证实采用含有猪乙型脑炎前膜信号肽（s）prM、E基因的核酸疫苗免疫小鼠后，保护率可达100%，免疫持续期为6个月。随后其又证实了含有prM和E基因的核酸疫苗免疫动物后，不仅刺激抗体产生特异性CTL细胞参与细胞免疫，还产生B细胞参与体液免疫。对于含有NS1基因的核酸疫苗，Lin等证明了虽在小鼠体内未检测到中和抗体，但存在很强的补体反应，可促小鼠获得90%的保护，但是含NS1基因的核酸疫苗的免疫效果与采用的表达系统和其序列有关。虽然猪乙型脑炎病毒核酸疫苗的研究取得了显著的成果，但是其安全性、免疫途径等因素仍需进一步论证，现仍处在实验室研究阶段。

另一类猪乙型脑炎病毒新型疫苗为亚单位疫苗，XuXG等利用杆状病毒表达系统表达的猪乙型脑炎E蛋白，免疫小鼠和猪，在动物体内检测到特异性中和抗体。我国的曹瑞兵等构建了表达猪乙型脑炎病毒多表位抗原的病毒样颗粒疫苗，证实疫苗在小鼠身上与猪乙型脑炎弱毒疫苗的免疫效果相近。但是目前为止，亚单位疫苗也是仍处于实验阶段。

2 检测技术研究进展

随着对猪乙型脑炎研究的深入，其检测技术有了很大的进展。

2.1 血清学检测技术

目前常用的有酶联免疫吸附试验、免疫荧光试验、补体结合试验、血凝抑制试验、乳胶凝集试验、协同凝集试验。其中酶联免疫吸附试验作为一种敏感、特异、稳定的检测技术在猪乙型脑炎的检测中得到了广泛的应用。沈婷等建立的间接酶联免疫吸附试验方法，用于检测猪乙型脑炎病毒抗体，与同类方法比较，吻合率达95.6%，且具有较高的敏感性与特异性，并对江苏等4省开展了1089份样的血清流行病毒调查，获得了较好的效果。补体结合试验对诊断猪乙型脑炎有较高的特异性，但因补体结合抗体在动物发病后两周才出现，故该法也只能作为回顾诊断用。血凝抑制试验可以检测猪乙型脑炎病毒IgM和IgG抗体，敏感性强，操作简单，是常用的猪乙型脑炎流行病学和临床诊断方法。而贾杏林等建立的猪乙型脑炎乳胶凝集试验，与血凝抑制试验相比，对同一组样品的检测结果差异不显著（P>0.05），且具有快速、易于判断、不需特殊仪器的优点，适合基层单位推广使用。宋大伟等建立的猪乙型脑炎协同凝集试验，产生的凝集现象肉眼可以判断，与酶联免疫吸附试验相比，简单、快捷、敏感性高、特异性强，也适合基层单位推广使用。王吉等建立的免疫荧光试验，结果表明，灵敏度是乳胶凝集试验的8倍，可用于猪乙型脑炎的确诊，但是由于其操作繁琐，血清中的非特异性吸附等因素，限制了诊断方法的应用。

2.2 病原学检测技术

最常用的猪乙型脑炎病原学检测技术有病毒分离鉴定和分子生物学检测技术，病毒分离鉴定结果准确，可以获得病毒株，但操作繁琐，费时费力，不适合猪乙型脑炎的快速检测。随着生物技术的发展，猪乙型脑炎病毒分子生物学检测技术取得了很多研究成果，高正琴根据猪乙型脑炎病毒C基因序列，建立了反转录——聚合酶链式反应（RT-PCR）方法，崔奕杰等根据猪乙型脑炎病毒E基因序列也建立了RT-PCR方法，结果表明，敏感性高、特异性强，均得到很好的检测效果。蔡绪禹等根据Gen-Bank公布的猪乙型脑炎病毒等5种人兽共患脑炎病毒的基因序列，建立了可同时检测5种病毒的多重RT-PCR方法，而何玢等建立了与猪乙型脑炎病毒相关的8种虫媒病毒的多重RT-PCR方法，结果表明，这些方法具高通量、简便、快速、灵敏、特异，对猪乙型脑炎等病毒性脑炎的分子诊断有重要意义。近年来出现的实时荧光PCR方法是对PCR方法的发展与延伸，比PCR方法更加敏感、特异，同时可定量检测，该方法又可分为TaqMan荧光探针法和SYBR荧光染料法。黄福新等根据猪乙型脑炎病毒NS3基因序列，建立了TaqMan荧光探针法RT-PCR，研究表明，可检测100μg/μL的病毒，且时间仅需3h，可用于猪乙型脑炎的实验室快速检测。同时，陈志永等建立了SYBR荧光染料法RT-PCR，结果表明，是一种敏感、特异、快速的猪乙型脑炎检测方法。

3 结语与展望

猪乙型脑炎作为重要的人兽共患病，对养殖业和公共卫生安全有巨大的威胁。随着现代科学技术的发展，对猪乙型脑炎疫苗生产工艺、纯化工艺不断完善，积极开发基因工程新型疫苗，同时对各种检测方法不断优化，相信一定会出现安全、有效、实用、经济的疫苗和快速、准确、灵敏、特异的检测技术，建立完善猪乙型脑炎的预防和检测体系及策略，为该病的防治提供科学支持，确保畜牧业生产和公共卫生的安全。

（编辑：赵晓松）