妊娠相关血浆蛋白A检测标准化研究进展

吴以刚广西容县妇幼保健院检验科，广西玉林　537500

妊娠相关血浆蛋白A检测标准化研究进展

吴以刚
广西容县妇幼保健院检验科，广西玉林537500

妊娠相关血浆蛋白A（PAPP-A）是临床常见的蛋白，该细胞由胎盘合体滋养细胞、蜕膜细胞等组成的大分子糖蛋白，由2个PAPP-A分子与2个嗜伊红主要碱性蛋白前体（proform of eosinphil major basic protein，proMBP）组成的异构聚合体，在胚子早期发育、孕卵的着床及妊娠的维持和胎儿的生长等方面均发挥了重要的作用。孕妇血清PAPPA浓度已成为检测非整倍体胎儿的可靠检测指标，同时PAPP-A测定在高危妊娠的筛选和监护及妊娠细胞疾病的诊断等方面均发挥了重要的作用。目前，PAPP-A检测标准化取得了一定进展，但还面临许多问题，不同实验间的检测结果差异明显，不具有可比性，给PAPP-A临床应用带来不便。因此，PAPP-A检测标准化是亟待解决的问题，目前亟需建立作为产前筛查标志物PAPP-A标准化参考测量系统和研制新的PAPP-A标准物质。

妊娠相关血浆蛋白A；PAPP-A；产前筛查；标准化

［Abstract］Pregnancy-associated plasma protein A is a common protein in clinic，and the cell is a macromolecular glycoprotein composed of urocortin in syncytiotrophoblast and decidua cells and an isomerism polymer composed of 2 PAPP-A molecules and 2 proform of eosinphil major basic proteins，which plays a major role in the early development of cotyledons，nidation，pregnancy maintenance and fetal growth，the serum PAPP-A concentration of pregnant women has become the reliable test indicator of aneuploid fetus，at the same time，the PAPP-A measure plays an importance role in the screening and monitoring of high-risk pregnancy and diagnosis of gestational cell disease，at present，the PAPP-A test standardization has got a certain process，but it is still faced with many issues，and the difference in the test result between different tests was obvious without comparability，which brings inconvenience to the clinical application of PAPP-A，therefore，PAPP-A test standardization is an urgent issue，at present，it is urgent to establish the prenatal screening mark PAPP-A standardized reference measurement system and develop the new PAPP-A reference material.

［Key words］Pregnancy-associated plasma protein A；PAPP-A；Prenatal screening；Standardization妊娠相关血浆蛋白（PAPP-A）最早于1974年国外学者在孕妇血液中测定，并发现PAPP-A浓度和胎盘功能有关。目前，在孕早期测定孕妇血清中PAPP-A已经应用于临床异常妊娠的预测，特别对于唐氏综合征（Down′s syndrome，DS）等染色体异常的筛选有较大的临床价值［1］。PAPP-A能够诊断孕期产妇及胎儿的健康状况［2］。PAPP-A与其他诊断方法相比优势较多，当机体内PAPP-A水平下降时，母血中PAPPA水平仍在升高，它是唯一一种在母血中最高，胎血不含的妊娠蛋白。同时，对于流产、早产、宫内死胎孕妇机体内PAPP-A含量也相对较低，该指标检测时灵敏度较高，特异性也比较强，在临床上研究也越来越多［4-5］。

相关研究显示：PAPP-A与其他疾病，如：动脉粥样硬化等也存在紧密的联系，能作为血液中的重要标志物。研究表明PAPP-A很可能是急性冠脉综合征早期诊断、危险分层以及预后评价的一个新标志物［6-7］。该文旨在探讨孕妇产前筛查PAPP-A检测的临床意义及标准化研究进展。

1　PAPP-A结构及特性

PAPP-A来源相对相对广泛，主要由胎盘合体滋养层细胞、蜕膜细胞及子宫内膜间质细胞分泌合成，属于锌指蛋白超家族中的一员，是由2个PAPP-A分子与2个嗜伊红主要碱性蛋白前体 （proform of eosinphil major basic protein，proMBP）组成的异构聚合体，PAPP-A两个亚基分别与ProMBP的两个亚基中的一个以二硫键相连，等电点pH4.4，相对分子质量为474 000［8］。近年来，随着医疗技术的飞速发展，PAPP-A在女性外周血、卵泡液、子宫液基男性精液中也存在较多含量，但是对于乳腺癌患者而言PAPP-A含量相对较低，所占比例不到1‰。

