腹腔镜胆囊切除术后患者外周血T细胞比例及功能变化

张仕林　(黔南州人民医院胃肠外科，贵州　都匀　55800)



腹腔镜胆囊切除术后患者外周血T细胞比例及功能变化

张仕林(黔南州人民医院胃肠外科，贵州都匀55800)

〔摘要〕目的探讨胆结石采用腹腔镜胆囊切除术( LC)进行治疗对患者全身免疫功能的影响。方法选取50例胆结石患者，随机分为LC组和开腹腹腔镜胆囊切除术( OC)组各25例。分别于手术前和手术后24 h收集患者外周血，采用密度梯度离心法分离获取外周血单个核细胞( PBMC)。采用流式细胞术检测PBMC中CD4 T淋巴细胞比例、CD8 T淋巴细胞比例，并计算CD4 T/CD8 T淋巴细胞比例比值。采用胞内染色方法分析外周血干扰素( IFN)－γ+CD4 T细胞比例和穿孔素阳性CD8 T细胞比例。结果与手术前外周血CD4 T细胞比例相比，手术后24 h LC组患者外周血CD4 T细胞比例未出现显著变化( P＞0．05) ;而OC组患者术后24 h外周血CD4 T细胞比例与术前相比显著降低( P＜0．05)。两组患者术后24 h外周血CD8 T细胞比例与术前相比均未出现显著变化( P＞0．05)。LC组患者外周血CD4/CD8 T细胞比例比值未出现显著变化; OC组患者外周血CD4/CD8 T细胞比例比值显著降低( P＜0．05)。与手术前外周血IFN－γ+CD4 T细胞比例相比，手术后24 h LC组患者外周血IFN－γ+CD4 T细胞比例和穿孔素阳性CD8 T细胞比例均未出现显著变化( P＞0．05) ;而OC组患者术后24 h外周血IFN－γ+CD4 T细胞比例较术前显著降低( P＜0．05)，术后24 h外周血穿孔素阳性CD8 T细胞比例较术前显著升高( P＜0．05)。结论LC治疗对患者全身免疫功能的影响要轻于OC，可在临床广泛推广使用。

〔关键词〕腹腔镜胆囊切除术;开腹腹腔镜胆囊切除术;外周血; T细胞;免疫

腹腔镜胆囊切除术( LC)是胆道外科常用的手术，较传统的开腹腹腔镜胆囊切除术( OC)具有所需住院时间短、术中出血量少、术后恢复快、患者所承受的痛苦小、并发症发生率低、对患者全身免疫功能影响小等特点〔1～5〕。CD4 T淋巴细胞比例、CD8 T淋巴细胞比例、CD4 T/CD8 T淋巴细胞比例比值可作为预测腹部手术患者预后结果的指标〔6〕。本研究拟对比LC 和OC两种方法治疗胆结石后对患者外周血CD4T淋巴细胞比例、CD8 T淋巴细胞比例、CD4 T/CD8 T淋巴细胞比例比值、CD4 T淋巴细胞和CD8 T淋巴细胞功能的影响。

1材料与方法

1. 1临床资料选取2013年12月至2014年12月入院的50例胆结石患者，随机分为LC组和OC组，每组25例。其中LC组男11例，女14例;年龄20～70〔平均( 37．53±11．94)〕岁; OC组男12例，女13例;年龄21～72〔平均( 38．28±12．41)〕岁。两组患者年龄、性别、病程等比较均无统计学意义( P＜0．05)。患者均经腹部X线片及超声检查确诊为胆结石患者。

1. 2外周血单个核细胞( PBMC)获取采用Ficoll密度梯度离心法分离获取PBMC，严格按照试剂说明书。

1. 3流式细胞术分析方法分离获取PBMC以含1%胎牛血清( BSA)的磷酸盐缓冲液( PBS)洗涤2次后，加入CD3、CD4、CD8荧光抗体，于4℃冰箱中孵育30 min;以含1%BSA的PBS洗涤2次后，重悬于PBS中进行流式细胞仪检测。

