银耳口服液中银耳多糖测定及提高免疫试验研究

吴熙，陈丽春

（1.福建中医药大学药学院，福建福州350122；2.厦门中药厂有限公司，福建厦门361100）

银耳口服液中银耳多糖测定及提高免疫试验研究

吴熙1，陈丽春2

（1.福建中医药大学药学院，福建福州350122；2.厦门中药厂有限公司，福建厦门361100）

目的测定银耳口服液中银耳多糖的含量，观察银耳口服液对醋酸泼尼松造模小鼠非特异性免疫功能的影响。方法①采用苯酚－浓硫酸法测定银耳口服液银耳多糖的含量。②选16～18g小鼠50只，按性别、体重依分层随机分5组，每组10只，雌雄各半。除正常组外，其他4组小鼠用50mg／kg的醋酸泼尼松隔日给小鼠灌胃造模，造成小鼠免疫功能降低的模型。除模型组外，其他3组小鼠分别给30mL、15mL、7.5mL的银耳口服液，正常组和模型组小鼠灌胃饮用水，每天1次，连续15 d。末次给药后，次日小鼠称体重，摘眼球放血处死，解剖取脾脏和胸腺称重，计算脏器系数。另选18～22g小鼠50只，分组、造模、给药同②。末次给药后，次日小鼠腹腔注射5%（V／V）鸡红细胞悬液0.5mL，6 h后，颈椎脱臼处死小鼠，腹腔注射生理盐水2mL，轻揉小鼠腹部后，剖开腹腔用吸管吸小鼠腹腔液，滴在干净的载玻片上，凉干后染色，油镜观察并计算吞噬细胞吞噬鸡红细胞的百分率。结果①测得银耳口服液中银耳多糖含量为0.031%；②银耳口服液15～30mL／kg可提高醋酸泼尼松造模小鼠免疫器官脾脏、胸腺的重量和吞噬细胞的吞噬功能，与模型组比较，P＜0.05或0.01。结论苯酚-浓硫酸法为测定银耳口服液中银耳多糖含量的有效方法，银耳口服液具有提高非特异性免疫功能作用，为银耳口服液的质量和有效性提供实验依据。

银耳口服液；银耳多糖；免疫器官；吞噬功能

银耳口服液由人工栽培的银耳（又称白木耳）制成的口服液，为保证银耳口服液的质量和评价银耳口服液提高免疫力的有效性，我们参照文献［1］，对银耳口服液的指标性成分银耳多糖进行含量测定和银耳口服液提高免疫力的试验研究。现将试验结果报告如下：

1 实验材料

1.1 药品与试剂银耳口服液（福建中医药大学药理毒理实验室制备，批号：20120902）；醋酸泼尼松（浙江仙琚制药股份有限公司，生产批号：120336）；5%鸡红细胞悬液，实验时配制；所需试剂均为分析纯。

1.2 动物昆明小鼠，体重16～18g、18～22g，雌雄各半，购于上海斯莱克实验动物有限责任公司，合格证号：2007000520335。

1.3 仪器752-型紫外分光光度计（上海分析仪器总厂）；RE-52型旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；电子天平ES-C-600（湘仪天平仪器有限公司）；生物显微镜（OLYMPUS BX-40）。

2 实验方法与结果

2.1 银耳口服液银耳多糖的含量测定采用苯酚－浓硫酸法［1］

2.1.1 银耳多糖提取与精制复水完全的银耳子实体经机械粉碎、超声波处理后，在120℃水中浸提多糖物质；离心收集上清液，在80℃浓缩至原体积的1／5，用三倍量95%乙醇醇析使含醇量达80%；离心收集沉淀，沉淀物依次用无水乙醇、无水乙醚洗涤，置干燥器中干燥，得多糖干品。

2.1.2 标准曲线制备精密称取105℃干燥恒重的银耳多糖干品50 mg，置100 mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，即得标准溶液；精密吸取对照品溶液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL，分别置具塞试管中，依次加水至1.0 mL，再分别加入5%苯酚1.0 mL、浓硫酸5.0 mL显色，摇匀，放置5 min；以1.0 mL蒸馏水作空白对照，于500nm波长处测定吸光度，绘制标准曲线。回归方程为：C＝0.0023+4.32A，r＝0.9993。

