祛风清热定痛方对偏头痛大鼠镇痛效应及内皮素1及5-羟色胺含量的影响 ※

祛风清热定痛方对偏头痛大鼠镇痛效应及内皮素1及5-羟色胺含量的影响※

李瑞杰冀绪白杏强1张晓双2司宁宁3

(河北省新乐市中医院中风病科，河北新乐050700)

【摘要】目的观察祛风清热定痛方对偏头痛大鼠的镇痛效应及可能机制。方法将72只SD大鼠随机分为6组，即空白组、模型组、正天丸组和祛风清热定痛方大、中、小剂量组，每组各12只，分别予相应药液灌胃给药，连续7 d。除空白组外，其余5组大鼠通过热板法测定痛阈值，然后以硝酸甘油制备偏头痛大鼠模型，放免法检测各组大鼠血浆中内皮素1(ET-1)、5-羟色胺(5-HT)含量。结果与模型组同期比较，祛风清热定痛方大、中剂量组60、120、180 min痛阈值均显著提高(P<0.05)，祛风清热定痛方小剂量组、正天丸组120、180 min痛阈值均显著提高(P<0.05)。与模型组比较，祛风清热定痛方大、中、小剂量组及正天丸组ET-1含量均明显降低，5-HT含量均明显增加，比较差异有统计学意义(P<0.05)。与正天丸组比较，祛风清热定痛方大、中剂量组ET-1含量明显降低，5-HT含量明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)，小剂量组ET-1和5-HT含量无统计学意义(P>0.05)。与祛风清热定痛方大剂量组相比，祛风清热定痛方中剂量组ET-1和5-HT含量比较差异有统计学意义(P<0.05)，小剂量组无统计学意义(P>0.05)。结论祛风清热定痛方具有明显的镇痛作用，其调节偏头痛模型大鼠血浆5-HT、ET-1含量可能是治疗偏头痛的机制之一。

【关键词】偏头痛；祛风；清热；镇痛；中医药疗法；止痛剂(中药)；放射免疫测定； 内皮缩血管肽类 ；血清素；疾病模型, 动物

doi:10.3969/j.issn.1002-2619.2015.08.022

【中图分类号】R-332; R287;R747.205.31 ；R349.21

【文献标识码】A

【文章编号】1002-2619(2015)08-1183-04

作者简介：李瑞杰(1979—)，男，主治中医师，硕士。研究方向：脑血管病的临床及实验研究、重症医学工作。

Abstract【】ObjectiveTo observe the therapeutic effects of Qufeng-qingre-dingtong decoction in migraine rats and its possible mechanism.Methods72 SD rats were randomly divided into six groups, that the blank group, model group, Zhengtian pill group, and high, middle, low dose of Qufeng-qingre-dingtong decoction group.Twelve SD rats in each groups, and all rats received corresponding drug for 7 d by gavage.Besides blank group, rats in other five groups were constructed in migraine model by nitroglycerin after the pain-threshold measured by hot plate test.The contents of serum endothelin-1 (ET-1) and 5-hydroxytryptamine (5-HT) were detected by radioimmunoassay.ResultsCompared with model group over the same period, the pain-threshold in high, middle dose of Qufeng-qingre-dingtong decoction group were obviously increased at 60, 120, 180 min (P<0.05), the pain-threshold in low dose of Qufeng-qingre-dingtong decoction group and Zhengtian pill group were obviously increased at 120, 180 min (P<0.05).Compared with model group, the content of ET-1 was obviously decreased in high, middle, low dose of Qufeng-qingre-dingtong decoction group and Zhengtian pill group, the differences were statistical significance (P<0.05).Compared with Zhengtian pill group, the content of ET-1 were obviously decreased in high, middle dose of Qufeng-qingre-dingtong decoction group, and the content of 5-HT was obviously increased, the differences were statistical significance (P<0.05).There was no statistical significance on ET-1 and 5-HT between Zhengtian pill group and low dose group (P>0.05).Compared with high dose of Qufeng-qingre-dingtong decoction group, there was statistical significance on ET-1 and 5-HT in middle dose group (P<0.05), and there was no statistical significance in low dose group (P>0.05).ConclusionQufeng-qingre-dingtong decoction has significant analgesic effect, can regulate the contents of serum 5-HT, ET-1 in migraine rats, it could be the one of the analgesia mechanism.

