牛支原体的研究进展

桑旦欧珠 高家登曲 久

（西藏那曲地区畜牧兽医技术推广总站，西藏那曲 852000）

牛支原体的研究进展

桑旦欧珠 高家登*曲 久

（西藏那曲地区畜牧兽医技术推广总站，西藏那曲 852000）

牛支原体又被称为牛霉形体，主要引起犊牛的肺炎、关节炎及肉牛和奶牛的角膜结膜炎、耳炎、乳腺炎、生殖道炎等在内的多种疾病。我国对牛支原体的研究比较少，在牛发病时容易被忽视。本文就牛支原体的病原学、流行病学、致病性、临床症状、病理变化、诊断和治疗进行了阐述。

牛支原体病原学临床症状

牛支原体（Mycoplasma bovis，M. bovis）又被称为牛霉形体，是一类缺少细胞壁，体积微小，介于病毒与细菌之间的原核微生物。不仅是感染牛的一种重要的病原体而且还很容易被人们所忽视。牛支原体主要引起犊牛的肺炎、关节炎及肉牛和奶牛的角膜结膜炎、耳炎、乳腺炎、生殖道炎等在内的多种疾病。美国于1961年首次在病牛患有乳腺炎的病料中分离出支原体[1］，1983年我国首次在患有牛乳腺炎的牛奶中分离到牛霉形体[2］，此后很少报道支原体，只有少数的临床证实支原体的报道。直到2008我国首次从肉牛患有坏死性肺炎中分离出支原体，并确定为牛支原体肺炎[3］。随后，辛九庆、李嫒等从部分犊牛出现严重肺炎症状的肺脏中分离并培养出支原体，首次证实了在我国部分地区存在牛支原体的流行情况[4］。由于牛支原体对世界的养牛业危害严重，药物治疗效果不明显，疫苗研制已成为开发重点。目前美国研制了牛支原体灭活疫苗，可降低犊牛肺脏的损伤[5］。但目前除美国外，几乎没有商业化疫苗用于牛支原体感染的预防。美国虽公布两种商业化疫苗，但没有公开发表说明疫苗的有效性，而目前所用的疫苗有严重的副作用[6］。

1　病原学

牛支原体属于柔膜体纲，没有细胞壁，能在无细胞生命培养基中繁殖生长的原核细胞型微生物，基因组大小是1080kb属于双股DNA，G+C含量较低一般为27.8%～32.9%，16SrRNA上无乳支原体与其同源性达到99.8%[7］。牛支原体个体微小，能透过220nm的细菌滤膜，以二分裂方式生长繁殖，在液体或固体培养基中生长较慢，一般在5% CO2细菌培养箱中培养3～7d，染色其形状呈“油煎蛋”样，革兰氏染色阴性但着色效果不佳，瑞氏染色良好呈淡紫色，吉姆萨染色呈淡蓝色。葡萄糖、酪蛋白、精氨酸等不能被牛支原体分解，只能用丙酮酸、乳糖等有机酸类物质提供能量。牛支原体属于黏膜常在菌，主要存在于呼吸系统黏膜、乳腺黏膜、眼结膜、生殖道黏膜等部位，对外界抵抗力不强，高温或干燥都可使其迅速死亡，对一般的消毒剂抵抗力较小，对甲紫和醋酸铊、磺胺类药物和青霉素均有抵抗力[8］。在4℃牛乳中可存活60d，在水中可存活14d以上。70℃经1min或65℃经2min即可失去活性[9］，在4℃～37℃的液体中可存活59～185d[10］。

2　流行病学

各种牛对支原体的易感性依其生活方式、品种及其个体的抵抗力不同而有区别，奶牛和肉牛易感，黄牛和水牛不易感，人不易感，自从首次分离到支原体至今，仅有一例报道从病人体中分离到牛支原体[11］。目前牛支原体的潜伏期还不确定，国外有报道在健康犊牛群中引入感染牛24 h后，就能从犊牛鼻腔中排出牛支原体，但大部分牛在接触感染牛一周后经鼻腔分离到牛支原体[3］。部分牛在接触感染牛14d后发病，病牛和带菌牛是主要的传染源，有的病牛在康复后的1.5年甚至2～3年后仍可感染健康牛，在老疫区感染的牛群有30%～45%的牛呈亚临床经过[8］。我国牛支原体病的流行大部分与长途运输有关，大部分牛在运输应激后7d发病，少数牛在运输应激后2d发病，还有的架子牛在运输到目的地后10d左右发病[3］。牛群一旦感染支原体将难以消灭，如果在继发其他呼吸道疾病，死亡率将显著增加。主要经呼吸道传播，病原体通过呼吸道排出，有时也可经乳汁、尿液或子宫渗出液排出，因此近距离接触、犊牛吸吮乳汁或接触已发病牛的尿液或子宫渗出液的牛只就有可能感染牛支原体。

在世界范围内牛支原体广泛存在，季节、性别、气候和年龄等因素对易感性无影响。但条件应激、畜舍过度拥挤、饲养管理条件差可以使本病流行。由于牛感染支原体后使其免疫力降低，从而引起其他疾病的继发或混合感染，国外主要报道混合感染的疾病有呼吸道合胞体病毒、溶血性巴氏杆菌等[10］，国内报道的牛泰勒虫病混合感染率较高[3］，而牛支原体与多杀性巴氏杆菌A型和化脓隐秘杆菌混合感染也有报道[12］。

