高效液相色谱法测定科安乳膏中6-姜辣素含量

高效液相色谱法测定科安乳膏中6-姜辣素含量

郑峙云1，桂双英1，龙子江1，周绪天2

(1.安徽中医药大学安徽省中药制剂工程技术研究中心安徽省中医药科学院药物制剂研究所，

安徽 合肥230012；2.安庆镇痛消瘤研究所，安徽 安庆246001)

[摘要]目的采用高效液相色谱法建立科安乳膏中6-姜辣素含量的测定方法。方法色谱柱为C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相为甲醇-水(70∶30)，检测波长为280 nm，流速为1.0 mL/min，柱温为30 ℃，进样量为20 μL。结果6-姜辣素浓度在1.02～20.4 μg/mL范围内与峰面积的线性关系良好(r=0.999 9)；平均加样回收率为98.83%，RSD为1.08%(n=6)。结论所建立的高效液相色谱法简便、准确、可靠，可用于科安乳膏的含量测定。

[关键词]高效液相色谱法；6-姜辣素；科安乳膏；含量测定

[中图分类号]R284；R927.2[DOI]10.3969/j.issn.2095-7246.2015.05.025

基金项目：安徽省科技攻关项目(09010302039)

作者简介：郑峙云(1970-)，女，实验师

收稿日期：(2014-10-30；编辑：张倩)

科安乳膏是由生姜、雄黄与适宜的基质制成的复方乳膏，临床用于肿瘤治疗，效果显著。现代药理研究表明，科安乳膏具有明显的抑制肿瘤作用[1-2]。生姜是科安乳膏主要药物之一，具有解表散寒、温中止呕、化痰止咳、解鱼蟹毒等功效。近年来，实验研究发现生姜的提取物有很好的抑瘤效果[3]。姜辣素是生姜中主要活性成分，包括6-姜辣素、8-姜辣素、10-姜辣素、12-姜辣素等10余种成分，以6-姜辣素含量最高，其生物活性也最强。因此，6-姜辣素可作为生姜及含生姜制剂的质量评价指标。目前，6-姜辣素的含量测定方法多为紫外分光光度法和高效液相色谱法[4-5]，但前者专属性和灵敏度不理想。为有效控制科安乳膏质量，本研究旨在建立该制剂中6-姜辣素的高效液相色谱测定方法。

1　仪器与试药

1.1仪器日本岛津LC-20A高效液相色谱仪(SPD-M20A紫外检测器，LC-20AB泵，LC-solution色谱工作站)；HH-S恒温水浴锅：江苏国胜实验仪器厂；超声清洗器AS3120：天津奥特赛恩斯仪器有限公司；色谱柱：phenomenex C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)。

1.2试药6-姜辣素对照品：成都恩曼斯特生物技术有限公司(批号 20100412)；甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，科安乳膏为自制品(批号分别为131205、131207、131209)。

通信作者：桂双英，guishy0520@126.com

2　方法与结果

2.1试药的制备

2.1.16-姜辣素对照品溶液的制备精密称取6-姜辣素标准品10.2 mg，置10 mL量瓶中，以甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，定容至刻度。精密吸取1.0 mL置10 mL量瓶中，以甲醇稀释至刻度，即得对照品贮备液。

2.1.2供试品溶液的制备精密称取本品乳膏约4.8 g，置具塞锥形瓶中，加入甲醇50 mL，称质量。加热回流30 min，放冷，加甲醇补足质量，摇匀，过滤，取续滤液，即得。

2.1.3阴性对照溶液的制备精密称取缺干姜乳膏4.8 g，按“2.1.2”项下制备方法，得阴性对照品溶液。

2.2色谱条件色谱柱:phenomenex C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：甲醇-水(70∶30)；流速：1.0 mL/min；检测波长：280 nm；柱温：30 ℃；进样量：20 μL。