PAPP-A及proMBP基因编码主要位于第9号［9］和第11号［10］染色体中，相对分子质量为199［11］和38 kDa［12］。在孕妇血清中主要以PAPP-A/proMBP复合物的形式存在，而在非孕妇血清中主要以PAPP-A同型二聚体形式存在，发挥其生物效应。孕妇血清中PAPP-A与急性冠状动脉综合症相关PAPP-A不近相同，能为动脉粥样硬化的检测提供新的方法［13］。

PAPP-A在 0℃，pH4～10时性质稳定，pH＜2或pH＞12时完全破坏，60℃条件下，在30 min以内可不被破坏，并且在70℃温度下其活性受到明显的破坏，并且蛋白酶的免疫反应也受到明显的破坏，但是核酸酶等并不能让其失去活性。同时，PAPP-A在4℃、pH7.1条件下能溶解在浓度为30.0%的硫酸铵溶液中。

2　PAPP-A生物学功能

目前PAPP-A合成分泌的具体机理尚未完全阐明，但是临床上将该指标作为母体、胎儿的分界面结果值得肯定。另一方面，在人体中PAPP-A能激活机体内的免疫抑制作用，降低胎儿受母体排斥率，能够阻断母体吞噬细胞中的蛋白水解位置胎盘功能的正常发挥。相关学者研究显示：PAPP-A在人体中主要以非竞争方式抑制生物酶的活性，从而能抑制滋养层的过度增生，而在精液、卵泡中PAPP-A则能促进卵细胞的发育。由此看出：PAPP-A在人体中对于配子的发育、孕卵的着床、维持胎儿的生长、发育等中具有显著的作用。

3　PAPP-A在临床中的应用价值

相关学者研究显示：PAPP-A能作为孕早期筛查指标［15］。许多研究证实，在孕9-13周，PAPP-A可作为血清标志物，结合 Freeβ-hCG以及颈部半透明度（NT）的超声检测鉴别出患唐氏综合征胎儿的高危孕妇［16］。应用该标志物的联合检测，其检出率可达70%（仅采用血清标志物）和90%（联合颈半透明度NT检测），假阳性为5%［1，17-18］。怀有唐氏综合征胎儿孕妇血清PAPP-A水平，显著低于正常孕妇（P＜0.05），由此看出：PAPP-A浓度已成为检测非整倍体胎儿的可靠检测指标［19］。

Zimmermann等人进行了一次实验，实验中对1151例孕妇在孕对10～13周测定其血清PAPP-A，结果显示：对于确诊的21-三体、18-三体孕妇PAPP-A水平，显著低于正常孕妇（P＜0.05）［20］。由此看出：PAPP-A能作为孕早期相对比较重要的胎儿遗传性疾病筛查方法。数据报道显示：孕早期单一测定PAPP-A疾病检出率为41.0%～52.5%，显著高于AFP、uE3及β-hCG（P＜0.05）。但是，随着孕妇孕周的不断增大，血清PAPP-A在测定过程中受到的影响因素较多，其准确性出现下降趋势。因此，血清PAPP-A更加适用于孕早期［21］。

另外，PAPP-A能作为孕早期胎儿是否健康的重要指标。相关研究显示：孕早期血清PAPP-A水平与胎儿、胎盘的体征呈正相关。对于双胎妊娠妇女PAPP-A水平，显著高于正常孕妇（P＜0.05），通过动态监测PAPP-A水平能了解可作为早孕诊断指标及孕期胎儿健康监测指标。由此看出：动态监测血清PAPP-A能了解胎儿胎盘功能，从而可以推断出胎儿宫内发育情况，对于了解胎儿生长情况具有重要的意义。同时，动态监测PAPPA还能实现对高危妊娠的筛选，排除胎儿畸形等。

