急性心肌梗死患者血小板表面糖蛋内Ⅱb/Ⅲa的表达及意义

王文龙，黄潇慧，张金盈

(郑州大学医学院第一附属医院心血管内科,河南郑州450052)

急性心肌梗死患者血小板表面糖蛋内Ⅱb/Ⅲa的表达及意义

王文龙，黄潇慧，张金盈

(郑州大学医学院第一附属医院心血管内科,河南郑州450052)

目的探讨急性心肌梗死患者血小板表面糖蛋白（GP)Ⅱb/Ⅲa的表达情况。方法健康对照组、急性心肌梗死组和急性心肌梗死组伴血小板减少组间血小板数值及CD41／CD61检测。急性心肌梗死组伴血小板减少组数值分层分为三组。应用流式细胞术检测急性心肌梗死患者，急性心肌梗死伴血小板减少患者及健康对照血小板表面GPⅡb/Ⅲa的阳性表达率。应用SPSS 15.0软件，所获数据采用方差分析和t检验。结果各组血小板数比较：急性心肌梗死组明显高于健康对照组。急性心肌梗死伴血小板减少组明显少于健康对照组。各组间PLT、CD41+/CD61-、CD41-/CD61+、CD41+/CD61+比较，PLT P均＜0.0005；CD41+/CD61-，P均＜0.0005；CD41-/CD61+，P均＜0.0005，均有非常显著性差异。CD41+/CD61+,急性心肌梗死组Y与急性心肌梗死伴血小板减少组比较，P＜0.05，有显著性差异。AMI伴PLT减少组与对照组、急性心肌梗死与对照组比较，P均＜0.0005，均有非常显著性差异。血小板数值分层后三组与健康对照组CD41／CD61值比较，CD41+/CD61-比较，血小板，（80～100）×109/L∶（50～80）×109/L、（80～100）×109/L∶（30～50）×109/L、（50～80）×109/L∶（30～50）× 109/L，，P均＜0.0005，有非常显著性差异。CD41-/CD61+比较血小板，（80～100）×109/L∶（50～80）× 109/L，P＞0.05，无显著性差异。其，P均＜0.0005，均有非常显著性差异。CD41+/CD61+比较，血小板，（80～100）×109/L∶（50～80）×109/L，P＞0.05。其余P均＜0.0005，均有非常显著性差异。结论流式细胞术检测血小板GPⅡb／Ⅲa对采用抗血小板聚集治疗急性心肌梗死具有重要指导意义。

急性心肌梗死/诊断；血小板糖蛋白(GP)ll b／Illa复合物；流式细胞术

急性心肌梗死是指冠状动脉分支严重狭窄或完全闭塞而致部分心肌缺血性坏死；斑块血栓形成约占90％；冠脉痉挛约占10％；斑块下出血形成血肿极少见。血小板在血栓形成过程中发挥着重要的作用。血小板膜糖蛋白I b-IX-V、I a-II a及Ⅱb-Ⅲa在血小板黏附、聚集乃至血栓形成过程中不可或缺的重要成分。血小板表面的膜糖蛋白是决定血小板粘附、释放和聚集功能。糖蛋白主要有GP I b、GPⅡb、GPHIa、CD62p、CD63等[1]。约75％的抗原位于血小板膜GPⅡb/Ⅲa或GP I b／Ⅸ复合体上，另外25％可能位于其他血小板糖蛋白上[2]。为此，我们自2015年7月—2016年7月间应用流式细胞术(FCM)对急性心肌梗死及急性心肌梗死伴血小板减少的患者进行检测，现报道如下。

1 临床资料

1.1 一般资料急性心肌梗死患者62例，其中急性心肌梗死患者52例。男性30例，女性22例，中位年龄45岁；急性心肌梗死伴血小板减少患者10例。男性5例，女性5例，中位年龄50岁。健康体检者20名为对照组。所有受试者近1周均未使用影响血小板活性的药物。患者组与健康对照组年龄、性别、受教育程度等一般资料比较，P＞0.05，无显著性差异，具有可比性。

1.2 方法采集空腹静脉血2 ml乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝。1000 r／min离心5 min，制备富血小板血浆，取富血小板血浆200 ml，加等量0.1％多聚甲醛固定30 min；用于流式细胞仪检测血小板GPⅡb／Ⅲa。IgGl(mouse)一PE，IgGl(mouse)一异硫氰酸荧光素(FITC)，PE标记的CD61(CD61一PE)及FITC标记的CD41(CD41-FITC)单克隆抗体均购自Bekman Coulter公司。流式仪为美国Bek-manCoulter公司产品CytomicFC 500。离心机为美国Bekman Coulter公司产品。流式细胞术检测血小板GPⅡb/Ⅲa：分别在对照管与实验管中加入5μ l已固定好的富血小板血浆，对照管中分别加5μ l IgG-PE和5ulIgG-FITC，实验管中分别加入5 μ lCD61-PE与5ulCD41-FITC；两管中分别加入50 μ l生理盐水混匀后暗室放置30 min，加生理盐水500 μ l，2000 r／min离心10 min，弃去上清，再加入500 μ l生理盐水上机检测。

