运脾方药对幼龄营养性肥胖大鼠瘦素胰岛素影响的实验研究

运脾方药对幼龄营养性肥胖大鼠瘦素胰岛素影响的实验研究

职冬丽1，王明明2*

(南京中医药大学第一临床医学院，南京 210029 )

摘要：目的观察苍术山楂颗粒对高脂饮食诱导的幼龄营养性肥胖大鼠体质量、血清瘦素及胰岛素水平的影响。方法采用高脂饮食喂养刚离乳(3周龄)SD大鼠,诱导幼龄营养性肥胖大鼠模型，4周后予苍术山楂颗粒灌胃治疗,观察幼龄营养性肥胖模型大鼠体质量、瘦素及胰岛素的变化。结果苍术山楂颗粒灌胃幼龄营养性肥胖大鼠4周后,治疗组大鼠的体质量(375.50±13.19) g明显低于模型组(404.10±2.59) g，2组比较，差异有统计学意义，P<0.01；治疗组大鼠的血清瘦素(2.51±0.38) ng/mL较模型组(3.37±0.21) ng/mL有所下降，2组比较，差异有统计学意义，P<0.05;治疗组大鼠的血清胰岛素(13.27±0.60) mIU/L明显低于模型组(18.39±0.82) mIU/L,2组比较，差异有统计学意义，P<0.01。结论苍术山楂颗粒通过降低幼龄营养性肥胖大鼠体内较高的瘦素及胰岛素水平来达到减重的目的。

关键词：运脾方药；幼龄营养性肥胖大鼠；瘦素；胰岛素

DOI:10.13463/j.cnki.jlzyy.2015.04.026

中图分类号：R725.8文献标志码： A

文章编号：1003-5699(2015)04-0396-03

基金项目:南京中医药大学中医儿科学重点学科开放课题资助项目(EZK2012017)。

作者简介:职冬丽(1982-)，女，硕士研究生，主治医师，主要从事小儿脾系疾病研究。

收稿日期:(责任编辑:赵玉芝2014-09-05)

*通信作者:王明明，电话-13512539114，电子信箱-mingmingwang330@126.com

Yun-pi Prescription for leptin and insulin influence on young nutritional obesity rats

ZHI Dongli1,WANG Mingming2*

(First Clinical Medical College of Nanjing University of Chinese Medicine,Nanjing 210029,China)

Abstract:ObjectiveObservation of rhizoma atractylodis haw granule on the young nutritional obesity rats induced by high-fat diet weight,blood thin element and the influence of insulin levels.MethodsHigh fat diet just from the milk of age (3 w) SD rats,induced the young in the rat model with nutritional obesity,4 weeks after receiving the payment rhizoma atractylodis hawthorn particles lavage treatment,observation of young alimentary obesity model rats changes in body weight,leptin and insulin.ResultsRhizoma atractylodis hawthorn particles lavage young nutritional obesity rats after 4 weeks,the treatment group rats body quality (375.50±13.19) g significantly lower than the model group (404.10±2.59) g,comparing the two groups,the difference was statistically significant,P<0.01;The treatment group rats blood thin element (2.51±0.38) ng/mL compared with model group (3.37±0.21) ng/mL decreased,the difference was statistically significant,P<0.05;The treatment group rats serum insulin (13.27±0.60) mIU/L significantly lower than the model group (18.39±0.82) mIU/L,comparing the two groups,the difference was statistically significant,P<0.01.ConclusionRhizoma atractylodis hawthorn particles by reducing juvenile nutritional obesity rats’ higher leptin and insulin levels to achieve the goal of weight loss.

