鸡源奇异变形杆菌危害需重视

文│李巍 陈明非 杨卓 刘佳 苍真伟 赵怡雯 王德强 程淑晶（辽宁省大连市畜牧总站）

刘威（广东永顺生物制药股份有限公司）

鸡源奇异变形杆菌危害需重视

文│李巍 陈明非 杨卓 刘佳 苍真伟 赵怡雯 王德强 程淑晶（辽宁省大连市畜牧总站）

刘威（广东永顺生物制药股份有限公司）

奇异变形杆菌属于肠杆菌科变形杆菌属，是革兰氏阴性杆菌，有周生鞭毛，普通培养可形成迁移性生长。兽医临床上一度认为这类菌为粪便或环境污染菌，很少监控它的流行情况。笔者在对辽宁大连地区有腹泻症状的肉仔鸡进行大肠杆菌和沙门氏菌的感染情况调查时，发现奇异变形杆菌的分离率很高，部分鸡是奇异变形杆菌和大肠杆菌或沙门氏菌混合感染，而部分鸡是单纯奇异变形杆菌感染；从具有败血症状的肉仔鸡的全身实质脏器分离到的奇异变形杆菌，经动物试验证实有较强的致病力。

一、材料和方法

1. 材料。

（1）被检病料。收集到的临床有腹泻症状的死淘肉鸡472只，15～40日龄。

（2）主要试剂与仪器。亚硒酸盐胱氨酸增菌液（SC肉汤）、胆硫乳琼脂（DHL琼脂）培养基购自北京陆桥技术股份有限公司；VITEK2细菌生化鉴定卡由法国生物梅里埃公司（中国上海部）提供；细菌生化鉴定设备为法国生物梅里埃公司VITEK2全自动细菌鉴定系统。

（3）试验动物。7日龄公雏鸡120只，饲养到15日龄无异常后用于试验。

2.方法。

（1）死淘肉仔鸡临床检查。观察死淘肉仔鸡外观及剖检病理变化，并详细记录。

（2）细菌分离培养。无菌采集死淘肉仔鸡的盲肠扁桃体，放入SC肉汤中，对应死淘鸡只逐一编号，放入37℃生化培养箱中培养48小时，再将SC肉汤培养物逐个转移接种DHL琼脂培养基，37℃培养24小时；对DHL琼脂上的疑似菌落做三次纯化培养，标记菌株，置4℃冰箱中保存备用。对有败血症病理变化的死淘鸡只，在进行SC肉汤增菌培养的同时，无菌勺取实质脏器（心、肝、脾、肺、肾等）直接在DHL琼脂平板上划线，同样对长出的疑似菌落纯化后标记保存。

（3）细菌生化鉴定。对获得的菌株革兰氏染色镜检，属于革兰氏阴性、两端钝圆、短杆菌的，用0.45%氯化钠水溶液稀释成0.5个麦氏单位，选择VITEK2 GN卡，用VITEK2全自动细菌鉴定系统进行生化鉴定。

（4）致病力试验。将从有败血症的死淘肉仔鸡中分离到的菌株37℃培养24小时复壮，用生理盐水稀释成10个麦氏单位，换算成活菌数即每毫升约含3.0×109个活细菌菌落数。120只小公鸡随机分组，其中细菌接种组若干组、健康对照组1组、生理盐水对照组1组。除健康对照组外，每只鸡腹腔注射0.5ml菌液（活菌数约1.5×109个）或生理盐水。每天观察发病情况，剖检死鸡，回收细菌，连续观察7天。

二、结果

1.临床检查。死淘肉仔鸡外观消瘦，体型明显比同日龄健康鸡小，鸡冠苍白或紫绀，共同特征是泄殖腔周围羽毛污浊。这些死淘鸡共同的剖检病理变化是脾脏、肾脏淤血，略肿大，肓肠扁桃体肿大明显，剪开可见新鲜或陈旧性出血点，泄殖腔黏膜有条状出血。此外有的可见气囊混浊，肺脏淤血有灰白色坏死灶；有的心包增厚，心包液增多，混有纤维素性渗出物，肝脏上有纤维素性包膜覆盖；有的十二指肠或盲肠有出血斑块。

2.培养特征。疑似菌在DHL琼脂上37℃培养24小时后形成白色、半透明、带或不带黑心、圆整、略扁、直径2毫米大小的菌落，与沙门氏菌菌落很相似，但比沙门氏菌菌落稍大、稍扁平、黑心的范围稍大些；与大肠杆菌菌落则很易区分（图1、图2）。

3.生化鉴定。可疑菌与沙门氏菌一样，β-半乳糖苷酶（BGAL）阴性，产硫化氢（H2S），鸟氨酸脱羧酶（ODC）阳性，因此两菌在DHL琼脂上有相似特征。可疑菌与沙门氏菌显著不同的是赖氨酸脱羧酶（LDC）阴性，尿酶（URE）阳性，生化鉴定结果为奇异变形杆菌，生化试验详细结果见表1。472份样品中共分离到奇异变形杆菌62株，分离率高达13.1%。

4.致病力试验。接种菌液的小公鸡12小时后出现精神萎靡，24小时后开始出现死亡，48～96小时达到死亡高峰，144小时后全部死亡，而两组对照鸡则全部存活。

三、结论

1.此次在调查大连地区有腹泻症状的死淘肉仔鸡细菌感染情况的过程中，分离到了多株奇异变形杆菌。奇异变形杆菌有运动性，易呈迁移性生长，与其他细菌不易分开。但在含有胆盐及去氧胆酸钠（如SS琼脂、麦康凯琼脂、DHL琼脂等）的培养基上失去聚集性，易获得独立菌落，这也是此次调查在获得大肠杆菌、沙门氏菌菌株的同时获得奇异变形杆菌菌株的原因。

2.奇异变形杆菌与感染相关的毒力因子主要表现在菌毛与荚膜多糖带来的黏附力与侵袭力上，另外该菌产生的各种蛋白水解酶、各种细胞毒性溶血素使感染变得更加复杂。通常认为奇异变形杆菌是条件性致病菌，但通过此次对部分菌株的致病力试验发现，该菌对日龄较低的鸡有很强的致病力，可能该菌的致病力还与细菌数量达到一定的限值有关，对此还要做进一步的试验。

3.近年来我国不断有鸡群暴发奇异变形杆菌病的报道，7周龄以下雏鸡发病最多。此次调查发现大连地区肉仔鸡奇异变形杆菌携带率高达13%以上，动物试验表明当地分离到的菌株致病力很强，对大连肉鸡养殖业是一种潜在的威胁。从大量肉仔鸡盲肠扁桃体分离到奇异变形杆菌说明该菌还可以发生内源性感染，可以推测当饲料、饮水受到严重污染或鸡体抵抗力下降时，很有可能造成奇异变形杆菌病的暴发。此外，奇异变形杆菌还是一种人畜共患的病原菌，和大肠杆菌、沙门氏菌一样具有重要的公共卫生意义，因此动物防疫相关部门有必要加强对奇异变形杆菌病的监控。

◎图1 大肠杆菌与可疑菌在DHL培养基上的不同形态

◎图2 纯化的可疑菌在DHL培养基上菌落形态

表1 奇异变形杆菌生化试验结果