收稿日期：(2014-03-09)

※ 项目来源：河北省中医药管理局2011年度中医药类科研计划课题(编号：2011141)

1河北省新乐市长寿街道办事处社区卫生服务中心，河北新乐050700

2陕西中医药大学药学院中药教研室，陕西咸阳712046

3河北省滦平县中医院内甘肃天水市中医医院成甘肃中医药大学附院科，河北滦平068250

Observation of Qufeng-qingre-dingtong decoction on Analgesia effects and the content of ET-1, 5-HT in migraine ratsLIRuijie*,JIXu,BAIXingqiang,etal.*DepartmentofStroke,XinleCityHospitalofTraditionalChineseMedicineinHebeiProvince,Hebei,Xinle050700

【Key words】Migraine; Expelling wind; Clearing heat; Analgesia; Traditional Chinese Medicine; Paregoric (Chinese herbs); Radioimmunoassay; Endothelin; Serotonin; Disease models；Animal

偏头痛是一种具有遗传性及复发性的头痛综合征，其发病机制至今无统一理论解释，目前多认为其发作与神经血管痛觉传导通路的活化及神经递质表达密切相关。偏头痛发作过程中始终存在单胺类神经递质如5-羟色胺(5-HT)、多巴胺(DA)、去甲肾上腺素(NE)及血管活性物质如内皮素(ET)、降钙素相关基因肽(CRRP)等含量异常[1]。祛风清热定痛方是我院临床治疗偏头痛的经验方，临床疗效确切[2-3]。为进一步明确其作用机制，我们通过实验研究观察祛风清热定痛方对大鼠的镇痛效应及对硝酸甘油致偏头痛大鼠血浆中ET-1、5-HT含量的影响，探讨其治疗偏头痛作用机制。

1材料与方法

1.1材料

1.1．1实验动物SD大鼠72只，SPF级，雌雄各半，体质量(280±20)g，由第四军医大学动物实验中心提供，动物合格证号SCXK(军)2009-005。

1.1.2药材及试剂祛风清热定痛方(药物组成：川芎20 g，白芍药10 g，柴胡10 g，香附10 g，白芷12 g，地龙10 g，藁本9 g，薄荷 6 g, 黄芩10 g,羌活8 g，甘草6 g)水煎液，由陕西中医药大学中药药理研究室制备。正天丸(华润三九医药股份有限公司，国药准字Z44020711，6 g/袋)，硝酸甘油注射液(四环药业股份有限公司，国药准字H20057880，5 mg/mL)。ET- 1(HY-10047)、5-HT(HY-10164)放免试剂盒 (北京科美东雅生物技术有限公司)。

1.1.3主要仪器冷热板痛觉测痛仪(上海玉研科学仪器有限公司)，放免仪(XH6080型，西安核仪器厂)、电子天平(EX-200013，上海第一仪器厂)，温度计、秒表、手术器械、低温离心机、移液枪等实验器械，由陕西中医药大学药理实验室提供。

1.2实验方法

1.2.1动物分组将72只SD大鼠适应性饲养1周后随机分为6组，即空白组、模型组、正天丸组和祛风清热定痛方大、中、小剂量组，每组各12只。各组互相隔离饲养，实验室室内温度维持在 17～24 ℃，12 h为1个光照周期，喂养颗粒型普通大鼠饲料，自来水为大鼠饮用水。

1.2.2给药方法正天丸按临床用药剂量用蒸馏水配制成1.24 g/kg悬浊液，祛风清热定痛方按人体等效量用蒸馏水配制成大剂量(0.6 g/kg)、中剂量(0.3 g/kg)、小剂量(0.15 g/kg)悬浊液置冰箱冷藏备用。空白组及模型组大鼠予1 mL/100 g 0.9%氯化钠注射液灌胃，正天丸组和祛风清热定痛方大、中、小剂量组予等容积相应药液灌胃给药，均每日1次，连续7 d。

