芙蓉散质量标准的建立

张小波

芙蓉散质量标准的建立

张小波

目的：建立院内制剂芙蓉散的质量评价标准。方法：采用薄层色谱法对芙蓉散中黄芩、大黄、小檗碱和冰片进行定性鉴别；采用高效液相色谱法（HPLC）方法，色谱柱：Kromasil C18(150 mm×4.6 mm,5 μm)，流动相：甲醇-水-磷酸（47∶53∶0.2）；流速：1 mL/min；检测波长：280 nm；柱温：35℃；测定芙蓉散中黄芩苷的含量。结果：黄芩、大黄、小檗碱和冰片薄层色谱法（TLC）鉴别具有较好的专属性，阴性对照无干扰。以黄芩苷进样浓度(X)对峰面积(Y)进行线性拟合，得黄芩苷回归方程为：Y=5.494 06e-007X-0.003 888 11，r=0.9997；线性范围为1.242～0.0828 μg呈现良好线性关系。测得黄芩苷平均回收率为98.3%，RSD为1.94%。结论：该方法简便、准确、专属性及重现性好，可作为芙蓉散的质量控制方法。

芙蓉散；黄芩苷；含量测定；高效液相色谱法；薄层色谱法

芙蓉散是我院多年来生产的制剂，临床主要具有清热、解毒、凉血的功能，用于疮痈初起，尚未溃脓。芙蓉散的主要成分为黄芩、大黄、泽兰、芙蓉叶、黄柏。其中黄芩具有清热燥湿、泻火解毒的功效[1-2]，黄芩中主要成分为黄芩苷，在许多中药制剂中作为质控指标之一。目前已有文献报道采用高效液相色谱法（high-performance liquid chromatography,HPLC）方法测定黄芩苷含量[3-5]，但芙蓉散质量标准[6]中尚无含量测定方法，因此我们采用薄层色谱法（thin layer chromatography,TLC）方法对芙蓉散中的主要药材进行定性鉴别，并采用HPLC法测定黄芩苷含量，建立了芙蓉散的质量标准。实验结果表明该方法简便、准确、专属性及重现性好，可作为芙蓉散的质量控制方法。

1　材料与方法

1.1仪器高效液相系统包括：SSIPC2000色谱泵（美国），SPD210Avp紫外检测器(日本岛津公司)和7725型进样器(美国Rheodyne公司)；ANASTAR色谱工作站(天津奥泰科技有限公司)。

1.2材料黄芩药材（天津市南开医院采购）；芙蓉散（本院制剂）；盐酸小檗酸（110713-200208），大黄对照药材（120902-200609），黄芩苷（110715-201318），黄柏对照药材（121510-200702），冰片对照品（743-8902）以上对照品和对照药材均购自中国药品生物制品鉴定所；国产硅胶G预制板（青岛海洋化工厂）；色谱纯甲醇(美国Fisher公司)，双蒸去离子水(实验室自制)，其余试剂为化学纯。

1.3实验方法

1.3.1TLC鉴别黄芩鉴别：取本品5 g，加甲醇25 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干,残渣加水20 mL使溶解，加盐酸调节pH值至2～3，用乙酸乙酯提取2次，每次25 mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2005年版一部附录VI B）试验，吸取上述两种溶液各4～6μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水（5∶3∶1∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3%三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

大黄鉴别：取本品10 g，加甲醇30 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水10 mL使溶解，加盐酸1 mL，加热回流30 min，立即冷却，用乙醚提取2次，每次20 mL，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取大黄对照药材0.1 g，加甲醇10 mL，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各4～6μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（30～60℃）-甲酸乙酯-甲酸（15∶5∶1）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

黄柏鉴别：取本品5 g，加甲醇20 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2005年版一部附录VIB）试验，吸取上述两种溶液各4～6μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-异丙醇-浓氨试液（12∶6∶3∶3∶0.6）为展开剂，置氨蒸气预饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

冰片的鉴别：取本品10 g，加乙醚30 mL，超声处理10 min，滤过，滤液挥干，残渣加乙醇5 mL使溶解，加水40 mL，混匀，用石油醚（30～60℃）提取2次，每次25 mL，合并石油醚液，挥干，残渣加乙醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取冰片对照品，加乙醇制成每1 mL含2 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2005年版一部附录VIB）试验，吸取上述两种溶液各2～4μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯（17∶5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

1.3.2黄芩苷含量测定色谱条件色谱柱：Kromasil C18(150 mm×4.6 mm，5μm)，流动相：甲醇-水-磷酸（47∶53∶0.2）；流速：1 mL/min；检测波长：280 nm；柱温：35℃；进样量20μL。

溶液配制：（1）对照品溶液，称取黄芩苷对照品一定量，用甲醇溶解并稀释成每1 mL含黄芩苷82.8μg的溶液，即得。（2）样品溶液，称取芙蓉散粉末0.25 g，精密称定，置于25 mL容量瓶中，加入70%乙醇20 mL，超声处理30 min，取出放置室温，加70%乙醇至刻度，摇匀，虑过，精密吸取续滤液1.0 mL，置于10 mL容量瓶中，加70%乙醇至刻度，摇匀，过0.45μm虑膜，即可。（3）阴性对照溶液，缺项黄芩芙蓉散同上法制备。