1.3 统计学处理应用SPSS 15.0软件，所获数据采用方差分析和t检验。

2 结果

2.1 各组血小板数比较急性心肌梗死组明显高于健康对照组。急性心肌梗死伴血小板减少组明显少于健康对照组。见表1。

2.2 流式细胞术检测血小板GPⅡb／Ⅲa(CD41／CD61)急性心肌梗死患者中血小板GPⅡb／Ⅲa水平高于健康对照（见图1），两者之间在CD41+/CD61-，CD41-/CD61+，CD41+/CD61+中均有显著性差异(均为P＜0.01)。急性心肌梗死伴血小板减少患者血小板GPⅡb／Ⅲa水平在CD41+/CD61-，CD41-/CD61+，CD41+/CD61+检测中均高于健康对照。见表1。

表1 各组间血小板数值及CD41／CD61检测结果（ˉx±s）

图1 ：CD41／CD61的流式检测结果

2.3 流式细胞术检测血小板GPⅡb/Ⅲa(CD41／CD61)对心肌梗死伴血小板减少患者在血小板数值分层中（80～100）×109/L，（50～80）×109/L及（30～50）×109/L中，其中（80～100）×109/L及（50～80）× 109/L患者中血小板GPⅡb/Ⅲa水平较健康对照组升高，不论在CD41+/CD61-，CD41-/CD61+，CD41+/CD61+中均有显著性差别。血小板数值（30～50）×109/L患者血小板GPⅡb/Ⅲa水平不论在CD41+/CD61-，CD41-/CD61+，CD41+/CD61+均较健康对照组低。见表2。

表2 AMI伴血小板减少组血小板数值分层后CD41／CD61检测结果（ˉx±s,％）

3 讨论

急性心肌梗死（AMI）后血浆中促血小板激活物质被释放，血小板活性及粘附性增高［3,4］，血小板α-颗粒膜蛋白（GMP-140）释放增多［5,6］。血小板膜表面糖蛋白Ⅳ（GPIV）分布增多及血小板内凝血敏感蛋白（TSP）是血小板激活敏感指标［7,8］，比GMP-140增多更高［9］，两者血小板膜表面形成结合体，参与血小板的不可逆聚集。血小板膜糖蛋白是发挥作用的功能部位，膜糖蛋白比例最高的物质是GP II b／IIIa。血小板表面主要有糖萼蛋白和细胞膜组成。糖萼蛋白为细胞外衣，有糖蛋白和糖链部分组成。膜蛋白主要为糖蛋白，其中GpΙ b参与血小板的粘附，GpⅡb/Ⅲa与血小板聚集有关。GPⅡb／m a受体分布于血小板表面．血小板聚集和血栓形成的关键。每一细胞约有GPⅡb/Ⅲa受体50000个。每个受体是由a和β亚单位组成。相对分子质量为92，由762个氨基酸的组成。电镜下血小板内有许多细胞器，其中重要的是α颗粒，致密δ颗粒，溶酶体γ颗粒。α颗粒主要含有β血小板球蛋白，β血小板球蛋白是血小板特异的蛋白质，可抑制血管内细胞产生PGΙ，促进血小板聚集[9]。

急性心肌梗死患者中测得血小板数值高于健康人群，其中血小板GPⅡb/Ⅲa水平也较健康对照明显升高，是急性心肌梗死患者应用抗血小板聚集药物的原因。疾病组间PLT、CD41+/CD61-、CD41-/CD61+、CD41+/CD61+比较，PLT各组与健康对照组比较，P＜0.0005；均有非常显著性差异。CD41+/CD61-，P＜0.0005；CD41-/CD61+，P＜0.0005;均有非常显著性差异。CD41+/CD61+,AMI组Y与AMI伴PLT减少组比较，P＜0.05，有显著性差异。AMI伴PLT减少组与对照组、AMI与与对照组比较，P均＜0.0005，均有非常显著性差异。结果表明AMI和AMI伴PLT减少者与健康对照组均有变化。