1.2.3观察指标及方法

1.2.3.1痛阈值测定除空白组外，其余5组大鼠首先进行基础痛阈值(0 min)测定，末次给药后30、 60、120及180 min分别检测大鼠痛阈值。方法：分别将各组大鼠放在(55±5) ℃冷热板痛觉测痛仪上，即开始计时，待大鼠出现添后足则停止计时，这段时间为大鼠痛阈值。如出现跳跃、快速走动等逃避反应则淘汰此大鼠。60 s规定为痛阈最高值,如果超过60 s，痛阈值则记为60 s。

1.2.3.2ET- 1、5-HT测定痛阈值测定实验结束后，除空白对照组外，其余5组大鼠分别予硝酸甘油注射液10 mg/kg腹部皮下注射，复制偏头痛模型，以大鼠出现烦躁、挠头、脸红、拍脸、爬笼次数增多为造模成功。空白组予等容量0.9%氯化钠注射液腹部皮下注射。模型制备成功4 h后，6组大鼠以10%乌拉坦1 mL/100 g腹腔麻醉，颈总动脉插管取血2 mL，迅速注入抗凝管中，混匀，4 ℃，3 000 r/min离心10 min，分离血浆，置-20 ℃冰箱备用。放射免疫分析法测定ET-1、5-HT含量，严格按照试剂盒说明书进行操作。

1.3统计学方法应用 SPSS 17.0 统计软件进行分析，计量资料采用均数±标准差(±s)表示，组间比较差采用单因素方差分析，采用t检验。以P<0.05 为差异有统计学意义。

2结果

2.15组大鼠不同时段痛阈值比较见表1。

表1　5组大鼠不同时段痛阈值比较　s， ± s

表1　5组大鼠不同时段痛阈值比较　s， ± s

组 别n0min30min60min120min180min模型组1219.31±5.3819.41±5.4819.51±5.1119.61±6.2919.21±5.44正天丸组1219.31±5.4122.3±5.0125.01±7.1227.01±5.95*24.75±6.52*祛风清热定痛方大剂量组1221.44±4.5423.01±4.6125.11±5.73*28.31±6.91*25.32±5.05*祛风清热定痛方中剂量组1219.51±6.1523.21±5.5126.61±7.51*31.12±6.52*26.21±7.64*祛风清热定痛方小剂量组1219.51土6.6021.42±7.0623.62±7.5627.01±5.31*24.32±8.24*

与模型组同期比较，*P<0.05

由表1可见，5组大鼠基础痛阈值无明显差异(P>0.05)。与模型组同期比较，祛风清热定痛方大、中剂量组60、120、180 min痛阈值均显著提高(P<0.05)，祛风清热定痛方小剂量组、正天丸组120、180 min痛阈值均显著提高(P<0.05)。

2.26组大鼠血浆ET-1及5-HT含量比较见表2。

表2　6组大鼠血浆ET-1及5-HT含量比较　pg/mL， ± s

表2　6组大鼠血浆ET-1及5-HT含量比较　pg/mL， ± s

组 别n剂量(g/kg)ET-15-HT空白组12—107.54±5.065008.84±948.89模型组12—143.46±5.52*2513.45±450.65*正天丸组121.24117.25±12.09△3036.66±655.63△祛风清热定痛方大剂量组120.6117.20±13.63△#3266.98±805.40△#祛风清热定痛方中剂量组120.3121.56±14.01△#○3101.13±361.92△#○祛风清热定痛方小剂量组120.15119.53±13.29△2927.94±715.70△

