20%浓戊二醛对鸡常见病原菌杀灭效果的试验

毛倩倩 ， 徐 峰 ， 孔祥强

(1.青岛康地恩动物药业有限公司 ， 山东青岛266109;2.青岛蔚蓝生物股份有限公司， 山东青岛266001)

20%浓戊二醛对鸡常见病原菌杀灭效果的试验

毛倩倩1，2， 徐 峰1，2， 孔祥强1,2

(1.青岛康地恩动物药业有限公司 ， 山东青岛266109;2.青岛蔚蓝生物股份有限公司， 山东青岛266001)

在畜牧养殖行业中，对动物传染病的控制主要有疫苗免疫、药物防治和环境消毒3种方式。消毒是贯彻“预防为主”方针的一项重要措施，消毒的目的是消灭被传染源散播于外界环境中的病原体，以切断传播途径，阻止疫病继续蔓延。消毒剂的优劣直接影响到消毒效果的好坏。戊二醛作为一种广谱、高效、低腐蚀、稳定的消毒剂和灭菌剂，已被广泛用于畜牧行业。本试验，以金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和沙门菌为杀灭对象，对市售20%浓戊二醛溶液进行消毒效果的研究；同时，对消毒剂在有机物干扰的情况下对细菌杀灭效果进行了观察；为其在实际临床使用提供理论依据和技术支持。

1 材料

1.1 受试细菌 临床分离的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、沙门菌。

1.2 主要试剂 甘氨酸、吐温-80、营养琼脂、MHB肉汤、0.03 mol/L 磷酸盐缓冲液、标准硬水、5%灭菌鸡粪水溶液。

1.3 药品 浓戊二醛溶液(含量20%，批号：2015092401，由青岛康地恩动物药业有限公司提供)。

2 方法

2.1 试验菌悬液的配制 将菌株划线接种于MH固体培养基培养24 h，用灭菌枪头挑取单个菌落，接种于3 mL MHB肉汤培养基中，置于37 ℃水浴恒温振荡仪中培养8 h。用标准硬水校正菌液浓度至 0.5麦氏标准浊度，此浊度含菌量约为108个/mL，再用MHB肉汤做10倍稀释(含菌量约为107个/mL)备用。

2.2 消毒剂稀释 将20%浓戊二醛用标准硬水稀释成不同浓度，置于已灭菌试管，每管4.5 mL。

2.3 中和剂配制 参照规范[1]和韩杰[2]方法，选用3%吐温-80+1%甘氨酸为中和剂。

2.4 杀菌试验 将已稀释好的消毒剂中分别加入受试菌液0.5 mL，混匀于20 ℃水浴中作用10、20、30 min，各吸取0.5 mL，加入4.5 mL中和剂混匀，作用10 min后每个混合液吸取100 μL进行涂板。每个涂板设3个平行，之后放37 ℃培养18 h～22 h后查看试验结果，用平板法作细菌计数[3]。同时设PBS对照组。然后按以下公式计算杀菌率[4]。试验重复6次。

计算杀菌率(pt)=[(no-nt)/no]×100 %，式中no为对照组活菌数，nt为消毒后试验组活菌数。

2.5 有机物干扰试验 以5%鸡粪水溶液代替PBS重复上述试验。

2.6 结果判定方法 消毒剂对细菌的杀菌效果是否有效以杀菌率是否达到99.9%以上的消毒剂的最高有效稀释倍数作为判定标准[5]。

3 结果与分析

3.1 20%戊二醛对鸡常见病原菌杀灭效果 由表1可知，20%浓戊二醛消毒剂对细菌的杀灭作用随着消毒剂浓度的升高和作用时间的延长而增强。1∶2 000 倍稀释对大肠杆菌、沙门菌和金黄色葡萄球菌均有良好的杀灭效果。当稀释4 000倍时，作用 30 min，对金黄葡萄球菌有良好的杀灭作用。

3.2 有机物干扰试验 由表2可知，在有机物干扰的情况，稀释1 000倍，10 min内仍能有效杀灭大肠杆菌、沙门菌和金黄色葡萄球菌。但高度稀释后，有机物干扰作用明显，但在2 000倍稀释，作用 30 min 对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌仍有良好的杀灭效果。

表1 20%戊二醛对鸡常见病原菌的杀灭效果/%

表2 20%浓戊二醛在5%鸡粪水中的杀菌效果/%

4 讨论

在实验室条件下，评价消毒剂杀菌效果，将混合液移到培养基中，不可避免的会带有少量残余消毒剂，可能进一步阻碍细菌在培养基中的生长繁殖，形成阴性结果[6]。因此，在定量杀菌浓度试验时，要除去残留消毒剂影响。本试验中，选用的中和剂能很好的中和消毒剂，其浓度并不影响细菌的生长。

戊二醛是一种速效、广谱的化学灭菌剂，在常温下低浓度的戊二醛溶液即可对多种微生物表现出杀灭活性[7]。同大多数消毒剂一样，20%浓戊二醛消毒液的杀菌效果随浓度增加、时间延长而增强[8、9]。稀释4 000倍，作用30 min对金黄色葡萄球菌仍用良好的杀灭作用。试验表明，戊二醛浓度越低，越易受有机物的影响，但延长作用时间，仍有一定的灭菌效果。

本试验在实验室条件下，对20%浓戊二醛进行初步研究表明，20%浓戊二醛溶液对鸡常见病原菌具有良好的杀灭作用，具有一定的推广价值。关于该消毒剂对真菌、芽孢和病毒等的消毒试验还在进行中。

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[3] 高东旗.季铵盐类消毒剂复方的应用[J].中国消毒学杂志，1993，10(4)：224.

[4] 农业部兽药审评委员会.兽药试验技术规范汇编[S].2001，30-47.

[5] Union Carbide Corparation UCARSAM Sanizizer.UCARSAM 4128 and Santizizer.1996

[6] 张冰，秦秀慧，李军,等.戊二醛和季铵盐复合消毒剂对鸡常见病原微生物杀灭效果的研究[J],中国实验动物杂志，2002,12(2)：95-98.

[7] 徐秀荣，刘霞，黄迪海，等.戊二醛癸甲溴铵溶液对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的杀菌效果研究[J].中国兽药杂志,2015,49(3):30-34.

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2016-01-08

毛倩倩(1988-)，女，硕士，研究方向为动物药评价、兽医药理学，E-mail：772074848@qq,com

徐峰，E-mail：xufeng@vlandgroup.com

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0529-6005(2016)12-0050-02