1. 4胞内染色方法上述分离获取的PBMC中加入Activation Cocktail(含有高尔基体阻断剂)，于37℃，5% CO2培养箱中孵育6 h;收集细胞，按上述方法进行表面分子CD4和CD8流式细胞染色，随后加入0．5 ml细胞膜固定透化液，室温避光孵育30 min;以透化液洗涤细胞2次后加入γ－干扰素( IFN－γ)和穿孔素抗体，室温避光孵育30 min;以透化液洗涤细胞2次，细胞重悬于0．2 ml PBS中立即进行流式细胞仪检测。

1. 5统计学方法采用GraphPad软件进行t检验。

2结果

2. 1外周血CD4 T细胞比例变化与LC组手术前外周血CD4 T细胞比例( 31．82%±6．97%)相比，手术后24 h( 31．13%± 7．03%)未出现显著变化( P＞0．05) ; OC组术前外周血CD4 T细胞比例为( 30．91%±7．11%)，术后24 h为( 21．28%± 4．93%)，与术前相比显著降低( P＜0．05)。

2. 2外周血CD8 T细胞比例变化与LC组手术前外周血CD8 T细胞比例( 35．36%±6．95%)相比，手术后24 h( 35．18%±7．14%)无变化( P＞0．05) ; OC组术前外周血CD8 T细胞比例( 36．11%± 7．22%)与术后24 h( 36．33%±7．01%)相比无变化( P＞0．05)。

2. 3外周血CD4/CD8 T细胞比例比值变化LC组外周血CD4/CD8 T细胞比例比值未出现显著变化(术前: 0．90±0．15，术后0．58±0．06) ; OC组外周血CD4/CD8 T细胞比例比值显著降低(术前: 0．91±0．13，术后: 0．88±0．11) ( P＜0．05)。

2. 4外周血CD4 T细胞功能变化与LC组手术前外周血IFN－γ+CD4 T细胞比例( 36．33%±6．64%)相比，手术后24 h ( 35．82%±7．04%)未出现显著变化( P＞0．05) ; OC组患者术前外周血IFN－γ+CD4 T细胞比例为( 37．02%±6．82%)，术后24 h 为( 25．23%±5．21%)，与术前相比显著降低( P＜0．05)。

2. 5外周血CD8 T细胞功能变化与LC组手术前外周血穿孔素阳性CD8 T细胞比例( 18．83%±3．72%)相比，手术后24 h ( 17．93%±3．04%)未出现显著变化( P＞0．05) ; OC组患者术前外周血穿孔素阳性CD8 T细胞比例为( 18．85%±3．42%)，术后24 h为( 23．01%±3．55%)，与术前相比显著升高( P＜0．05)。

3讨论

胆结石是胆道系统中最常见的非致命性疾病〔7～9〕。胆结石主要根据发生位置分为胆囊和胆道两种类型:即胆固醇结石和色素结石〔10〕。胆结石在发达国家的患病率约为10%～15%〔11〕。右上腹胆结石所引起的疼痛以及相关的恶心、呕吐、餐后腹胀、右上腹不适等症状均会严重影响患者的生活质量。尽管对胆结石的病因进行了广泛的研究，然而胆结石的确切发病机制尚未完全研究清楚。目前胆结石主要的治疗方法有LC 和OC。LC是胆道外科常用的手术，分为顺行性(由胆囊管开始)切除和逆行性(由胆囊底部开始)切除两种。自20世纪80年代后期推出LC后，LC已成为胆囊疾病治疗的“金标准”，几乎完全取代了OC。文献报道，CD4 T淋巴细胞比例、CD8 T淋巴细胞比例、CD4 T/CD8 T淋巴细胞比例比值可作为预测腹部手术患者的预后结果的指标〔12〕。综上所述，本研究从全身免疫功能影响方面证实LC治疗对患者全身免疫功能的影响要轻于OC，为LC的临床推广提供了进一步的科学依据，证实LC可在临床广泛推广使用治疗胆结石。

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〔2015－05－26修回〕

(编辑袁左鸣/滕欣航)

〔中图分类号〕R575. 6

〔文献标识码〕A

〔文章编号〕1005-9202( 2016) 02-0399-02;

doi:10. 3969/j. issn. 1005-9202. 2016. 02. 069

第一作者:张仕林( 1964－)，男，副主任医师，主要从事腹腔镜胆囊切除术病发症的防范与处理研究。