一种新型中草药消毒剂杀菌效果研究

李 萍，王慧琴，马素好，邵南齐，李延卿

一种新型中草药消毒剂杀菌效果研究

李 萍，王慧琴，马素好，邵南齐，李延卿

中草药消毒剂；杀菌；悬液定量杀菌试验；稳定性；现场消毒

随着化学消毒剂对人体健康存在的威胁逐渐为人们所重视，人们更倾向于追求天然、绿色、安全、有效的消毒产品。具有清热解毒、消炎抑菌等生物学活性的中草药越来越受到人们的青睐［1］。由此中草药消毒剂用于皮肤、空气、器具、食物等消毒的研究和应用越来越多［2－4］。该研究选取了金银花、野菊花、牡丹皮等中草药提取制备而成一种新型中草药消毒剂，原液呈淡黄色。并对该复方中草药消毒剂杀菌效果及其稳定性，进行了实验室观察。现将结果报告如下。

1 材料与方法

1．1 菌悬液制备将金黄色葡萄球菌（ATCC 6538）、大肠杆菌 （ATCC 8099）、铜绿假单胞菌（ATCC 15442）及白色念珠菌（ATCC 10231）经37℃营养琼脂培养基（白色念珠菌为沙保弱培养基）培养24 h的新鲜斜面培养物，用胰蛋白胨生理盐水（TPS）稀释液洗下菌苔，并配制成浓度为1×107～5×107cfu／ml的菌悬液。

1．2 中和剂鉴定试验试验菌为金黄色葡萄球菌和白色念珠菌，共6组试验，按悬液定量杀菌试验方法进行。结果判定，以第1组有极少量菌生长或无菌生长，第2组菌数超出100 cfu／ml，但明显少于第3、4、5组，第3、4、5组间菌数的误差率不超出15%，第6组不长菌，试验需重复3次，结果一致，表明所选的中和剂及浓度适宜［5］。

1．3 悬液定量杀菌试验试验在20℃水浴中进行，试验消毒剂和菌悬液需预先进行恒温。在无菌试管中依次加入0．5 ml菌悬液和4．5 ml消毒剂（阳性对照为TPS），混匀。待作用至预定时间后，取0．5 ml上述混合液加入到4．5 ml已灭菌中和剂中再次混匀，中和作用10 min。取0．5 ml样液接种进行活菌培养计数，试验重复3次，计算杀灭对数值。

1．4 稳定性试验将该消毒剂原液密封后置于54℃恒温箱中保存14 d，分别在保存前后进行金黄色葡萄球菌杀灭效果试验，并对所得数据进行统计学分析，以比较存放前后杀菌效果变化情况。

1．5 手现场消毒试验随机选取30名志愿者，试验前，受试者充分搓擦双手。用无菌棉拭子在含有10 ml TPS稀释液的试管中浸湿，对受试者左手指屈侧进行涂抹采样，作为阳性对照组样本。然后用该消毒剂原液对受试者双手进行两遍擦拭消毒，消毒后用中和剂代替稀释液，再按上述采样方法对受试者右手指屈侧上残留的自然菌进行涂抹采样，作为试验组样本。将棉拭采样端剪入盛有5．0 ml中和剂的试管中，充分混匀，取0．5 ml洗脱液进行活菌计数，48 h后观察结果，计算杀灭对数值。

1．6 统计学处理统计分析时采用SPSS软件分析，采用t检验，以P＜0．05为差异有统计学意义。

2 结果

2．1 中和剂鉴定试验效果中和剂鉴定试验结果见表1。结果表明，中和剂选用10 g／L甘氨酸+10 g／L硫代硫酸钠+3 g／L卵磷脂的磷酸盐缓冲液，能有效中和该复方消毒剂对试验菌的残留作用，且中和剂及中和产物对试验菌生长无影响。

表1 消毒剂中和剂鉴定试验结果

2．2 定量杀菌试验结果定量杀菌试验结果表明，该消毒剂作用5 min，对悬液内金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌的平均杀灭对数值均>5．00，作用7．5 min，对白色念珠菌的平均杀灭对数值> 5．00（表2）。

2．3 稳定性试验结果稳定性试验结果表明，该消毒剂原液在54℃保存14 d后，对金黄色葡萄球菌的平均杀灭对数值差异无统计学意义，由此说明保存前后对金黄色葡萄球菌杀菌效果无影响（表3）。

2．4 手现场消毒试验经手现场消毒试验结果表明，用该复方中草药消毒液对手部皮肤擦拭消毒后，对30人次手上自然菌的平均杀灭对数值均> 1．00，消毒合格。

表2 消毒剂杀菌试验结果

表3 消毒剂放置前后对金黄色葡萄球菌的杀灭效果

3 讨论

研究表明，金银花对金黄色葡萄球菌抑菌作用最为显著，对大肠杆菌无作用或敏感度较低［6］。野菊花对大肠杆菌抑菌作用最强［7］；牡丹皮中丹皮酚等抑菌有效成分对铜绿假单胞菌抑菌作用最强［8］，对白色念珠菌试验菌株均有抑菌作用［9］。该研究首次选用以上三种具有广谱抗菌功效的中草药进行联合配伍，提取得到该新型复方消毒剂。中药复方的优势即中药配伍后可产生不同的化学和药理效应，起到协同抑菌作用［10］。该研究杀菌试验结果表明该消毒剂对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌和白色念珠菌均有不同程度的杀灭作用，且稳定性试验、手现场消毒试验亦符合消毒技术规范之要求。下一步还需对其毒性及应用做进一步研究。由于中草药消毒剂符合安全、高效、不良反应小的要求，因此具有良好的研究开发前景。

［1］陈佳佳，廖森泰，孙远明，等．中草药抑菌活性成分研究进展［J］．中药材，2011，34（8）：1313－1317．

［2］黄丽华，陈学杰．一种复方手消毒液杀菌效果及毒性的实验观察［J］．检验医学与临床，2011，8（6）：691－693．

［3］傅飞龙，马 军，石凤敏，等．中草药消毒剂防治空气微生物污染的研究［J］．中国医药科学，2013，3（22）：22－26．

［4］邱真真，王莎莎，鲁晓晴．新型复方中草药消毒剂的消毒效果及其杀菌机理研究［J］．中国消毒学杂志，2014，31（3）：231－234．［5］中华人民共和国卫生部．消毒技术规范［S］．2002：19－32．

［6］陈寿妮．金银花提取液抑菌活性的研究［J］．时珍国医国药，2014，25（3）：609－610．

［7］蒋 雨，陈安均，于 新，等．野菊花提取物抑菌活性［J］．四川农业大学学报，2010，28（3）：328－332．

［8］杜 凡，李惠芬，王宇歆，等．牡丹皮中丹皮酚、总苷、多糖单用及合用后的协同抑菌作用考查［J］．天津药学，2008，20（2）：10－12．

［9］倪 玲，肖 蕾，陈 刚，等．中草药抗白色念珠菌活性成分研究进展［J］．中国消毒学杂志，2014，31（5）：503－505．

［10］梁生旺，王淑美，陈阿丽．中药配伍前后的化学变化研究及分析方法［J］．河南中医学院学报，2007，22（1）：44－46．

［2015-10-14收稿，2015-11-12修回］

［本文编辑：吴 蓉］

R979.7

B

10.14172/j.issn1671-4008.2016.04.022

450064河南郑州，郑州澍青医学高等专科学校（李萍，王慧琴，马素好，邵南齐）；450000河南郑州，河南中医学院第一附属医院检验科（李延卿）