2　结果

2.1TLC鉴别

2.1.1黄芩鉴别在薄层色谱中，在与黄芩苷对照品色谱相应的位置上，显示相同颜色的斑点。见图1。

2.1.2大黄鉴别在薄层色谱中，在与大黄对照药材色谱相应的位置上，显示相同颜色的斑点。见图2。

图1　黄芩TLC图　

图2　大黄TLC图

2.1.3黄柏鉴别在薄层色谱中，在与盐酸小檗碱对照品色谱相应的位置上，显示相同颜色的荧光斑点。见图3。

2.1.4冰片鉴别在薄层色谱中，在与冰片对照品色谱相应的位置上，显示相同颜色的斑点。见图4。

2.2黄芩苷含量测定

2.2.1系统适用性按照1.3.2项下色谱条件分析黄芩苷对照品溶液及芙蓉散、阴性对照溶液，色谱图如图5所示。理论塔板数以黄芩苷计大于3000；拖尾因子在0.95～1.05范围内；分离度均大于1.5，样品中其它组分未干扰黄芩苷的测定。

图3　黄柏TLC图　

图4　冰片TLC图

图5　黄芩苷对照品溶液

2.2.2标准曲线取黄芩苷对照品溶液，分别进样15.0μl、10.0μl、6.0μl、4.0μl、2.0μl、1.0μl，在上述色谱条件下进行测定。以黄芩苷进样浓度(X)对峰面积(Y)进行线性拟合，得黄芩苷回归方程为：Y= 5.494 06e-007X-0.003 888 11，r=0.9997；线性范围为1.242～0.0828μg呈现良好线性关系。

2.2.3精密度试验取黄芩苷对照品溶液，在上述色谱条件下分别重复进样6次，每次10μL，进行测定，计算结果黄芩苷在两种溶液中峰面积的RSD分别为1.86%，表明该方法精密度较高。

2.2.4重复性试验取同一芙蓉散，按样品制备方法平行制备6份样品，按前述色谱条件进样分析，求得黄芩苷峰面积的RSD为1.84%。

2.2.5稳定性试验取黄芩苷对照品溶液，分别在0 h、1 h、2 h、3 h、4 h、6 h、8 h进样，按前述色谱条件进样分析，求得黄芩苷峰面积的RSD为1.79%。

2.2.6回收率试验准确称取已知含量的芙蓉散粉末6份，各0.125 g，分别加入对照品溶液适量，按上述方法处理，测得黄芩苷平均回收率为98.3%，RSD为1.94%，结果见表1。

表1　回收率试验结果

2.2.7样品含量测定取3批芙蓉散供试品，按照2.2项下的方法进行样品处理，前述色谱条件进样分析，结果见表2。

表2　不同批次样品含量测定

3　讨论

提取时间的考察，本实验比较了样品超声提取时间30 min和60 min，结果几乎无差别，故提取时间定为30 min。

经多次实验，采用薄层色谱法对芙蓉散中黄芩、大黄、小檗碱和冰片进行定性鉴别；建立了芙蓉散中黄芩苷的含量测定方法，为芙蓉散的的质量监控提供了可靠依据。

有文献[7]研究表明，芙蓉散对角叉菜胶引起的大鼠足跖肿胀和醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增高具有显著抑制作用，能够抑制和灭活常见浅表感染致病菌。芙蓉散处方中的黄柏中主要成分生物碱类，具有显著的抗菌、抗炎、抗病毒作用[8]；抗溃疡和抗肝炎作用[9]。文献研究表明，黄柏提取物小檗碱具有降压作用，小量的小檗碱可兴奋心肌，增强其收缩力具有正性肌力作用，且发生作用较快；故小剂量小檗碱静脉滴注用于心衰病人[10]。除上述主要药理作用外，另有研究发现黄柏有抗氧化、抗痛风、抗癌、利尿、健胃、外用促进皮下溢血吸收等作用[11]。黄芩中有效成分为黄酮类化合物，具有明显的抗菌、抗炎、抗过敏、抗氧化、抗致癌和抗病毒等作用[12]；药学研究者Sang-Won Parkl等人还发现黄芩苷能够有效防止由于四氯化碳导致的肝受损现象的产生，对肝细胞起到较好的保护作用；，其还具有降低血压、防治糖尿病、冠心病、艾滋病等药理作用[13]。大黄主要化学成分为蒽醌衍生物，其中游离型蒽醌衍生物主要有大黄酸、芦荟大黄素、大黄素甲醚和大黄酚，是大黄中主要的抗菌成分[14]。有研究报道以芙蓉叶为君药、落得打、赤小豆等组成制成的复方芙蓉叶巴布膏在缓解急性踝关节损伤的肿胀方面，疗效较显著[15]。

