孙华伟+张敬峰+何孔旺+赵永前+茅爱华
摘要:应用韩同JBT公司的PCV-2抗体检测试剂盒,对2014年江苏省农业科学院兽医研究所动物疫病诊断检测中心临床门诊收集的。来自宿迁、连云港、南通、盐城和徐州5市未进行PCV-2疫苗免疫接种的32个中小规模猪场的990份血清进行PCV-2的抗体检测,并对其中50份阳性血清进行PCV-2的PCR检测,以诊断和分析PCV-2在江苏的感染情况。抗体检测结果表明,990份血清样品平均抗体阳性率为83.8%。PCR检测结果显示:50份阳性血清的PCV-2检出率为32.0%。表明,PCV-2感染在江苏省中小规模猪场普遍存在。
关键词:江苏省;中小规模猪场;猪圆环病毒2型(PCV-2);流行病学调查
中图分类号:S858.285.3文献标识号:A文章编号:1001-4942(2015)04-0117-03
断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)主要由猪圆环病毒2型(Porcinecircovirustype2,PCV-2)引起,是危害当今全球养猪生产主要的免疫抑制性疾病,是继猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)之后新发现的又一重要疫病。本病的主要症状为呼吸困难、黄疸、渐进性消瘦,剖检可见淋巴组织水肿、间质性肺炎及肾炎。PCV-2不仅可以引起PMWS,而且与猪皮炎与肾病综合征、增生性坏死性肺炎、猪繁殖与呼吸障碍综合征、繁殖障碍、先天性颤抖、肠炎等疾病亦有重要关联[1,7]。更为严重的是,PCV-2感染所引起的猪免疫抑制会直接导致其他传染病免疫失败,并引起其他病原的继发感染,造成的间接损失难以估算[8]。
收稿日期:2015-01-29
基金项目:江苏省农业科技自主创新项目[编号:CX(14)4049]
本试验结合流行病学和临床生产,应用ELISA和PCR方法,对江苏省5市32个未免疫猪圆环病毒疫苗的中小规模猪场的血清进行PCV-2抗体和抗原的检测,以对PCV-2在江苏省的感染情况提供科学参考。
1材料与方法
1.1血清来源
江苏省农业科学院兽医研究所动物疫病诊断检测中心门诊接收的来自宿迁市、连云港市、南通市、盐城市和徐州市未进行PCV-2疫苗免疫的32个中小规模猪场的血清样品990份,在本中心实验室进行相关检测。
1.2主要试剂及仪器
PCV-2抗体检测试剂盒,购自韩国JBT公司;PCV-2RT-PCR检测试剂盒,购自北京世纪元亨动物防疫技术有限公司;酶标仪型号为宝特ExL800,美国宝特公司生产;冷冻高速离心机型号为Centrifuge5424R,产自德国;各种规格移液器,购自德国Eppendorf公司;恒温箱、水浴锅等。
1.3方法
将32个猪场按不同季节、不同规模、不同猪只年龄、不同地区进行划分,严格按照PCV-2抗体检测试剂盒说明书进行ELISA抗体检测操作。结果判定:通过计算每个样品的S/P值来判定,若S/P值小于0.4,样品判定为PCV-2抗体阴性;若S/P值大于或等于0.4,样品判定为PCV-2抗体阳性。PCV-2的PCR检测严格按照试剂盒说明书进行。
2结果与分析
2.1PCV-2抗体检测结果
ELISA抗体检测共检出阳性血清830份,平均阳性率为83.8%。
2.1.1不同季节PCV-2抗体阳性率由图1可知,2014年从春季到冬季,PCV-2的抗体阳性率呈先下降后上升的趋势,但4个阶段的差别不明显,推测PCV-2感染已没有明显季节性。这一结果与樊福好[2]的报道一致。
2.1.2不同规模猪场PCV-2抗体阳性率由表1可知,不同养殖规模的猪场均有PCV-2感染,但以200头以上大规模猪场的血清抗体阳性率最高,为85.9%;100头以下(包括散养户)猪场的血清抗体阳性率最低,为81.5%。说明猪圆环病毒的感染与猪群密度有关,小规模猪场的饲养密度相对较大,一旦发病容易持续感染,难以净化。这与杨本勇[3]的报道一致。
2.1.3不同年龄猪只PCV-2抗体阳性率由表2可知,不同生长阶段的猪均有PCV-2感染,以种公猪的血清抗体阳性率最高,达95.2%;断奶保育猪最低,为60.5%。这一结果与临床上保育仔猪衰竭综合征高发情况一致[4]。大部分保育猪在断奶后2周开始发病,这可能与产房仔猪有母源抗体的保护,而保育猪只随着母源抗体的下降,不能抵御环境中的野毒有关。
2.1.4不同地区PCV-2抗体阳性率由表3可知,在江苏省上述地区未免疫PCV-2疫苗的中小规模猪场,PCV-2抗体阳性率均较高,宿迁中最高,达90.2%;南通市最低,为78.3%。这可能与宿迁市生猪存栏量较大有关[5],具体原因有待于进一步调查研究。
2.2PCR检测结果
采用PCR方法,选择PCV-2血清抗体为阳性的血清样品50份进行PCV-2目的基因片段扩增,结果检出阳性16份,检出率为32.0%。血清中PCV-2的PCR检出率明显低于PCV-2的抗体阳性率,这与血清中PCV-2的检出率比病理组织低有一定关系,李郁等[6]报道脾脏和淋巴结是检测PCV-2的最佳组织器官。
3结论与讨论
分别采用ELISA方法和PCR方法对临床门诊收集的血清进行PCV-2抗体和PCV-2病毒的检测,结果表明,PCV-2血清抗体平均阳性率为83.8%,PCR检出率为32.0%。在调查的32个猪场中,有22个猪场的保育猪在断奶后1~2周(5~10周龄)出现进行性消瘦、生长迟缓、被毛粗乱、腹式呼吸、拉稀等症状,死亡率判别较大,介于5%~30%,这与猪场的饲养管理水平和卫生状况有很大关系。综上所述,PCV-2感染在江苏省中小规模养猪场已经相当普遍,并将在今后一段时间内影响江苏省养猪生产。因此,进一步对PCV-2进行分子流行病学监测是一项十分重要的工作,对于PCV-2阳性猪场及时进行PCV-2疫苗的免疫是必要的。endprint