白细胞介素-8基因-781 C/T多态性与肝癌及鼻咽癌发病风险的相关性

王俊利 韦叶生 唐毓金 韦贵将 胡仁统 覃海媚 陈启威

(暨南大学附属第一医院临床检验中心，广东 广州 510630)



白细胞介素-8基因-781 C/T多态性与肝癌及鼻咽癌发病风险的相关性

王俊利 韦叶生 唐毓金1韦贵将1胡仁统1覃海媚1陈启威1

(暨南大学附属第一医院临床检验中心，广东 广州 510630)

目的 探讨肿瘤细胞侵袭相关因子白细胞介素(IL)-8遗传多态性和广西壮族人群肝癌与鼻咽癌易感性的关系。方法 收集广西壮族肝癌患者260例与鼻咽癌患者251例，同时选取广西壮族健康人群270例为对照。利用单碱基延伸PCR技术和DNA测序法，检测广西壮族肝癌患者、鼻咽癌患者和健康对照者的IL-8基因-781 C/T位点单核苷酸多态性，再用χ2检验比较基因型和等位基因型分布频率在病例组和对照组之间的差异。结果 IL-8基因位点-781 C/T在肝癌组和对照组之间的基因型和等位基因频率分布无统计学差异(CT/CC：OR=1.14，95%CI=0.79～1.64，χ2=0.509，P=0.476；TT/CC：OR=0.61，95%CI=0.34～1.10，χ2=2.775，P=0.096；T/C：OR=0.89，95%CI=0.69～1.15，χ2=0.778，P=0.363)。同时，IL-8基因位点-781 C/T在鼻咽癌组和对照组之间的基因型和等位基因频率分布也无统计学差异(CT/CC：OR=1.29，95%CI=0.86～1.88，χ2=1.765，P=0.184；TT/CC：OR=1.34，95%CI=0.79～2.27，χ2=1.172，P=0.279；T/C：OR=1.18，95%CI=0.92～1.52，χ2=1.749，P=0.186)。结论 在广西壮族人群中，IL-8基因-781 C/T位点的遗传多态性可能和肝癌与鼻咽癌的易感性无关。

单核苷酸多态性；白细胞介素-8；肝癌；鼻咽癌

遗传因素可能在肝癌和鼻咽癌发病过程中发挥重要作用〔1～3〕。白细胞介素(IL)-8是由B淋巴母细胞、巨噬细胞和树突细胞应答抗原刺激产生的肿瘤侵袭相关因子，在肿瘤细胞迁移、侵袭和血管生成等过程中发挥重要作用。肝癌等肿瘤组织和患者血浆中都伴有IL-8水平高表达，且IL-8的高表达和肿瘤转移程度与预后呈正相关〔4,5〕。IL-8基因多态性也与多种肿瘤的发生发展密切相关，并且逐渐成为研究的热点。但是，在广西壮族人群中IL-8基因和肝癌与鼻咽癌这两种区内高发肿瘤的关系却鲜有研究。为了研究在广西壮族人群中IL-8基因和肝癌与鼻咽癌的关系。

1 资料与方法

1.1 对象 肝癌组为2010年3月1日至2014年12月31日来我院就诊的260例肝癌患者，男136例，女124例；年龄32～85〔平均(53±11)〕岁。同期我院收治的251例鼻咽癌患者为鼻咽癌组，男161例，女90例；年龄29～89〔平均(50±14)〕岁。纳入标准：所有患者病理诊断为肝癌或鼻咽癌；三代世居广西的壮族人群；未曾接受过放疗和化疗。选取2012年1月1日至2012年12月31日我院无恶性肿瘤史、三代世居广西的壮族人群270例健康体检者，男176名，女94名；年龄29～90〔平均(52 ± 15)〕岁。本研究经我院伦理委员会同意，所有患者知情同意。

1.2 提取基因组DNA 抽取2 ml静脉血，用碘化钠法提取细胞基因组DNA。

1.3 聚合酶链反应 设计IL-8基因位点-781 C/T的PCR上游、下游引物及延伸引物，由上海英俊有限公司合成。-781 C/T的上游引物：5'-CTCTAACTCTTTATATAGGAATT-3'，下游引物：5'-GATTGATTTTATCAACAGGCA-3'。PCR反应体系包括2.0 μl 0.3 mmol/L dNTPs，2.0 μl 10×PCR反应缓冲液，1.0 μl上游引物，1.0 μl下游引物；1.0 U HotStar Taq DNA聚合酶及1.0 μl基因组DNA，用双蒸水补到20 μl。PCR的反应条件为94℃ 15 min，94℃ 30 s，60℃ 30 s，72℃ 20 s，共进行35个循环；72℃ 10 min。PCR 产物于4℃保存。