2.3系统适用性试验分别精密吸取6-姜辣素对照品、科安乳膏样品、阴性对照溶液各20 μL，进样测定。结果表明，阴性样品无干扰。见图1。

2.4线性关系考察分别精密吸取对照品贮备液0.1、0.2、0.4、0.8、1.2、2.0 mL，置于10 mL容量瓶中，以甲醇溶液稀释至刻度，摇匀。按“2.2”项下色谱条件各进样20 μL，每样进两次，记录色谱，取平均值，并以浓度(c)为横坐标、峰面积积分值(A)为纵坐标进行线性回归，得回归方程为A=11 691c-8 962.9(r=0.999 9)。结果表明，6-姜辣素检测浓度在1.02～20.4 μg/mL范围内与峰面积的线性关系良好。

2.5精密度试验精密吸取6-姜辣素对照品溶液(8.16 μg/mL)，按“2.2”项下色谱条件连续进样6次，结果峰面积RSD为0.92%(n=6)，表明该方法精密度良好。

图16-姜辣素对照品(A)、科安乳膏样品(B)和阴性对照品(C)的高效液相色谱图

2.6重复性试验取同一批科安乳膏，按“2.1.2”项下方法制备样品溶液6份，按“2.2”项下色谱条件进样测定6次。结果，6-姜辣素含量的RSD为1.51%。表明本方法重复性较好。

2.7稳定性试验取同一供试品溶液，依法每隔2 h测定1次，共考察12 h，结果，峰面积积分值的RSD为0.99%，表明供试品溶液在12 h内稳定。

2.8加样回收率试验精密吸取已知含量的科安乳膏6份，每份约2.4 g，精密称定，分别精密加入6-姜辣素对照品储备液0.4 mL(102 μg/mL)，按“2.1.2”项下方法制备样品溶液，依法测定，计算回收率，结果平均回收率为98.83%，RSD为1.08%，表明该方法准确度好，结果见表1。

表1　加样回收率实验结果

2.9样品含量测定取批号分别为131205、131207、131209的3批样品，按上述方法制备样品溶液，分别精密量取样品溶液和对照品溶液各20 μL注入液相色谱仪，按外标法以峰面积计算含量。结果测得6-姜辣素含量分别为35.22、33.55、33.40 μg/mg，RSD分别为1.21%、0.98%和1.64%。

3　讨论

参考文献高效液相色谱法测定6-姜辣素含量的流动相优化时，分别[5-7]考察了甲醇-水体系、乙腈-水体系和乙腈-甲醇-水体系，结果乙腈-甲醇-水体系效果最优，甲醇-水和乙腈-水体系均次之。研究结果表明，甲醇-水比例为70∶30时能达到有效分离，考虑到甲醇-水体系成本低、操作简单，故采用甲醇-水作为流动相。

3批科安乳膏中6-姜辣素含量测定结果在33.40～35.22 μg/mg，但因检测的样品有限，制剂中6-姜辣素含量限度还有待增加原料批次和成品批次而定。同时，雄黄也是本制剂的重要组成成分之一，课题组正在进一步制定制剂中雄黄的含量幅度，从而有效控制制剂质量。

参考文献：

[1]魏成晨,龙子江,周绪天,等.科安乳膏对S180荷瘤小鼠抗肿瘤作用及机制研究[J].中药材，2013，36(11)：1827-1829.

[2]赵奇红,张颖,刘赟,等.科安乳膏抗癌作用机理的初步研究[J].中国科学技术大学学报,2009,39(4):351-356.

[3]王绪平,章建民,张文娟，等.生姜提取物抑瘤降脂作用研究[J].现代医院,2011,11(1):11-12.

[4]郭晓斐,杜爱琴,杜爱玲.生姜中姜辣素含量的测定[J].山东化工,2007,36(4):34-36,40.

[5]国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[M].北京:中国医药科技出版社，2010：93.

[6]王维皓，王智民，高慧敏,等.干姜炮制品的质量研究[J].中国中药杂志,2009,34(5):564-566.

[7]单婷婷，曹红，邢俊波,等.高效液相色谱法测定参姜搽剂中6-姜辣素的含量[J].解放军药学学报，2011，27(6)：509-510.