miR－126 rs4636297 G>A基因多态性与冠心病的相关性

·心脑血管及代谢性疾病·

miR-126 rs4636297 G>A 基因多态性与冠心病的相关性

岑锦明熊卿圆成捷陈宇宁刘新光熊兴东杨希立

(佛山市第一人民医院，广东佛山528000)

摘要〔〕目的探讨miR-126 rs4636297 G>A基因多态性与冠心病遗传易感的关系。方法利用聚合酶链式反应-连接酶检测反应(PCR-LDR)分析技术，对563例冠心病患者和646例对照个体的miR-126 rs4636297 G>A多态位点进行分型，采用非条件逻辑回归分析该多态位点与冠心病易感的相关性。结果AA、AG、GG基因型在冠心病组中的分布频率分别为2.1%、22.6%和75.3 %，在对照组中分别是1.7%、25.4%和72.9%，两组间基因型频率分布无统计学差异(χ2=1.525，P=0.466)。携带miR-126 rs4636297 A变异等位基因与冠心病的遗传易感无明显相关性(OR=0.92，95%CI=0.73～1.16，P=0.484)。结论miR-126 rs4636297 G>A多态位点与华南地区冠心病易感无相关性。

关键词〔〕miR-126；单核苷酸多态性；冠心病；遗传易感性

中图分类号〔〕R349.3〔文献标识码〕A〔

基金项目：国家自然科学基金(81170327)；广东省自然科学基金(S2012010008219)；广东省科技厅项目(2011B031800193)

通讯作者：杨希立(1963-)，男，硕士，主任医师，主要从事冠心病的诊疗研究。

第一作者：岑锦明(1985-)，男，硕士，主治医师，主要从事冠心病的诊疗研究。

Association analysis between miR-126 rs4636297 G>A polymorphism and the risk for coronary artery disease

CEN Jin-Ming，XIONG Qing-Yuan，CHENG Jie，etal.

Department of Cardiovascular Disease，the First People's Hospital of Foshan，Foshan 528000，Guangdong，China

Abstract【】ObjectiveTo investigate the relationship between the miR-126 rs4636297 G>A polymorphism and the risk for coronary artery disease in Southern Chinese population.MethodsThe genotypes of the miR-126 rs4636297 G>A polymorphism were determined in 563 coronary artery disease patients and 646 control blood donors by polymerase chain reaction-ligase detection reaction(PCR-LDR).Association between the polymorphism and the risk for coronary artery disease was evaluated by unconditional logistic regression analysis.ResultsThe frequency of AA，AG and GG genotypes in the case subjects were 2.1 %，22.6% and 75.3 % respectively and in the control subjects were 1.7%，25.4% and 72.9%.No significant difference was observed in the frequency of miR-126 rs4636297 genotypes between cases and controls(χ2=1.525，P=0.466).No significantly increased risk for coronary artery disease was observed for those carrying A variant allele(OR=0.92，95%CI=0.73～1.16，P=0.484).ConclusionsmiR-126 rs4636297 G>A polymorphism is not associated with coronary artery disease in Southern Chinese population，

【Key words】miR-126;Single nucleotide polymorphism;Coronary artery disease;Genetic susceptibility

目前有关冠心病遗传易感的研究主要集中在蛋白编码基因的多态性(SNPs)，而对于另一类重要的非蛋白编码基因——miRNA基因的SNPs与冠心病遗传易感的相关性分析尚待挖掘〔1〕。研究表明，miR-126在冠心病的发生过程中发挥重要角色〔2～5〕。最近有文献报道在miR-126的初级转录本上有一个SNP位点miR-126 rs4636297〔6〕。迄今为止，有关miR-126 rs4636297 G>A多态性与冠心病的遗传易感性尚未见报道。本研究采用聚合酶链式反应-连接酶检测反应(PCR-LDR)技术检测miR-126 rs4636297 G>A多态基因型在华南地区冠心病患者及对照人群中的发生频率，探讨miR-126 rs4636297 G>A多态位点与冠心病遗传易感性的关系。

1资料与方法

1.1对象本研究包括646例对照组人群和563例冠心病患者。患者样本随机收集2011年3月至2013年5月在佛山市第一人民医院治疗，并且经冠状动脉造影等检查确诊为冠心病的患者。冠心病诊断标准参照国际心脏病学会及WHO《缺血性心脏病的命名及诊断标准》，冠状动脉造影时显示主要动脉中至少有1支内径狭窄>50%。对照组是经心脏核素扫描(ECT)、CT冠脉成像(CTA)或冠状动脉造影等检查排除冠心病的个体。所有冠心病患者和正常对照个体均为无血缘关系的华南地区汉族人群，排除先天性心脏病、心肌病、严重肝脏和肾脏疾病。每例标本都具备年龄、性别、有无吸烟、有无喝酒、收缩压(SBP)和舒张压(DBP)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、冠心病家族史等资料。在标本采集过程中，所有个体在入选时均告知其研究方法及意义，做到知情同意。本研究得到了佛山市第一人民医院医学伦理委员会的批准。