Keywords:Yun-pi Prescription;young nutritional obesity rats;leptin;insulin

流行病学研究表明，肥胖儿童多数伴有瘦素抵抗和胰岛素抵抗。瘦素抵抗是指机体组织对瘦素的调节作用减弱或无反应，胰岛素抵抗是指机体组织对胰岛素的反应性降低或丧失。且肥胖儿童血清瘦素与胰岛素呈正相关关系，即肥胖儿童体内存在着高瘦素血症和高胰岛素血症[1]。中医认为，脾失健运、湿浊瘀阻是儿童单纯性肥胖症的主要病机，因此运脾化湿逐瘀是本病的主要治疗原则。前期的动物实验研究[2]表明，苍术山楂颗粒可以改善幼龄营养性肥胖大鼠异常的糖脂代谢，本研究拟观察苍术山楂颗粒对幼龄营养性肥胖大鼠体质量、瘦素及胰岛素的影响，以期进一步阐明运脾方药对幼龄营养性肥胖大鼠体内高瘦素及高胰岛素水平的调整作用。

1材料与方法

1.1动物与饲料配制刚离乳(3周龄)SD大鼠102只，雄性，普通级，45～55 g，购于上海西普尔-必凯实验动物有限公司，许可证号:SCXK(沪)2008-0016。高脂饲料组成[3]：基础饲料60%，猪油15%，雀巢全脂奶粉15%，鸡蛋10%，鱼肝油适量。高脂饲料和普通饲料均由江苏省南京市青龙山动物繁殖场提供。

1.2药物、试剂及仪器苍术山楂颗粒由苍术、山楂(1∶1配方颗粒)组成，以上中药配方颗粒加入蒸馏水，用恒温磁力搅拌器充分搅拌均匀后，置-20 ℃冰箱保存备用。麸炒苍术配方颗粒(江阴天江药业有限公司生产，批号1304031)；焦山楂配方颗粒(江阴天江药业有限公司生产，批号1303170)；SHIMADZU电子分析天平(日本岛津公司，型号：AUY120)；恒温磁力搅拌器(上海蓝豹实验仪器有限公司,IT系列)；瘦素(LeP)ELISA试剂盒(上海韵涵生物科技有限公司，批号20130901)；胰岛素(INS)ELISA试剂盒(上海韵涵生物科技有限公司，批号20130902)；PerkinEimer酶标仪(美国GE公司)。

1.3模型制备实验大鼠统一在南京中医药大学动物实验中心饲养。饲养期间大鼠一笼5只，室温22～25 ℃，相对湿度40%～60%，通风良好。将102只幼龄SD大鼠，按体质量随机分为普食组(10只)和造模组(92只)，2组大鼠初始体质量无差异(P>0.05)。普食组投喂普通饲料；造模组采用混合喂养法,投喂高脂饲料和普通饲料。喂养期间所有大鼠自由饮水。4周后以超出普通饲料组体质量的20%作为肥胖标准，筛选出肥胖大鼠16只。

1.4分组及给药方法从普食组中随机选取8只大鼠为正常对照组;将16只肥胖模型大鼠随机分为模型对照组和中药治疗组，每组各8只。除正常对照组投喂普通饲料外，其余2组继续投喂高脂饲料和普通饲料。中药治疗组大鼠给予苍术山楂颗粒灌胃，灌胃药液浓度为0.13 g/mL，给药体积为10 mL/kg；正常对照组和模型对照组大鼠给予等体积的蒸馏水灌胃。每组大鼠连续灌胃4周。

1.5观察指标及检测方法1)体质量:每周对各组大鼠称重1次，并记录数值。2)血清瘦素及胰岛素检测：灌胃治疗4周后，大鼠禁食1夜，次日上午实验，10%水合氯醛(0.3 mL/100 g)腹腔注射麻醉，颈动脉插管取血约10 mL，把血样置于离心管中以3 500 r/min离心15 min，取上清液，置-20 ℃冰箱冷冻待用。采用酶联免疫吸附法检测瘦素和胰岛素，具体检验方法参照ELISA试剂盒。

2结果

2.1各组大鼠治疗前后体质量的比较治疗前，模型对照组及中药治疗组大鼠体质量与正常对照组大鼠相比差异有统计学意义(P<0.01)，提示幼龄营养性肥胖大鼠造模成功。治疗后，中药治疗组大鼠的体质量明显低于模型对照组(P<0.01)，提示中药治疗干预可以显著降低肥胖大鼠的体质量。结果详见表1。

表1　各组大鼠治疗前后体质量的变化 ± s, n=8)

