黄芩总黄酮苷元对小鼠肝脏的保护作用

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(江西中医药大学药学系，江西 南昌 330004)

·基础医学·

黄芩总黄酮苷元对小鼠肝脏的保护作用

徐勤*，李怡光

(江西中医药大学药学系，江西 南昌 330004)

目的探讨黄芩总黄酮苷元(SBTF)对肝脏的保护作用。方法将70只小鼠随机均分为7组(空白组、模型组、阴性对照组、联苯双酯阳性对照组及高、中、低剂量黄芩总苷元给药组)，每组10只，灌胃给药15天。高、中、低剂量给药组分别给黄芩总苷元400、200、100 mg/kg；阳性组给予联苯双酯200 mg/kg；阴性组给予2.0%泊洛沙姆水溶液；模型组和空白组均给予生理盐水。第15天给药6 h后除空白组外均腹腔注射0.1%四氯化碳油溶液。12 h后称重，取血，分离肝脏，拍照、制匀浆测定丙二醛(MDA)指标；全血离心后取血清测定肝功能指标丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)。结果阳性组与高剂量给药组中小鼠肝脏外表光滑红润，无血块和斑点，但光泽差于空白组；中、低剂量给药组红润程度依次下降，并可见瘀斑渐次明显；阴性组和模型组外观苍白，可见成块淤血、瘀斑。模型组、阴性组AST、ALT、MDA指标与空白组相比明显升高；给药组AST、ALT、MDA指标按低、中、高剂量下降，与模型组相比差异有显著性。结论黄芩总黄酮苷元对肝脏有保护作用。

黄芩总黄酮苷元； 保肝； 四氯化碳； 药理

黄芩为唇形科植物黄芩的干燥根，性寒，味苦，具清热燥湿，泻火解毒，止血，安胎之功效[1]。现代研究发现，黄芩尚有保肝方面的功效，但多集中在黄芩苷类研究[2-4]。本研究将黄芩苷类提取后充分酶解，并经高效液相检测，将苷类全部转化为苷元。并以此为药物，观察其对小鼠肝脏的保护作用。本实验采用四氯化碳腹腔注射来制作肝损伤模型[5]，并以天门冬氨酸氨基转移酶(Aspartate transaminase，AST)、丙氨酸氨基转移酶(Alanine aminotransferase，ALT)及丙二醛(Malondialdehyde，MDA)为指标反映肝功能的实际损伤程度。以此定量描述黄芩总黄酮苷元(Scutellaria Baicalensis Total Flavonoid，SBTF)的保肝作用。

1 材料与方法

1.1 仪器

S/54紫外分光光度计(上海立光精密仪器有限公司)；METTLER AE240电子天平(梅特勒托利多仪器公司)；离心机(深圳市超杰实验仪器有限公司)；P10-W实验室用纯水机(长沙源科仪实验器材有限公司)；KCD-1006超声机(南昌科昌达超声设备厂)

1.2 药品和试剂

黄芩总苷元(为陕西商洛野生子芩经提取、酶解后制得，高效液相检测结果显示黄芩苷已彻底酶解为苷元，其中黄芩素、汉黄芩素、千层纸素、去甲汉黄芩素峰面积总和占93.12%)；AST、ALT试剂盒(北京中生生物工程公司)；丙二醛(MDA)测定试剂盒(南京建成科技有限公司)；联苯双酯滴丸(购于药店)；水为纯化水，其余辅料为药用级别。

1.3 实验动物

雄性昆明种小鼠70只，体重25～30 g，购于江西中医药大学动物中心(合格证号：JZDWNO：2012-0029)。将小鼠随机分为七组，每组10只，分别为空白对照组、模型组、阴性对照组、联苯双酯阳性对照组以及低、中、高剂量黄芩总苷元给药组。

1.4 给药、造模及检测方法

因黄芩总苷元难溶于水，故采用2.0%泊洛沙姆水溶液为分散介质，将黄芩总苷元配成0.5%、1.0%、2.0%浓度混悬液，每日以20 mL/kg分别给低、中、高给药组灌胃；为消除泊洛沙姆对实验结果的影响，每日以2.0%泊洛沙姆水溶液给阴性对照组灌胃；将联苯双酯滴丸于研钵中研碎，加水，超声溶解，使成1.0%浓度水溶液，每日以20 mL/kg给阳性对照组灌胃；空白对照组与模型组每天灌以等量生理盐水。

于第15天灌胃6 h后，空白组按1 mL/kg腹腔注射植物油，其余各组腹腔注射0.1%四氯化碳油溶液。禁食12 h后称重，眼眶取血，剥离完整肝组织，用滤纸吸去肝脏表面血迹，称重，拍照，用生理盐水冲洗后制成10%肝脏匀浆，吸取上清液测定MDA含量。同时血液以3 000 r/min离心10 min，取上清液按试剂盒说明测定AST及ALT的浓度。

1.5 统计学处理

应用SPSS 13.0统计分析软件进行数据处理。各组数值以均数±标准差表示，采用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 形态学观察图

阳性组与高剂量组中小鼠肝脏外表光滑红润，无血块和斑点，但光泽差于空白组；中、低剂量组红润程度依次下降，并可见瘀斑渐次明显；阴性组和模型组外观苍白，可见成块淤血、瘀斑，肝损伤严重(如图1)。

