仙鹤草不同提取物对肿瘤细胞作用的研究概况

王 莲，张荣泉

(天津市医药科学研究所，天津 300020)

仙鹤草不同提取物对肿瘤细胞作用的研究概况

王 莲，张荣泉*

(天津市医药科学研究所，天津 300020)

本文综述了近年来中药仙鹤草不同提取部位的水提物、乙酸乙酯提取物、乙醚提取物、丙酮提取物及其成分 鞣酸、仙鹤草酚及多糖等在体外对肿瘤细胞的作用，提示该中药对肿瘤细胞具有的较强的生物活性，抑制肿瘤细胞增殖，诱导细胞凋亡，而凋亡发生机制可能与Bcl-2和P53蛋白表达改变有关。今后应加强生物体内的药效学和作用机理研究，为抗肿瘤新药的开发提供依据。

仙鹤草，提取物，抑制肿瘤

仙鹤草为蔷薇科植物龙芽草(AgrimoniaPilosaLedeb)的干燥地上部分[1]，性寒，味苦、涩，含有酯、酚、黄酮、皂苷、鞣质、糖苷、挥发油及有机酸等成分，传统主要用于治疗咯血、尿血、便血、崩漏等各种出血症[2]，有收敛止血、止带止痢、活血调经、补虚壮体等诸多功效[3]。现代药理研究证明其具有抗炎、止血、抗氧化、抗菌消炎、抗肿瘤、降血压及血糖[4-9]等生物活性。尤其该中药的其抗肿瘤作用尤为明显，其不同提取物在体外对多种肿瘤细胞具有抑制或杀伤作用。现就仙鹤草不同提取物对肿瘤细胞作用的研究概况综述如下。

1 仙鹤草水提物的作用

邹夏慧等[10]使用不同浓度仙鹤草水提液处理人肝癌细胞(SMMC-7721),采用MTT法检测细胞活力，并计算其抑制率，观察细胞形态学变化。结果表明该水提液能够明显抑制SMMC-7721细胞增殖，诱导细胞凋亡，而细胞凋亡机制则可能与P53蛋白表达上调和Bcl-2蛋白表达下调有关。李红枝等[11]以高、中、低3个剂量(4.0、2.0及1.0 mg/ml)的仙鹤草水溶性提取物给小鼠灌胃，连续30 d，观察小鼠骨髓细胞微核实验和睾丸染色体畸变实验的抗突变作用，结果显示该提取物对小鼠肉瘤(S180)、肝癌(H22)、宫颈癌(U14)、脑瘤(B22)、艾氏腹水癌(EAC)、黑素瘤(B16)和大鼠瓦克癌(W256)体外培养细胞均有较好抑制作用，杀死癌细胞的同时未损害正常细胞，可用于治疗各种肿瘤。将仙鹤草注射液作用于胃癌(BGC-803)细胞和宫颈癌(HeLa)细胞，细胞抑制率分别达到61.9%和67.9%。流式细胞检测结果显示，仙鹤草注射液可干扰肿瘤细胞周期进程，阻滞肿瘤细胞由G1+G0期向S期和G2+M期转化，对人肿瘤细胞具有生长抑制作用[12]。另有报道[13]，使用仙鹤草注射液治疗小鼠前列腺移植瘤5周后，发现肿瘤瘤质量降低，瘤体减小，肿瘤组织大片坏死，表明仙鹤草对前列腺实体性移植瘤具有明显的抑制作用。

仙鹤草水提液抑制肿瘤作用机理可能与调节体内免疫蛋白作用有关。马丽萍等[14]分别将0、2、4、8和16 g/L浓度的仙鹤草水提液作用于食管癌(Eca109)细胞，24、48和72 h后观察其对Eca109细胞生长的抑制作用，并运用免疫组织化学染色技术，检测16 g/L水提液作用72 h对Eca109细胞Bcl-2、P53蛋白表达的影响。MTT法测定结果表明，在16g/L仙鹤草水提液作用48 h和72 h后，Eca109细胞生长明显受抑；而免疫组化结果显示16 g/L仙鹤草水提液作用72 h后，Eca109细胞内Bcl-2蛋白表达下调，P53蛋白表达上调。证实其诱导Eca109细胞凋亡的机制可能与下调Bcl-2蛋白表达及上调P53蛋白表达有关。而邹夏慧等[15]亦以不同浓度的仙鹤草水提物细胞培养液处理肝癌(SMMC-7721)细胞，发现其作用48和72 h后，细胞呈现明显的凋亡形态学改变；20 mg/ml组的细胞凋亡率分别为19.5%和23.0%，40 mg/ml组分别为33.4%和42.7%；20 mg/ml组的Bcl-2蛋白阳性表达率分别为71.9%和58.5%，40 mg/ml组分别为47.9%和26.5%；20 mg/ml组的P53蛋白阳性表达率分别为22.9%和50.6%，40 mg/ml组分别为48.7%和83.7%。显然水提液能较明显地抑制SMMC-7721细胞增殖，诱导细胞凋亡，并呈现剂量、时间依赖性，凋亡发生机制可能与Bcl-2和P53蛋白表达改变有关。