注：与正常对照组比较，##P<0.01；与模型组比较，△△P<0.01

2.2各组大鼠瘦素及胰岛素的比较模型对照组大鼠的血清瘦素及胰岛素与正常对照组相比均明显升高(P<0.01)，提示肥胖大鼠体内存在高瘦素血症及高胰岛素血症；中药治疗干预后，中药治疗组大鼠的血清瘦素与模型对照组相比有所下降，差异有统计学意义，P<0.05，而中药治疗组大鼠的血清胰岛素与模型对照组相比显著下降，差异有统计学意义，P<0.01。结果见表2。

表2　各组大鼠瘦素及胰岛素的变化 ± s, n=8)

注：与正常对照组比较，##P<0.01；与模型组比较，△P<0.05，△△P<0.01

3讨论

中医认为儿童单纯性肥胖症的发生与脾胃的关系最为密切[4]。脾胃功能正常，则脾升胃降，水谷精微得以正常输布；脾胃功能失调，则水液运化失常，聚于体内成为痰湿脂浊，日久阻碍气血运行，气滞血瘀，导致肥胖发生。因此健运脾胃，化湿逐瘀成为本病的主要治则。著名儿科专家江育仁教授提出了“脾健贵在运而不在补”的学术思想，在运脾治疗中首重苍术。苍术有健脾除湿之功效，脾健则水湿得以运化，杜绝了生痰之源；而山楂有健脾消积、行气散瘀之功效，痰瘀之邪祛，则脾气得以升清，水谷津液运化正常。苍术配合山楂，两药相辅相成，共奏运脾化湿逐瘀之功。因此本实验用苍术山楂颗粒灌胃幼龄营养性肥胖大鼠来研究运脾方药对肥胖相关指标瘦素及胰岛素的影响。

瘦素是由脂肪组织分泌的一种蛋白类激素，具有抑制食欲、增加能量消耗及调控体质量的作用[5]。正常情况下，瘦素由脂肪组织分泌之后进入血液循环，通过与下丘脑中的特异性瘦素受体相结合而发挥作用，最终达到控制体质量的目的。大量研究表明，肥胖个体血清瘦素水平不但没有下降，反而升高，存在着瘦素抵抗，且瘦素水平随体质量及肥胖程度的增加而升高。本研究结果显示，模型对照组血清瘦素水平明显高于正常对照组(P<0.01)，说明肥胖大鼠体内的高瘦素水平不能发挥其应有的消脂作用，使体质量处于增长状态。中药治疗干预之后，模型对照组大鼠血清瘦素水平与正常对照组大鼠相比有所下降(P<0.05)，说明运脾方药通过调节幼龄营养性肥胖大鼠的瘦素抵抗而达到减重目的。

胰岛素由胰岛β细胞分泌，是参与体内三大物质能量代谢过程中的一种重要的内分泌激素，有促进脂肪合成，抑制脂肪分解的作用。瘦素可以直接或间接地抑制胰岛β细胞合成和分泌胰岛素，而胰岛素又可以刺激机体脂肪组织分泌瘦素，在瘦素与胰岛素之间形成了一个双向激素调节反馈通路，即“脂肪-胰岛素”轴[6]。高脂饮食不仅可以诱发机体肥胖，致使体内脂肪堆积，引起血清瘦素分泌增多，产生瘦素抵抗,而且可以导致“脂肪-胰岛素”轴功能紊乱，使体内血清胰岛素升高，产生胰岛素抵抗[7]。本研究结果显示，模型对照组大鼠血清胰岛素水平明显高于正常对照组(P<0.01)，说明肥胖大鼠体内存在瘦素抵抗的同时，亦存在着胰岛素抵抗,与以往多数学者的观点相一致[8-10]。中药治疗干预之后，中药治疗组大鼠血清胰岛素与模型对照组相比显著下降(P<0.01),说明运脾方药在减重的同时，可以显著改善胰岛素抵抗。而胰岛素抵抗是2型糖尿病发生和进展的驱动因素[11],本研究结果也为今后运脾方药治疗肥胖伴2型糖尿病儿童提供了一定的实验依据。综合前期研究及本次实验研究结果，我们推断运脾方药对幼龄营养性肥胖大鼠的减重作用是通过降低血清瘦素及胰岛素水平来实现的。

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