图1 小鼠肝脏外观图 A：高剂量黄芩总苷元组；B：中剂量黄芩总苷元组；C：低剂量黄芩总苷元组；D：阴性对照组；E：空白对照组；F：模型组；G：联苯双酯阳性组

2.2 小鼠血清ALT、AST、MDA测定结果

小鼠的ALT、AST指标显示的结果与小鼠肝脏外观结果一致，空白组及阳性组与模型组之间差异有极显著性，而高、中、低剂量给药组与模型组之间差异有显著性；小鼠MDA数据与空白组相比，模型组、阴性组MDA数据上升极显著，而低、中、高剂量组与模型组相比差异有显著性，且呈现出下降趋势。详见表1。

表1小鼠血清ALT、AST、MDA测定结果

组别nAST(IU/L)ALT(IU/L)MDA(nmol/mgprot)空白组1029.98±0.36b8.32±0.17b7.44±1.04b模型组10206.01±8.64305.52±17.0520.8±2.84阴性组10205.76±4.88307.45±7.3920.4±2.47联苯双酯阳性对照组(200mg/kg)10110.94±8.34b138.9±16.33b9.27±1.33b黄苓总黄酮苷元组 高剂量组(400mg/kg)10142.65±7.05a198.44±7.52a11.5±1.05b 中剂量组(200mg/kg)10154.33±4.81a219.36±4.37a13.2±0.81a 低剂量组(100mg/kg)10169.46±6.41a245.60±5.41a15.8±1.41a

与模型组比较，a:P<0.05,b:P<0.01

3 讨 论

目前肝病已经成为社会健康的主要问题，目前治疗肝病尚没有特异性高的药物，导致患者生活质量显著下降[6]。而中药副作用小，适于长期服用，所以从中药中寻找一个有效的护肝药成为现在一个焦点。

ALT位于肝细胞浆内，而AST位于肝细胞浆和线粒体内，两者只有在肝细胞损伤后才会进入到血液中[7]。而MDA是在肝损伤时组织缺氧缺血，脂质过氧化反应而生成的。故根据本实验结果可以看出，黄芩总黄酮苷元可以显著抵御四氯化碳对肝脏的伤害，而起到保肝作用。

由于本研究采用的药物为完全酶解后的苷元，排除了苷类物质对实验结果的影响，从这点上提示在保肝作用上，黄芩苷类很有可能为前药，而真正药效物质基础是其苷元部分。其作用机制可能是通过多个酚羟基的抗氧化能力对抗自由基对肝细胞的破坏而起效[8]。但是自然界中具有抗氧化性的物质不胜枚举，光从这一个角度无法完全说明黄芩总黄酮苷元对肝脏特有的保护作用，其更进一步的作用机制还有待进一步的发现与完善。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京：化学工业出版社，2010:282.

[2] 宁康健，吕景芳，江景鹏，等.黄芩苷对小鼠四氯化碳肝损伤保护作用的研究[J].中国中医药科技，2011,18(2)：120-121.

[3] 旺晓军，马赟，张奉学.黄芩甙对ConA致肝损伤小鼠肝组织MDA含量的影响[J].世界华人消化杂志，2005，13(9)：1153-1155.

[4] 康辉，李强，王丽.黄芩提取物、黄芩苷抗氧化和保肝作用研究[J].中医研究，2010,23(4)：27-29.

[5] 黎旸，李谨翡，蒋忠军.CCl4致小鼠急性肝损伤模型的研究[J].热带医学杂志，2010,10(6)：657-659.

[6] 张丽霞，李星丹，郑卫，等.慢性肝病患者的生存质量量表[J].中国实用神经疾病杂志，2012,15(2)：8-9.

[7] 姚光弼.肝脏损伤的机制[J].中国消化杂志，1998,18(4)：235-238.

[8] 曾祥伟，杨丽燕，陈金龙，等.黄酮类成分抗自由基氧化活性进展[J].中华中医药杂志，2013,28(9)：2694-2696.

EffectofScutellariaBaicalensisTotalFlavonoidonLiver-protection

XU Qin，LI Yiguang

(JiangxiUniversityofChineseTraditionalMedicine，Nanchang,Jiangxi330004,China)

ObjectiveTo study the hepatic protection effect of Scutellaria Baicalensis Total Flavonoid (SBTF).MethodsSeventy male Kunming mice were randomly divided into seven groups:blank control group,model group,negative group,bifendate positive group and high-dose,middle-dose,low-dose group.Stomach perfusion was given for 15 days; High-dose,middle-dose,low-dose group were given SBTF 400mg/kg，200mg/kg，100mg/kg each once a day; positive group,negative group,model group and blank control group were given bifendate(200mg/kg),poloxamer solution(2.0%),normal saline separately.At the 15th day,6 hours after perfusion,all mice were intraperitoneally injected carbon tetrachloride oil resolution (0.1%) except the blank group,and 12h later,mice were weighed and taken for blood; their livers were separated,taking pictures,making homogenate to test MDA.The whole blood was centrifugalled and blood serum was to test ALT and AST and calculate liver index.ResultFor positive and high-dose group,the surface of mice’s liver was smooth and ruddy with no blood clot or spots,but a little dull compared with blank control group; middle-dose and low-dose group had less ruddy sequence with more obvious blood spots; negative and model group were pale,with block of clots and spots.AST,ALT,MDA of negative and model group were apparently higher than blank control group; decreases in the sequent low-dose,middle-dose,high-dose group,but not so evident as positive group.ConclusionSBTF has a hepatoprotection effect,positively related to its dose.

Scutellaria Baicalensis Total Flavonoid; hepatoprotection; carbon tetrachloride; pharmacology

10.15972/j.cnki.43-1509/r.2015.01.009

2014-04-14；

2014-11-20

*通讯作者，E-mail：xjh6262@sina.com.

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(此文编辑：蒋湘莲)