2.1.3 含量测定取银耳口服液500 mL，置旋转蒸发器内浓缩体积至200 mL；浓缩液∶氯仿∶正丁醇（25∶5∶1）置分液漏斗内振摇提取30 min，离心15 min，除去蛋白沉淀，取上清液；加95%乙醇使含醇量达80%，抽滤，60℃烘干，置100 mL量瓶中加水至刻度，作为供试液；取供试液1.0 mL置具塞试管中，按标准曲线制备方法测定吸光度，3次均值A＝0.0713，由回归方程计算出银耳口服液中的银耳多糖含量约0.031%

2.2 银耳口服液对小鼠非特异性免疫的影响［2，3］

2.2.1 银耳口服液对泼尼松造模小鼠免疫器官脾脏、胸腺指数的影响选体重16～18g昆明种小鼠50只，雌雄各半，按性别、体重分层随机分为5组，每组10只，雌雄各半。实验设：正常组、模型组、模型+银耳口服液高、中、低（30 mL／kg、15 mL／kg、7.5 mL／kg）3个剂量组；小鼠适应性饲养3 d后，银耳口服液中、低剂量用饮用水配成与高剂量等体积30 mL，均按体重0.3 mL／l0g灌胃；正常组和模型组小鼠灌服等体积饮用水。每天上午灌胃1次，连续15 d。同时除正常组外，其他各组小鼠1、 3、5、7、9、11、13、15日下午，灌服0.25%醋酸泼尼松溶液，按体0.2 mL／l0 g（50 mg／kg）造模。末次给药后，小鼠禁食不禁水过夜，次日小鼠称重后，摘眼球放血处死，解剖取脾脏和胸腺称重，计算脏器指数。

脾和胸腺指数/（mg／g）＝脾或胸腺重量／体重。

结果见表l。

表1 银耳口服液对醋酸泼尼松造模小鼠免疫器官脾、胸腺指数的影响（x±s）

2.2.2 银耳口服液对醋酸泼尼松造模小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响选体重18～22 g昆明种小鼠50只，雌雄各半，按性别、体重分层随机分为5组，每组10只，雌雄各半。实验设：正常组、模型组、银耳口服液高、中、低（30 mL／kg、15 mL／kg、7.5 mL／kg）3个剂量组。小鼠适应性饲养3 d后，银耳口服液中、低剂量用饮用水配成与高剂量等体积30 mL，均按体重0.3 mL／l0g灌胃；正常组和模型组小鼠灌服等体积饮用水。每天上午灌胃1次，连续15 d。同时除正常组外，其他各组小鼠1、3、5、7、9、11、13、15日下午，灌服0.25%醋酸泼尼松溶液，按体0.1m2／10 g（50mg／kg）造模。末次给药后，次日小鼠腹腔注射5%（V／V）鸡红细胞悬液0.5 mL，6 h后，颈椎脱臼处死小鼠，腹腔注射生理盐水2 mL，轻揉小鼠腹部后，剖开腹腔用吸管吸小鼠腹腔液，滴在干净的载玻片上，凉干后染色，油镜观察并计算吞噬细胞吞噬鸡红细胞的百分率。结果见表2。

表2 银耳口服液对醋酸泼尼松造模小鼠腹腔吞噬细胞吞噬影响（x±s）

2.2.3 统计学处理采用简明统计学处理品V2.0，数据用x±s表示，组间差异比较用t检验。

3 讨论

银耳性平，味甘、淡，无毒，具有润肺生津、滋阴养胃、益气和血之功效，主要含多糖、甘露醇、氨基酸、维生素和微量元素等。现代研究证实：银耳多糖具有提高人体免疫功能、延缓衰老等作用［4］。本试验测定银耳指标性成分银耳多糖的含量，同时证实该银耳口服液具有提高非特异性免疫功能的作用，提高醋酸泼尼松造模小鼠免疫器官脾、胸腺指数和腹腔吞噬细胞吞噬功能，为银耳口服液的质量和有效性提供保证。该银耳口服液有望成为提高免疫功能的保健品，值得进一步完善研究及推广应用。

［1］吕玉光，杨丽敏.银耳中多糖的含量测定［J］.黑龙江医药科学，1999，22（6）：32.

［2］张大方，金若敏.药理与中药药理实验［M］.3版.上海：上海科学技术出版社，2013：89-91.

［3］李仪奎.中药药理实验方法学［M］.上海：上海科学技术出版社，1991：155-158.

［4］陈飞飞，蔡东联.银耳多糖的主要生物学效应研究进展［J］.中西医结合学报，2008，6（18）：862-863.

R914.4

A

1000-338X（2015）04-0046-02

2015－06－05

吴熙（1982—），男，助理实验师，主要从事药物制剂分析。