1.2基因组DNA抽提每份样品均取静脉血2 ml，EDTA-K2抗凝，按照TIANamp血液基因组DNA提取试剂盒(Tiangen)说明抽提外周血基因组DNA。-80℃保存备用。

1.3基因分型采用PCR-LDR方法对miR-126 rs4636297 G>A多态性进行基因分型。采用Primer Premier 5.0 软件设计特异性引物。PCR反应的上游引物为5′TACTTTTGGTACGCGCTGTG 3′，下游引物为5′ CAGAGGTCTCAGGGCTATGC 3′，扩增目标片段长度为188 bp。多重PCR反应体系为20 μl，95℃预变性2 min，然后94℃30变性30 s，59℃退火1 min 30 s，72℃延伸1 min，共35次循环，最后72℃延伸10 min。3%琼脂糖凝胶电泳检测，观察PCR产物的效果，确定其作为模板在LDR反应中加入的量。LDR反应体系为10 μl，95℃ 2 min，然后94℃变性15 s，50℃反应25 s，共30次循环。产物经ABI 377电泳测序，结果运用GeneMapper 4.0软件进行数据分析。

1.4统计学分析采用SPSS13.0软件，利用goodness-of-fitχ2检验多态位点的基因型分布是否符合Hardy-Weinberg平衡；连续性变量资料采用t检验，分类变量资料采用χ2检验。Pearsonχ2检验比较组间基因型分布差异以及不同基因型间血压、血糖和血脂水平的差异；非条件逻辑回归计算比值比(OR)及其95%置信区间(CI)。

2结果

2.1冠心病组和对照组一般情况比较除总胆固醇(TC)外，其他变量的均数或分布在两组间均有显著差异(P<0.001)。值得注意的是，冠心病组SBP、DBP、空腹血糖(FPG)、甘油三酯(TG)、LDL-C、饮酒、吸烟等变量显著高于对照组。见表1。

2.2miR-126 rs4636297 G>A基因型的分布及Hardy-Weinberg 平衡检验本研究miR-126 rs4636297 G>A多态性的基因型分布频率在华南地区对照人群中分别为72.9%(GG)、25.4%(AG)和1.7%(AA)。Goodness-of-fitχ2检验表明miR-126 rs4636297 G>A多态位点在对照组中符合Hardy-Weinberg 平衡(P=0.446)，表明本研究对照人群具有群体代表性，该人群的miR-126 rs4636297基因型分布可反映整体人群基因型的分布情况。

2.3miR-126 rs4636297 G>A多态性与冠心病遗传易感的关系AA、AG、GG基因型在冠心病组中的分布频率分别为2.1%、22.6%和75.3 %，在对照组中分别是1.7%、25.4%和72.9%，两组间基因型频率分布无统计学差异(χ2=1.525，P= 0.466)。非条件逻辑回归分析发现，以AA基因型作参照，AG基因型和GG基因型分别与其比较，均与冠心病易感无相关性(OR值分别为0.70 和0.88，95%CI分别为0.24～2.09和0.30～2.54)。等位基因分析结果也显示，携带miR-126 rs4636297 A变异等位基因与冠心病的遗传易感无明显相关(OR=0.92，95%CI=0.73～1.16，P=0.484)。在不同的遗传模型下，该位点的基因型分布在病例组和对照组的差异也无统计学差异。见表2。

表2　miR-126 rs4636297 G>A多态性与

非条件逻辑回归分析，并用年龄、性别、吸烟、喝酒、高血压、糖尿病、高脂血症和冠心病家族史等因素进行校正

3讨论

心肌梗死后的血管再生、心肌重构，血管内皮细胞损伤与衰老等冠心病发生发展过程中发挥重要的作用〔2～5〕。这提示miRNAs基因的多态性可能与冠心病的遗传易感性密切相关。

miR-126是一个重要的血管生成与发育相关的miRNA。它不仅可以通过靶向调控Spred1、PIK3R2和pak1等基因的表达来调节血管生成〔7～9〕，还可以调节细胞黏附分子1的表达和调控血管炎症反应〔10〕。作为血管内皮细胞的前体细胞，血管内皮祖细胞不仅参与胚胎血管的生成，而且还参与出生后的血管生成过程。最近有研究发现，与健康对照相比，miR-126在冠心病患者的血管内皮祖细胞中低表达〔5〕。还有研究发现miR-126在冠心病患者的血浆中也显著下调。相反，心肌中高表达的miR-133a和miR-208a在冠心病患者的血浆中高表达〔4〕。以上这些结果都提示miR-126的表达失调可能与冠心病的发生密切相关。miR-126 rs4636297是在miR-126的初级转录本上的一个SNP位点。有文献报道，该SNP位点的G 等位基因显著抑制Pri-miR-126加工为成熟体miR-126〔6〕。最近有文献在大样本量中(2 854份病例和3 188份对照)发现，miR-126 rs4636297在德国人群中并不影响乳腺癌的发病风险〔11〕。本研究结果发现miR-126 rs4636297 G>A多态位点并不影响个体患冠心病的发病风险，提示miR-126 rs4636297 G>A多态与华南地区人群的冠心病发生没有相关性。

4参考文献

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〔2014-11-13修回〕

(编辑袁左鸣)