我院为中西医结合医院在吴咸中院士的带领下，逐渐摸索总结出一套中西医结合治疗阑尾脓肿的方法。中西医结合治疗阑尾脓肿，是在西医抗炎补液的基础上，通过口服中药阑尾清解汤和外敷中药（芙蓉散-以黄酒为引，调成糊状，敷于患处）联合使用起到清热解毒、活血化瘀、排脓散结、通里攻下等功效，使脓肿加速吸收、消退，来达到治疗效果[16]。外敷中药是中西医结合治疗不可缺少的一环，本组患者经中西结合治疗在住院天数上明显少于西医治疗组，住院费用也相应减少，炎症消退快，治疗效果却明显优于西医治疗组[17]。本研究采用薄层色谱法对芙蓉散中黄芩、大黄、小檗碱和冰片进行定性鉴别，对芙蓉散中黄芩苷的含量进行测定，能够有效控制芙蓉散的质量，从而保证临床疗效。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].2010年版．北京：中国医药科技出版社，2010：283.

[2]牛晓暐，张洪海，吕培文.芙蓉散治疗阳性疮疡作用机理的实验研究[J].北京中医药，2011，30（9）：713-715.

[3]匡菊香，刘远文，张倩茹，等.舌莲胃康胶囊的质量标准研究[J].中国药房，2012，23（3）：248.

[4]金美花，刘汇.高效液相色谱法测定小儿哮喘灵片黄芩苷含量[J].中国药业，2011，20（23）：28.

[5]龙月红，邢朝斌，劳凤云，等.高效液相色谱法测定不同生境黄芩中的黄芩苷[J].中国实验方剂学杂志，2012，18（6）：97.

[6]赵伟峰，车晓平，钱珊，等.薄层色谱法鉴定芙蓉散中的主要成分[J].世界中医药，2014，9（6）：792-795.

[7]牛晓暐，张洪海，吕培文.芙蓉散治疗阳性疮疡作用机理的实验研究[J].北京中医药，2011，30(9):713-715.

[8]国家中医药管理局.中华本草编委会·中华本草[M].上海:上海科学技术出版社，1999:6.

[9]荆庆，宋济洲，负学亮.大黄黄柏对乙型肝炎抗原的抑制作用[J].天津医药，1976，4（6）：283-286.

[10]李峰，贾彦竹.黄柏的临床药理作用[J].中医药临床杂志，2004，16（2）：191.

[11]吴嘉瑞，张冰，张光敏.黄柏药理作用研究进展[J].亚太传统药, 2009,5(11);160-162.

[12]周德庆，曾骆.黄芩总黄酮的提取工艺研究[J].华西药学杂志，2002，18(1):78-79.

[13]刘正兵，中药黄芩的药理及其应用研究[J].求医问药,2012,10 (12):337.

[14]郭望祥.大黄的药理研究概况[J].汉江大学学报(医学版)，2002，30(5):60．

[15]奚小冰，薛彬，胡颈松，等.复方芙蓉叶巴布膏治疗急性踝关节软组织损伤[J].上海中医药大学学报,2013,27(5):56-58.

[16]段巨涛，孔棣.阑尾脓肿中西医结合治疗和单纯西医治疗对比分析[J].天津中医药，2007,24（4）：312.

[17]钟岗，周振里，张楠.阑尾脓肿的中西医结合治疗效果评价[J].中国中西医结合外科杂志,2015,21（1）：32-35.

（收稿：2015-05-06修回：2015-08-26）

（责任编辑刘洪斌）

Establishment of Quality Standards for Lotus Powder

ZHANG Xiao-boDepartment of Pharmacy,Tian⁃jin Nankai Hospital,Tianjin(300100),China

ObjectiveTo establish the quality evaluation standard of hospital preparation of lotus powder. MethodsFor the identification of Radix Scutellariae,rhubarb,lotus powder berberine and borneol TLC and HPLC methods were used,the conditition of column chromatography was Kromasil C18(150 mm×4.6 mm,5 μm), the mobile phase of methanol-water-phosphate(47∶53∶0.2);the velocity:1 mL/min,and the detection wave length:280 nm;the column temperature:35℃;and determination of the content of Baicalin in lotus powder was done.ResultsBaicalin,rhubarb,berberine and borneol TLC identification showed good specificity,negative control without interference,the baicalin in sample concentration(x)of the linear fit to the peak area(y),baicalin regression equation showed Y=5.49406e-007X-0.00388811,r=0.9997;linear range for 1.242μg～0.0828μg showed good linear relationship.The average recovery of baicalin was found 98.3%,and RSD1.94%. ConclusionThis method is simple,accurate,specific and reproducible,so can be used for quality control of lotus powder.

Lotus powder;baicalin;content determination;high-performance liquid chromatography;thin lay⁃er chromatography

R285.6

A

1007-6948(2015)05-0485-04

10.3969/j.issn.1007-6948.2015.05.013

天津市南开医院药剂科（天津 300100）

张小波，E-mail：zhang xiao bo 6380@163.com