血栓与止血检测用于出血病与易栓症中的临床诊断应用研究

刘美兰

【摘要】目的：本文主要探讨血栓与止血检测用于出血病与易栓症中的临床诊断应用研究。方法：选取出血病15个病种、156个家系、168例先证者和616名家族成员进行了检测，在人类基因库中寻找相关的基因序列，通过RT-PCR、AS-PCR和实时PCR扩增，得到PCR的纯化产物，再用RFLP、TA克隆和直接测序等方法进行基因诊断；同时采用抽取DNA、合成引物、PCR扩增、PCR产物纯化及直接测序分析方法，并采用RFLP和AS-PCR验证等技术，分别对4个家系的AT缺陷症、4个家系的PC缺陷症及2个家系的PS缺陷症作出基因诊断。结果：在血栓与止血检测在出血病方面的应用，发现诊断准确率达100%；在血栓与止血检测在易栓症方面的应用，诊断准确率达100%。结论：发现栓和止血监测的结果在一定程度上可反应出血病和易栓症的诊断。

【关键词】血栓；止血；出血病；易栓症

出血症是由于凝血系统出现问题而发生的出血现象，而易栓症是由于凝血因子、抗凝蛋白等的遗传性或获得性缺陷而发生血栓栓塞症状。其二者是临床中最为常见的危害人类健康的疾病，而血栓和止血监测的结果在一定程度上可反应出血病和易栓症的诊断。

1、资料与方法

1.1血栓与止血检测

对血栓和止血的检测一定程度上可反应出血病和易栓症的诊断，诊断方法大致可分为表型检测和筛选试验这两类。表型检测常用作诊断试验；筛选试验常需监测的指标主要有血小板计数（PLT）、出血时间（BT）、活化部分凝血活酶时间（APTT）、凝血酶原时间（PT）、凝血酶时间（TT）、优球蛋白溶解时间（ELT）、纤维蛋白（原）降解产物（FDPs）等等。

目前对部分先天性和遗传性出血疾病和易栓症需要进行基因检测，以确定是否存在基因缺陷。

1.2血栓与止血检测在出血病和易栓症中的应用

出血病包括有新生儿出血症和脑干出血症和两种，主要是由一期止血缺陷和二期止血缺陷所导致的，一期止血缺陷主要由血管壁和血小板异常所引发的止血性功能缺陷，而二期止血缺陷主要由抗凝物质和凝血障碍所引起的止血性功能缺陷。本研究对15个病种、156个家系、168例先证者和616名家族成员进行了检测。在人类基因库中寻找相关的基因序列，通过RT-PCR、AS-PCR和实时PCR扩增，得到PCR的纯化产物，再用RFLP、TA克隆和直接测序等方法进行基因诊断，并已获得102种国内外首先报道的突变基因。

血栓病在临床上可以分为遗传性和获得性两种，无论是遗传性易栓症还是获得性易栓症，二者共同的最主要临床特点都是血栓易发倾向，又多数以静脉血栓栓塞性疾病（VTE）形式出现，有些疾病动脉血栓的发生率也有升高。体内主要抗凝蛋白如抗凝血酶（antithrombin，AT）、蛋白S（proteinS，PS）、蛋白C（proteinC，PC）的先天缺乏会导致血栓性疾病。对静脉系统血栓病的检测可发现部分患者具备这种先天性缺陷。肺栓塞（PulmonaryembolismPE）是DVT中常见的并发症，也是静脉血栓形成和导致死亡的最为主要的因素，易栓症的诊断见表1。

2、结果

在血栓与止血检测用于出血病应用方面，基于研究阅读文献，通过对137名血友病患者进行产前诊断，采用Southern-Blot和PCR-DGGE技术手段，检测F8内含子22倒位；根据性别基因位点和多态性位点，再对内含子22倒位阴性者进行间接连锁分析，发现其累积识别能力高达99.4%，准确率高达100%，同时诊断率也高达100%。

在血栓与止血检测用于易栓症应用方面，本研究采用抽取DNA、合成引物、PCR扩增、PCR产物纯化及送入公司进行测序等分析方法，并采用AS-PCR和RFLP等验证技术，分别对4个家系的PC缺陷症、4个家系的AT缺陷症及2个家系的PS缺陷症进行基因诊断，发现突变基因共计8种，最终诊断准确率高达100%。

3、讨论

基于前人研究发现血栓和止血监测的结果在一定程度上可反应出血病和易栓症的诊断。本实验首先研究了血栓与止血检测在出血病中的临床应用，对137名血友病患者进行产前诊断，发现累积识别能力达99.4%，准确率高达100%，同时诊断率也高达100%。其次研究了血栓与止血检测在易栓症中的临床应用，采用多种医学手段对易栓症多种病症进行基因诊断，诊断准确率达100%。综上可见，在诊断出血病与易栓症中，血栓和止血检测可作为决定性检测指标。