HPLC梯度洗脱法测定泮托拉唑钠肠溶胶囊中的有关物质含量

赵莉莉

HPLC梯度洗脱法测定泮托拉唑钠肠溶胶囊中的有关物质含量

赵莉莉

目的建立泮托拉唑钠肠溶胶囊的测定方法,科学测定泮托拉唑钠肠溶胶囊相关物质含量。方法选用国内3个厂家生产的10个批次的泮托拉唑钠肠溶胶囊,以20 μl为进样量,采用高效液相色谱法(HPLC)、梯度洗脱法(色谱柱为Kromasil C1,流动相为0.01 mol/L磷酸氢二钾溶液-乙腈,柱温40℃,流速1.0ml/min,波长290 nm),检测有关物质含量。结果泮托拉唑钠能被氧化、酸碱以及加热破坏,而不受辅料干扰,浓度0.56～50.50 μg/ml与峰面积具有良好线性关系,5 h内供试品稳定性良好,样品平均标示含量为99.8%,相对标准差(RSD)=1.09%,精密度较高,本实验中主峰与杂质峰分离度良好。结论HPLC梯度洗脱法具有操作简单、专属性好、精确度高以及灵敏度佳的优点,可以作为泮托拉唑钠肠溶胶囊相关物质测定的科学方法。

高效液相色谱法；梯度洗脱法；泮托拉唑钠肠溶胶囊；有关物质

泮托拉唑作为临床常用的质子泵抑制剂之一,其作用效果与奥美拉唑、兰索拉唑相似,主要应用在胃溃疡、返流性食管炎、十二指肠溃疡以及卓–艾氏综合征等疾病的治疗中［1］。药物有关物质检测对于保障药物应用的安全性具有重要意义,国内外目前检测药物物质含量多采用HPLC洗脱法进行［2］。本实验中应用HPLC法测定泮托拉唑有关物质含量,旨在建立泮托拉唑钠肠溶胶囊物质测定方法的同时,检测其药物稳定性和安全性,为临床应用提供参考。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂 1260型高效液相色谱仪(美国安捷伦生产),泮托拉唑钠肠溶胶囊(规格：以泮托拉唑计40mg/粒,生产厂家分别为大连美罗大药厂、华润双鹤药业股份有限公司以及杭州中美华东制药有限公司),磷酸氢二钠,磷酸二氢钠,乙腈(Merck 公司),超纯水(二次重蒸水)以及泮托拉唑钠对照品(来自于中国食品药品检定研究院) 。

1.2 实验条件

1.2.1 色谱条件参数 磷酸氢二钠以及磷酸二氢钠作为分析纯,乙腈作为色谱纯,色谱柱：Kromasil C18,即(250mm×4.6mm,5 μm),流动相：经磷酸调节后pH=7.0的0.01 mol/L磷酸氢二钾溶液-乙腈,线性梯度洗脱： 90：10起始(即0 min)→60：40进行30 min→15：85进行45 min；检测波长: 290 nm；流速：1.0ml/min；色谱柱温度：40℃；进样量体积：20 μl。

1.2.2 配置溶液 将泮托拉唑钠肠溶胶囊的内容物取出后研成细粉,取适量细粉,添加0.001 mol/L氢氧化钠溶液-乙腈(1：1) 溶液,待细粉溶解后,稀释到每1毫升溶液中含泮托拉唑0.4mg,经过滤、离心处理之后,取上清液用作供试品溶液。供试品溶液精密量取1ml,置入100ml量瓶之中,添加0.001 mol/L氢氧化钠溶液混合乙腈溶液(1：1)稀释至刻度,充分混匀后用作对照溶液。本实验中所配置的溶液单个杂质均为＞0.5% ,总杂质＜1.5%,在溶液色谱图分析中,未计入供试品溶液＜0.05倍对照溶液主峰面积的色谱峰。