1.4 单碱基延伸反应和电泳测序 使用虾碱酶及外切酶Ⅰ纯化PCR产物，用SNaPshot Multiplex kit(ABI公司)行延伸反应。用虾碱酶纯化延伸产物，之后在ABI 3130XL上样，用Gene Mapper 4.0分析电泳结果。

1.5 统计学方法 应用SPSS17.0及SHEsis软件。计量资料比较行t检验，群体代表性用Hardy-Weinberg遗传平衡检测，计数资料用χ2检验。基因型、等位基因型分布频率与鼻咽癌发生的关系用二分类非条件Logistic回归进行分析，用OR及95%置信区间(CI)代表相对风险度。

2 结 果

2.1 IL-8基因多态性检测结果 IL-8基因PCR扩增产物为203 bp。ABI 3130XL的单核苷酸多态性(SNP)分型结果表明，-781 C/T位点的基因型包括CC、CT和TT三种。

2.2 Hardy-Weinberg遗传平衡检测 经过χ2检验，IL-8基因位点-781 C/T的基因型和等位基因型频率在对照组和肝癌组与鼻咽癌组分布符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05)，所选取的样本具有代表性和可比性。

2.3 IL-8基因-781 C/T位点多态性和肝癌易感性的关系 IL-8基因-781 C/T位点3种基因型CC、CT、TT在肝癌组中分布频率为39.6%(103例)、51.9%(135例)、8.5%(22例)，在对照组分别为40.0%(108例)、45.9%(124例)、14.1%(38例)；等位基因C在肝癌组和对照组中频率分别为65.6%(341例)、63.0%(340例)，等位基因T在肝癌组和对照组中频率分别为34.4%(179例)、37.0%(200例)。若以IL-8基因-781 C/T位点CC基因型的OR值为1，那么CT和TT基因型均不增加肝癌易感性(CT/CC：OR=1.14，95%CI=0.79～1.64，χ2=0.509，P=0.476；TT/CC：OR=0.61，95%CI=0.34～1.10，χ2=2.775，P=0.096)；等位基因型T相比于等位基因型C,亦不增加肝癌易感性(T/C：OR=0.89，95%CI=0.69～1.15，χ2=0.778，P=0.363)。

2.4 IL-8基因-781 C/T位点多态性和鼻咽癌易感性的关系 IL-8基因-781 C/T位点3种基因型CC、CT、TT在鼻咽癌组中分布频率为33.9%(85例)、50.2%(126例)、15.9%(40例)，等位基因C和T在鼻咽癌组中频率分别为59.0%(296例)、41.0%(206例)。若以IL-8基因-781 C/T位点CC基因型的OR=1，CT及TT基因型均不增加鼻咽癌易感性(CT/CC：OR=1.29，95%CI=0.86～1.88，χ2=1.765，P=0.184；TT/CC：OR=1.34，95%CI=0.79～2.27，χ2=1.172，P=0.279)；等位基因型T相比于等位基因型C,亦不增加鼻咽癌易感性(T/C：OR=1.18，95%CI=0.92～1.52，χ2=1.749，P=0.186)。

3 讨 论

IL-8是由B淋巴母细胞、巨噬细胞和树突细胞应答抗原刺激所产生的一种肿瘤细胞侵袭相关因子，在肿瘤细胞迁移、侵袭和血管生成等过程中发挥重要作用，因而在肿瘤研究中具有重要的价值〔6，7〕。多年研究成果表明，肝癌等肿瘤组织和患者血浆中都伴有IL-8水平高表达，且IL-8的高表达和肿瘤转移程度与预后呈正相关〔4，5〕。