AMI伴PLT减少数值分层与健康对照组CD41/ CD61值比较，CD41+/CD61-比较，PLT（80～100）× 109/L∶（50～80）×109/L、（80～100）×109/L∶（30～50）×109/L、（50～80）×109/L:（30～50）×109/L，P＜0.0005，均有非常显著性差异。CD41-/CD61+比较, PLT（80～100）×109/L∶（50～80(）×109/L，P＞0.05，无显著性差异。其余P＜0.0005，均有非常显著性差异。CD41+/CD61+比较，PLT（80～100）×109/L∶（50～80）×109/L，P＞0.05。其余P＜0.0005，均有非常显著性差异。

血小板数值分层中（80～100）×109/L及（50～80）×109/L患者中血小板GPⅡb/Ⅲa水平较健康对照升高，（30～50）×109/L患者血小板GPⅡb/Ⅲa水平较健康对照低。

抗血小板聚集药物只在血小板数值正常及偏高人群中应用，确定其血小板GPⅡb/Ⅲa水平也明显高于健康人群。虽然血小板数较正常人为低但只要血小板GPⅡb/Ⅲa水平较高，则应用抗血小板聚集药物。故大胆推荐一下血小板≥50×109/L且血小板GPⅡb/Ⅲa水平高于健康人群中，抗血小板聚集药物可在严格观察下使用。

急性心肌梗死血小板聚集的机制复杂，影响血小板活化的因素很多。如麻醉、手术、血小板功能缺陷。其治疗的选择也可根据病人血管解剖因素、血流动力学、血小板数值及功能等多种因素全面考虑，采取针对性治疗。急性心肌梗死患者血小板表面糖蛋白Ⅱb/Ⅲa的表达有助于指导急性心肌梗死疾病的抗血栓治疗，尤其是GPⅡb/Ⅲa受体阻断药的适时应用。不同实验室所测阳性表达率不同[10]，可能为血小板容易活化，处理时间或方法不同所致所致。

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Patients with Acute Myocardial Infarction,Platelet Surface Sugar inside the EggⅡb/Ⅲa Expression and Meaning

Wang Wenlong,Huang Xiaohui,Zhang Jinying
(The First Affiliated Hospital of Zhengzhou University,Zhengzhou 450052,Henan)

ObjectiveTo investigate the platelet surface glycoprotein(GP)in patients with acute myocardial infarc⁃tionⅡb/Ⅲa expression.MethodsHealthy controls,acute myocardial infarction group and acute myocardial infarction associated with thrombocytopenia group platelets between numerical and CD41/CD61 detection.Acute myocardial infarc⁃tion associated with thrombocytopenia group numerical layers are divided into three groups.Application of flow cytometry detection in patients with acute myocardial infarction,acute myocardial infarction with thrombocytopenia patients and healthy controls of platelet surface GPⅡb/Ⅲapositive expression rate.Application of SPSS 15.0 software,the data ob⁃tained using analysis of variance and t test.Results The groups of platelet count:acute myocardial infarction group is sig⁃nificantly higher than healthy control group.Acute myocardial infarction with thrombocytopenia group significantly lessthan healthy controls.Each group PLT,CD41+/CD61-and CD41-/CD61+,CD41+/CD61+comparison,PLT,P＜0.0005.CD41+/CD61-,P＜0.0005.CD41-/CD61+,P＜0.0005,all have very significant difference.CD41+/CD61+, acute myocardial infarction group compared with acute myocardial infarction with thrombocytopenia group Y,P＜0.05, there is significant difference.AMI with reduced PLTgroup and control group,acute myocardial infarction compared with control group,P＜0.0005,all have very significant difference.Platelet numerical layered after three groups com⁃pared with healthy control group CD41/CD61,CD41+/CD61-comparison of platelets,（80～100）×109/L:（50～80）× 109/L,（80～100）×109/L:（30～50）×109/L,（50～80）×109/L:（30～50）×109/L P＜0.0005,there is a very significant differ⁃ence.CD41-/CD61+more platelets,（80～100）×109/L:（50～80）×109/L,no significant difference.The rest of the P＜0.0005,all have very significant difference.CD41+/CD61+comparison,platelets,（80～100）×109/L:（50～80）×109/L, P＞0.05.The rest of the P＜0.0005,all have very significant difference.Conclusion Flow cytometry to detect antiplate⁃let GPⅡb/Ⅲa using platelet aggregation in treatment of acute myocardial infarction(mi)has important guiding signifi⁃cance.

Acute myocardial infarction(mi)/diagnosis;Platelet glycoproteinⅡb/Ⅲa compounds;Flow cytom⁃etry

R541.4

：A

：1008-4118（2016）04-0005-04

10.3969/j.issn.1008-4118.2016.04.002

2016-11-01

张金盈。E-mail:Vellonvon@foxmail.com。