1.3 实验方法

1.3.1 破坏性实验 ①氧化破坏。取适量泮托拉唑钠肠溶胶囊内容物(约相当于20mg泮托拉唑) 放置在50ml量瓶之中,添加10ml的0.001 mol/L氢氧化钠溶液-乙腈(1：1)使内容物溶解,在加入1ml的30%过氧化氢溶液,静置,第2天取出,再次添加氢氧化钠溶液-乙腈溶剂,直至达到刻度,混匀后,精确量取20 μl样品,应用高效液相色谱仪分析并记录色谱图。②加热破坏量取适量内容物放置在称量瓶之中后,在60℃条件下静置10 d后,从中称取约20mg泮托拉唑,加入50ml量瓶,添加氢氧化钠溶液-乙腈溶剂10ml,内容物溶解后,再稀释至50ml,摇匀,量取20 μl样品注入到液相色谱仪,分析记录色谱图。③酸碱破坏分别取相当于20mg泮托拉唑的内容物分别装入50ml量瓶中,分别添加10ml分析纯溶剂使其溶解,酸破坏实验量瓶添加0.1ml浓盐酸后放置1 min再添加1 mol/L氢氧化钠溶液,碱破坏瓶中添加5ml的1 mol/L氢氧化钠溶液后再添加1 mol/L盐酸,之后分别加入分析纯稀释至50ml,充分混匀后,分别取20 μl样品液进行液相色谱分析。

1.3.2 干扰试验 取不同生产企业的处方比例仅混合辅料配置,按照处方精确称取泮托拉唑钠制剂所用辅料200mg,放置在100ml 量瓶中,加流动相溶解稀释至刻度,摇匀,过滤,取 20 μl注入高效液相色谱仪,记录色谱图。

1.3.3 线性试验 取20mg泮托拉唑钠对照品置于50ml量瓶中,添加流动相待对照品溶解后,稀释至50ml,混匀,精密量取1、3、5、7ml溶液,分别置于4个10ml量瓶,添加流动相稀释至10ml,混匀,1.2.1色谱条件下,将样品浓度作为横坐标,色谱峰面积作为纵坐标,建立回归方程并算出相关系数。

1.3.4 稳定性试验 取200mg泮托拉唑钠细粉,置入100ml量瓶,加入适量流动相后进行超声溶解后,再次流动相稀释至100ml,摇匀后,过滤取滤液,每隔1 h取1次样品(均为20 μl)注入色谱仪,记录5 h的色谱图。

1.3.5 精密度试验 取同一批次的泮托拉唑钠肠溶胶囊供试品溶液,分别装入5个量瓶中,在不同日期由不同分析人员对样品进行测定,计算5次测定结果的平均值和相对标准偏差。

2 结果

破坏性实验结果显示,在氧化、酸碱以及加热情况下,杂质峰与主峰基线均能够明显分离,而不用比例混合的辅料对于原料药物测定物无明显干扰,说明泮托拉唑钠原料能够被酸碱、氧化及加热破坏。对峰面积(A)和泮托拉唑钠进样浓度进行线性回归方程分析后发现,相关性系数r=0.9994,进样处于浓度为0.56～50.50 μg/ml,峰面积之和具有良好线性关系。稳定性实验显示5 h内峰面积的RSD=0.99%,说明5 h内样品供试品溶液稳定性良好。精密度实验显示平均标示含量99.8%,RSD=1.09%,显示精密度较高。本实验中,主峰与杂质峰均能良好分离,说明HPLC色谱系统能够有效检测药物有关物质,具有良好专属性和耐用性。

3 讨论

质子泵是胃酸分泌最终环节,泮托拉唑能够特异性结合质子泵(H+-K+-ATP酶),而发挥抑制胃酸分泌的作用。虽然泮托拉唑钠临床较为广泛,但是国内外药典均未将其载入其中。目前泮托拉唑钠肠溶胶囊的执行标准为国家药品标准WS1-( X-198) -2004Z和经国家食品药品监督管理局审批的相关注册标准,因此改进检测有关物质方法以及提高杂质限度对于提高泮托拉唑钠质量、保证药品安全性和可靠性具有十分重要的意义［3,4］。

综上所述,通过应用HPLC梯度洗脱法对于泮托拉唑钠肠溶胶囊的有关物质进行检测,结果发现虽然辅料并不干扰药物性质,但是酸碱度改变、加热以及氧化均能够破坏药物有效性,应用HPLC梯度洗脱法能够将主峰和杂质有效分离,其具有专属性强、耐用性好、精密度高、操作简便等优点,可以作为药物检测的科学方法。

［1］郭丽.泮托拉唑钠肠溶片的非临床生物等效性分析.世界最新医学信息文摘(电子版),2013,19(21):34-35.

［2］张舒,张昀.HPLC梯度洗脱法测定泮托拉唑钠肠溶胶囊的有关物质.中国药师杂志,2015,18(6):943-945.

［3］王婧斯,李桂龙,王成港,等.泮托拉唑钠有关物质分析方法的比较.药物评价研究,2012,35(2):109-112.

［4］陈玉玲.HPLC法测定泮托拉唑钠肠溶微丸胶囊的含量.科技创新与应用,2012,1(上):38.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2016.05.227

2015-11-03］

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