2 仙鹤草乙酸乙酯提取物的作用

以不同质量浓度的仙鹤草乙酸乙酯部位(0、50、100、150、200及250 μg/ml)作用于体外培养的人肝癌(HepG2)细胞，MTT法检测其细胞生长抑制率；同时以流式细胞仪检测细胞凋亡和肿瘤细胞内活性氧(ROS)的变化；Fluo-3/AM荧光探针观察肿瘤细胞内钙离子浓度的变化。检测结果显示该部位(总鞣质质量分数为19.91%)可显著抑制HepG2细胞的生长，诱导细胞凋亡，其IC50为127.85 μg/ml。当作用48 h后，HepG2细胞数量明显减少；在Fluo-3/AM荧光探针的作用下，具有较强绿色荧光；同时检测出细胞内ROS具有较明显增加。结果表明，仙鹤草乙酸乙酯有效部位能够抑制HepG2细胞的生长，诱导细胞凋亡，作用机制可能是与肿瘤细胞内钙离子的释放和ROS的增加有关[16]。另有文献[17]报道，使用不同浓度的仙鹤草乙酸乙酯提取物作用人肝癌(BEL-7402)细胞，72 h后细胞的生长增殖作用被抑制，并呈现剂量依赖性，作用较明显，OD值与空白组相比，具有显著性差异(P<0.05)，其IC50为89.277 μg/ml。

3 仙鹤草乙醚提取物的作用

将乙醚提取物与生理盐水配制成1 g/L的混悬液，加入HeLa细胞培养基中，结果显示，HeLa细胞明显减少，提示其对HeLa细胞具有一定的抑制作用，其抑制率为35%[18]。

4 仙鹤草丙酮提取物的作用

仙鹤草丙酮提取物的正丁醇萃取层可显著性抑制BEL-7402细胞生长，诱导细胞凋亡，IC50为107.54 μg/ml，作用48 h后，BEL-7402细胞数量明显减少，使用Fluo-3/AM荧光探针进行检测发现，其具有较强绿色荧光，同时检测出细胞内ROS明显增加。结果表明，试验样品能够抑制BEL-7402细胞生长，诱导细胞凋亡，而作用机制可能与细胞内钙离子释放和ROS增加有关[19]。

5 仙鹤草不同成分对肿瘤细胞的作用

仙鹤草中的鞣酸成分可以抑制肿瘤细胞，增强免疫细胞活性，认为是仙鹤草中主要的抗肿瘤活性成分。有研究报道[20]，仙鹤草鞣酸能够明显抑制体外培养的人癌细胞裸鼠转移瘤肺癌细胞株(SPC-A-1)、HeLa、人乳腺癌细胞株(MCF-7)和低分化胃黏液腺癌(Mgc803)，且对其中的HeLa作用最强，SPC-A-1次之，对HeLa 、SPC-A-1 及MCF-7的IC50分别为6.2、12.4及49.2 μg/ml，标志着仙鹤草有可能成为临床上治疗宫颈癌和肺腺癌的有效药物。此外，仙鹤草酚对白血病细胞(K562)也具有明显的抑制作用，MTT试验及流式细胞术检测结果皆表明仙鹤草酚对K562白血病细胞活性及细胞凋亡率具有一定的影响，仙鹤草酚(0、0.11、1.0 mg/ml)剂量依赖性地抑制了K562细胞活性，增加了其凋亡率(P<0.05)[21]。

研究发现，仙鹤草总多糖对脑胶质瘤(U251)细胞株增殖具有明显的体外抑制作用(P<0.01)，并表现出浓度依赖关系，IC50为1.35 g/L，U251细胞经该多糖处理后显示出典型的凋亡形态变化，推测其抗肿瘤机制可能与诱导肿瘤细胞凋亡有关[22]。仙鹤草素为一种丹宁酸。在腹水型和固体型啮齿动物肿瘤实验中发现，在MM2肿瘤细胞腹腔接种前后，其经腹腔给予仙鹤草素的剂量超过10 mg/kg时，可几乎完全抑制小鼠体内肿瘤的生长，延长了MM2肿瘤小鼠的寿命，甚至得以治愈。虽然其在体外对MM2细胞显示出强烈的细胞毒性，但是通过向培养液中添加胎牛血清便能够使其毒性减少至约初始活性的4%。另一方面，腹腔注射仙鹤草素亦增加了外围白细胞的数量和单核细胞的比率。在腹腔注射丹宁酸的第4 d，附着细胞毒性的腹腔渗出细胞数量同样增多；小鼠的脾脏增大，且脾脏细胞具有占用3H-胸苷的能力；而在未治疗的小鼠中，仙鹤草素显示出微弱的抗脾脏细胞直接迁移活动，表明了仙鹤草素是一种潜在的抗肿瘤丹宁酸，其可能是通过对肿瘤细胞和免疫细胞的作用而提高了宿主动物的免疫应答[23]。

仙鹤草临床主要用于治疗肿瘤、糖尿病、妇科疾病、消化系统疾病以及泌尿系统疾病等[24-26]。本文综述了仙鹤草的不同提取物、成分对不同的肿瘤细胞具有一定的抑制作用，作用浓度及其机理也阐述得较为清楚，为今后的深入研究打下了良好的理论基础，但对其在动物体内抗肿瘤作用的研究尚待加强。

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2016-03-15

*通讯作者：张荣泉，E-mail：zhangrongquan928@126.com。

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