4　PAPP-A检测方法

目前，临床上对与PAPP-A检测方法相对较多，早在1974年国外学者采用较差免疫电泳方法完成PAPPA测定，并经多年的发展相继出现较多的检测方法，如：放射免疫、酶联免疫、时间分辨荧光免疫等。但是，从检测方法的灵敏度来说放射免疫灵敏度最高，但是该方法检测时存在放射性污染。从目前产前筛查试剂来看，时间分辨荧光免疫和化学发光免疫是目前应用较广和较普及的两种检测方法。时间分辨荧光免疫是以稀土离子标记抗原或抗体、核酸探针和活细胞为特征的超灵敏检测技术，可进行双标记甚至多标记等优点。化学发光免疫法是一种以量度标记物化学反应所产生的光量为基础的分析方法，采用Y啶脂（acridinium Ester）作为标记物。其优点是低背景嗓音、化学反应简单、快速而无催化剂，适合在一般的实验室推广。多项研究表明，不同的原理测定方法得到的检测结果存在差异，而产前筛查要求测定结果不受检测方法的影响。因此，临床上和实验室研究积极有效的检测方法是目前亟需解决的问题。

5　PAPP-A检测标准化现状及行业标准制订

PAPP-A作为孕早期产前筛查的首选血清标志物，已越来越引起临床上的重视。研究表明，PAPP-A同其他血清标志物一样，检测结果误差可引起产前筛查的检出效果，如不同的检测方法和数据软件处理系统对同一标志物检测结果的差异、孕周、体重、种族、是否患有糖尿病等［21-22］。因此必须开展检测的标准化工作以保证测定结果的准确可靠性。

国际临床化学和实验室医学联合会（IFCC）专门成立了PAPP-A的标准化工作组，其职责主要是建立作为产前筛查标志物PAPP-A标准化参考测量系统，其成员主要来自欧洲国家的临床化学协会，主要工作是协调各协会目前正在开展的相关工作，起草相关文件，开展PAPP-A的标准化工作。世界卫生组织（WHO）1983年建立了PAPP-A参考物质WHO IRP 78/610，然而早已不再使用，目前IFCC的PAPP-A标准化工作组已被授权建立新的PAPP-A参考物质，国内同样没有建立PAPP-A参考物质。

尽管国际上PAPP-A标准化工作已经进行多年，但是我国的PAPP-A检测标准化工作还处于起步阶段。国内各临床实验室分析仪器种类繁多，试剂来自不同的厂家，其规格、检测性能、分析参数也各不相同，这些原因导致不同实验间的检测结果差异明显，不具有可比性，因此给PAPP-A临床应用带来不便。自2013上半年始，由国家卫生计生委临床检验中心组织开展了早孕期产前筛查室间质量评价计划，它是保证各临床实验室检测准确性的重要手段。可以确定参评实验室检测PAPPA、人绒毛膜促性腺激素游离β-亚基（Free β-HCG）测定的能力；发现在检测中存在的问题，提高实验室间检测结果的可比性。

为了推进PAPP-A检测的标准化工作，由北京市医疗器械检验所的全国医用临床检验实验室和体外诊断系统标准化技术委员会起草并组织讨论血清妊娠相关蛋白A定量检测试剂盒的国家行业标准征求意见稿，然后组织进行标准验证工作，参与验证的有罗氏、西门子和郑州安图等5家企业。通过对以上5个厂家的实验结果进行分析，并组织相关专家进行讨论，制订血清妊娠相关蛋白A定量检测试剂盒的国家行业标准，目前新标准尚未发布。PAPP-A体外诊断行业标准的制订，是PAPP-A检测标准化进程的里程碑，推动了我国体外诊断产品技术提升和产业规范。

6　展望

PAPP-A标准化参考测量系统需尽快建立，同时加快PAPP-A的标准物质研制进程，PAPP-A检测的标准化课题一旦完成，不但可以在临床上降低假阳性率，提高检出率，降低医疗费用，而且会对整个社会产生积极的影响。希望在其他临床实验室检测项目的标准化中可以以此为鉴。

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Standardization Research Process of Pregnancy-associated Plasma Protein A Test

WU Yi-gang
Department of Clinical Laboratory，Rongxian Maternal and Child Health Care Hospital，Yulin，Guangxi Province，537500 China

R47

A

1672-5654（2016）06（c）-0125-04

10.16659/j.cnki.1672-5654.2016.18.125

吴以刚（1971.3-），男，广西玉林人，大专，主管检验师，研究方向：本地区地中海贫血的分布及分型情况，产前筛查的检验标准化。

（2016-03-28）