3　致病性

支原体的致病性主要与其毒力和侵袭力有关。而支原体的侵袭力主要作为毒力的载体突破机体的防御功能，并在体内定居、生长、繁殖。侵袭力主要依靠其脂质相关膜蛋白和粘附结构来表现。在支原体致病过程中，其入侵和致病损伤的关键和前提是对宿主的粘附。而牛支原体却没有专门的粘附结构，但其基因组内有数个能表达一组具有粘附功能的脂质膜蛋白。该组蛋白至少有13个可变的基因编码，又被称为可变表面脂蛋白（variable surface lipoproteins，Vsp），牛支原体的Vsp已鉴定多个，有VspA、VspB、VspC、VspF、VspO和VspL[13］，可能还有其他的粘附蛋白，如P26抗原、28ku蛋白、pMB67等。这组蛋白不仅可以介导牛支原体与宿主组织或细胞的黏附，而且还具有很强的免疫原性，可诱导黏膜免疫[14］。支原体可以利用表面粘附蛋白造成细胞膜损伤，同时支原体也可代谢有毒产物，如神经外毒素、水解酶等发挥毒素作用，也可对宿主细胞造成损伤。

4　临床症状与病理变化

4.1临床症状

发病初期病牛体温升高至40℃～42℃，出现稽留热，在清晨、傍晚吸入冷空气或喝冷水刺激时常表现激烈的短、干的咳嗽，有浓性或清亮鼻液流出。患有急性型的病牛出现食欲减退或废绝，呼吸加快或呼吸困难、频繁干咳、前肢外展、鼻孔扩张。因胸部疼痛进而呈腹式呼吸。胸部叩诊，患部出现实音或浊音区。胸部听诊，出现湿性啰音以及支气管呼吸音，如继发胸膜炎可听到摩擦音，此时叩诊可出现疼痛。发病后期，心脏衰弱，脉搏快而弱，80～120次/min，有时出现肉垂和胸下部水肿，反刍减少或停止，尿少但比重增加，腹泻与便秘交替出现，病牛因极度呼吸困难窒息而死。患有慢性型的病牛多由急性转来，也有开始发病即为慢性型，主要表现为病牛消瘦，被毛粗乱，食欲不振，大多数没有明显的临床症状，体温时高时低，偶发短咳，即使治愈，也会成为带菌者。随着病情的发展患牛出现腹泻，甚至出现血便；有的继发犊牛关节炎，表现关节肿大，卧地不起；有的还出现结膜炎，出现结膜潮红并有脓性分泌物[6，8］。

4.2病理变化

剖检的特征性病例变化主要在肺部和胸腔，典型的病理症状主要是浆液纤维素样胸膜炎和大理石样肺变。发病初期病变较小，出现肺炎的病灶水肿、充血，表现为紫红色或鲜红色。发病中期肺脏增重、肿大，肺间质增宽变厚呈灰白色，以右侧较多，胸膜和肺部粘连，且胸腔有少量积液；心包内有积液，液体呈黄色，心肌脂肪变性；由于病程的长短不一，肺部的变化也不尽相同，病程短的可见肺心叶、隔叶和尖叶出现局部红色肉变及化脓灶；严重的肺部出现化脓性或干酪样坏死。到发病后期肺脏病变被结缔组织包围，形成脓腔或空洞[6，8］。

5　诊断

根据流行病学调查、临床症状及病理变化，综合分析后可初步做出诊断。目前，国内外常用的确诊本病的方法主要有三种，分别为细菌的病原学检查、基因诊断和血清学诊断三种方法。

5.1细菌的病原学检查

无菌采集病牛的鼻拭子、肺脏或胸腔积液等病料接入支原体的专用培养基，经过5% CO2细菌培养箱中培养3～7d，在光学显微镜下观察支原体的形态呈“煎蛋样”，在结合生化试验即可进行鉴定；在液体培养基中，培养基的颜色由红变为黄色并且透亮，可见豆芽状或指环状的轻度乳光。由于支原体的分离鉴定难度大，时间长，不能迅速做出诊断，所以难以推广。

5.2基因诊断

主要采用的是PCR方法，由于无乳支原体与牛支原体有很高的同源性，在早期，利用PCR方法很难区分[15，16］。冉智光等参考牛支原体oppD/F基因设计两对特异性引物，扩增出牛支原体的特异性片段，不仅能与丝状支原体丝状亚种区别，还可与无乳支原体进行鉴别[17］。

5.3血清学诊断

主要采用的方法是间接ELISA方法，有时也用间接血凝试验和生长抑制试验进行牛支原体的检测。目前商品化的ELISA试剂盒主要有比利时和加拿大生产的ELISA试剂盒及国产全菌蛋白ELISA试剂盒[18］。

在鉴别本病时应与牛肺结核和牛多杀性巴氏杆菌进行鉴别诊断。

6　预防与治疗措施

6.1加强牛群的引进管理

坚持“自繁自养”的原则，不从疫区引进牛只，如果必须引进，在引进前做好牛支原体检测，阴性牛做好预防接种。引进后隔离观察，确保无病后方可与健康牛共同饲养。

6.2加强牛群的饲养管理

保持牛舍的干燥、清洁，做好通风、换气；减少各种因素的应激，如冬天禁止喝冷水等；年龄或品种不同的牛应分开饲养；牛舍的牛群不能拥挤，密度要适当；定时补充维生素、矿物质和精料；做好牛舍平时的消毒工作。

6.3治疗

“早诊断，早治疗”是控制本病的根本方法，发病早期全群应采用抗生素治疗有一定的效果，如果出现继发感染或者混合感染应选用敏感药物。由于支原体没有细胞壁，因此对青霉素和头孢类药物不敏感；支原体较敏感的药物有环丙沙星、四环素、泰乐菌素、泰妙菌素等抗菌药[19］；临床用药效果存在差异，这可能与该病的病程、耐药性及继发感染等因素有一定的关系[3］。

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桑旦欧珠（1975-），男，西藏人，兽医师，主要从事动物的疫病防治。

高家登*（1988-），男，河南人，从事动物传染病诊断与防治。