IL-8基因位于人染色体4q13-q21区域，由1个启动子、3个内含子和4个外显子构成。IL-8基因内含子区-781 C/T发生突变，可引发基因剪接信号的改变，从而影响IL-8 的功能，进一步影响肿瘤的发生和发展，因此IL-8基因-781 C/T位点多态性可能会与肿瘤的易感性有一定关系。目前有一些文献已经报道了IL-8基因-781 C/T位点多态性与神经胶质瘤、骨肉瘤和肝癌等肿瘤的易感性的关系〔8～10〕。但是，IL-8基因多态性与广西壮族人群肝癌和鼻咽癌易感性的关系尚未定论。来自中国西安的Liu等〔8〕应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法分别检测300例中国陕西人群神经胶质瘤患者和300例健康对照者的IL-8基因-781 C/T位点多态性，结果提示IL-8基因-781 C/T位点多态性与神经胶质瘤的易感性无关。而在一个关于IL-8基因-781 C/T位点多态性与骨肉瘤易感性的研究中，来自天津的Chen等的研究团队的研究结果也提示了IL-8基因-781 C/T位点多态性与骨肉瘤易感性无关〔7〕。本项研究结果结合这两项研究结果，可以谨慎推测IL-8基因-781 C/T位点多态性可能与中国人群罹患肝癌、鼻咽癌、神经胶质瘤和骨肉瘤的风险无关。但是和本次研究结果有差异的是，来自中国台湾的Chien等〔10〕通过检测131例肝癌患者和340例对照者IL-8基因-781 C/T位点多态性发现，IL-8基因-781 C/T位点TT基因型相比于CC基因型显著降低人群罹患肝癌的风险性。分析上述结果不一致的原因可能为：(1)不同地区人群遗传异质性，(2)研究样本数量不足导致统计偏差。

综上所述，肝癌和鼻咽癌是由多种多基因多位点突变、环境刺激以及它们之间的相互作用引起的一种复杂疾病，其中遗传因素在它们发病过程中可能起着重要作用。在广西壮族人群中，IL-8基因-781 C/T位点遗传多态性和肝癌与鼻咽癌的易感性无关。鉴于本研究收集的样本数目较少，也仅选择了IL-8 基因的1个多态位点，所以只能视其为一个初步研究，今后将进一步扩大检测样本数量和检测位点，同时纳入不同地域和不同种族的人群进行深入研究。

1 Khalifa RH,Bahgat DM,Darwish HA,etal.Significant association between FasL gene-844T/C polymorphism and risk to hepatocellular carcinoma in Egyptian patients〔J〕.Immunol Lett,2016;172(1):84-9.

2 毛盈颖,丁 烨,陈 坤.长链非编码RNA遗传多态性与恶性肿瘤易感性的关系〔J〕.中华肿瘤杂志,2013;35(11):801-3.

3 鲁明骞,孔庆志,许新华,等.MKK4基因启动子区-1304T/G多态性与散发性鼻咽癌易感性的关系〔J〕.临床耳鼻咽喉头颈外科杂志,2016;30(4):287-90.

4 叶英楠,龙欣欣,于文文,等.肝细胞肝癌组织表达IL-8 对肿瘤侵袭、转移的影响〔J〕.实用肿瘤杂志,2014;29(6):522-6.

5 An H,Zhu Y,Xie H,etal.Increased expression of interleukin-8 is an independent indicator of poor prognosis in clear-cell renal cell carcinoma〔J〕.Tumour Biol,2016;37(4):4523-9.

6 龙欣欣，叶英楠，李 慧,等.NTS/IL-8信号通路与恶性肿瘤相关性的研究进展〔J〕.山东医药,2014;54(30):93-4.

7 Zhu B,Lin N,Zhang M,etal.Activated hepatic stellate cells promote angiogenesis via interleukin-8 in hepatocellular carcinoma〔J〕.Journal of translational medicine,2015;13:365-9.

8 Liu H,Mao P,Xie C,etal.Association between interleukin 8-251 T/A and +781 C/T polymorphisms and glioma risk〔J〕.Diagn pathol,2015;10(2):138-42.

9 Chen Y,Yang Y,Liu S,etal.Association between interleukin 8-251 A/T and +781 C/T polymorphisms and osteosarcoma risk in Chinese population:a case-control study〔J〕.Tumour biology,2016;37(5):6191-6.

10 Chien MH,Yeh CB,Li YC,etal.Relationship of interleukin-8 gene polymorphisms with hepatocellular carcinoma susceptibility and pathological development〔J〕.J Surgic Oncol,2011;104(7):798-803.

〔2016-04-11修回〕

(编辑 袁左鸣)

国家自然科学基金(81560461,81260315)；广西自然科学基金(2012GXNSFAA053169)

韦叶生(1969-)，男，教授，博士生导师，主任技师，主要从事鼻咽癌的基础与临床研究。

王俊利(1979-)，男，在读博士，副主任医师，主要从事恶性肿瘤的临床分子诊断研究。

R73

A

1005-9202(2016)20-5045-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2016.20.049

1 右江民族医学院附属医院