与空白组比较，*P<0.05；与模型组比较，△P<0.05；与正天丸组比较，#P<0.05 ；与祛风清热定痛方大剂量组比较，○P<0.05

由表2可见，与空白组比较，模型组血浆ET-1含量增高，5-HT含量降低(P<0.05)，提示造模成功。与模型组比较，祛风清热定痛方大、中、小剂量组及正天丸组ET-1含量均明显降低，5-HT含量均明显增加，比较差异有统计学意义(P<0.05)。与正天丸组比较，祛风清热定痛方大、中剂量组ET-1含量明显降低，5-HT含量明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)，小剂量组ET-1和5-HT含量无统计学意义(P>0.05)。与祛风清热定痛方大剂量组相比，祛风清热定痛方中剂量组ET-1和5-HT含量比较差异有统计学意义(P<0.05)，小剂量组无统计学意义(P>0.05)。

3讨论

疼痛可由多种原因导致，对于药物镇痛研究分物理刺激法和化学刺激法。热板反应为高级中枢参与的物理刺激反应，可反应中枢镇痛作用，故本研究选用热板法研究祛风清热定痛方的镇痛作用。由于硝酸甘油诱发偏头痛动物模型造模简单、易成功、动物易于获得，且硝酸甘油能导致明显的中枢和周围血管扩张，从而产生搏动性头痛的相似性，因此实验选择皮下注射硝酸甘油制备偏头痛大鼠模型。

ET是由21个氨基酸组成的生物活性多肽，是至今发现体内最强的血管收缩因子。脑血管是ET-1较敏感的效应器官之一，ET-1可导致脑血管强烈而持久的收缩[4]，导致偏头痛发作[5]。既往研究发现，偏头痛患者血浆、脑脊液中ET含量较正常明显增高，说明血浆ET水平的升高和持续异常共同构成了偏头痛的病理生理学基础[6]。5-HT是偏头痛发作中重要的神经递质，在偏头痛发生过程中通过诱导或激活血管内皮细胞及各种酶类，加速一氧化氮(NO)、ET合成或释放的同时，自身亦降解，而致血管扩张产生头痛症状[7]，5-HT代谢紊乱是偏头痛发病的核心[8]。因此，ET-1和5-HT是观察药物治疗偏头痛的重要治疗靶目标。

偏头痛属中医学中头痛范畴，其病位在头，与肝、肾、脾密切相关，风、火、痰、瘀、虚为主要致病因素。其中风邪为首要致病因素，诸邪皆可化热，热极又可生风，风热上扰清窍，致气血逆乱，脑脉痹阻，不通则痛。据此，我们认为偏头痛的病机特点多为风热上扰，脑脉痹阻。治宜清热祛风，活血止痛，拟祛风清热定痛方治疗。现代药理研究证实，方中川芎嗪通过抑制组胺、5-HT的合成及释放起到抗炎、止痛作用[9]；白芍药具有镇痛、镇静、抗炎等作用[10]；香附具有解热、镇痛等作用[11]；白芷镇痛效果显著，尤其在血管神经性头痛中被广泛应用[12]；地龙有解热、镇静、镇痛、降压等作用[13]。对照药物正天丸具有疏风活血、养血平肝、通络止痛的功效，在临床上广泛用于外感风邪、瘀血阻络、血虚失养、肝阳上亢引起的偏头痛、紧张性头痛、神经性头痛、颈椎病型头痛、经前头痛，故选为对照药物。

本研究结果显示，祛风清热定痛方大、中、小剂量组和正天丸组均有镇痛作用，以祛风清热定痛方大、中剂量组镇痛作用最强，优于正天丸组，提示祛风清热定痛方具有一定的中枢镇痛作用。模型组大鼠应用硝酸甘油诱导使5-HT明显下降，ET-1增高，提示血浆中神经递质和血管收缩因子含量紊乱，产生偏头痛症状。给药后，该方各剂量组均能降低血浆中ET-1含量，增加5-HT含量，以大、中剂量组作用最强，且优于正天丸组，提示祛风清热定痛方具有调节血浆ET-1、5-HT含量的作用，这可能是该方治疗偏头痛的作用机制，值得进一步研究。

参考文献

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(本文编辑：曹志娟)

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