气相色谱法测定制痂酊中龙脑、异龙脑的含量

白 娟，刘增辉，周秀红，朱倩云

(安徽省医学科学研究院，安徽合肥 230061)

制痂酊由黄芩、黄柏、儿茶、冰片四味中药经乙醇浸提制成，为医院制剂，具有清热燥湿、收敛止痛等功效，临床用于I度、Ⅱ度烧伤、烫伤等，该制剂收载于安徽省制剂规范中，未建立定量测定方法，冰片为方中君药，而龙脑、异龙脑为冰片的主要活性成分，本文选择龙脑、异龙脑作为控制该产品质量的定量指标，采用气相色谱法进行定量和测定方法的研究［1-10］，结果表明本方法简便、快速，结果准确，重现性好，可用于该制剂的质量控制。

1 仪器与试药

惠普6890型气相色谱仪;FID检测器;XP56-2型百万分之一电子天平(AETTLER TOLEDO公司);BP210S型万分之一电子天平(德国赛多利斯)。制痂酊(批号:201308、201309、201310)和阴性制剂均由安庆市宜城医院制剂室提供;龙脑对照品(批号:110881-201107)、异龙脑对照品(批号:110881-200802)均由中国药品生物制品检定所提供;萘、环己烷、乙醇等试剂均为分析纯。

2 实验方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱:HP-INNOWax Polyethylene Glycol毛细柱(30.0 m ×250 μm ×0.25 μm)，柱温:130℃;进样口温度:210℃;FID 检测器，温度:250℃;载气(N2)流速:1.2 mL·min-1;氢气流速:40 mL·min-1;空气流速:400 mL·min-1;进样量:2μL;理论板数按龙脑峰计算为13 519，龙脑、异龙脑分离度为1.86。

2.2 对照品储备液的制备 分别取龙脑、异龙脑对照品适量，精密称定，加环己烷制成每1 mL含0.271 0 mg 、0.235 2 mg的混合溶液，即得。

2.3 内标溶液的制备 取萘适量，精密称定，加环己烷制成每1 mL含0.500 1 mg的溶液，即得。

2.4 对照品溶液的制备 精密量取2 mL对照品储备液，分别精密加入0.5 mL内标溶液，2 mL 80%乙醇溶液，加环己烷至10 mL，涡旋混合5 min后放置，待分层后取上层环己烷液，即得。

2.5 供试品溶液的制备 制痂酊摇匀，精密量取2 mL于15 mL带塞试管中，精密加入0.5 mL内标溶液，加环己烷至10 mL，涡旋混合5 min后放置，待分层后取上层环己烷液，即得。

2.6 阴性对照溶液的制备 取缺冰片的缺味阴性制剂，按“2.5”项下的方法处理，即得。

2.7 专属性实验 精密吸取上述对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各2μL，注入气相色谱仪测定，结果在与对照品色谱相应位置上，供试品溶液与其它组分分离度良好，阴性对照无干扰，见图1。

2.8 线性关系考察 精密量取上述对照品储备液1.0、2.0、4.0、6.0、8.0 mL 分别置于 5 个 10 mL 量瓶中，分别精密加入0.5 mL内标溶液，用环己烷稀释至刻度，摇匀。同对照品储备液分别进样2μL，测定峰面积，以龙脑、异龙脑进样浓度为横坐标，龙脑、异龙脑峰面积与内标萘峰面积的比值为纵坐标，计算得回归方程:龙脑 Y=25.794X-0.015(r=0.999 8，n=6)、异龙脑 Y=26.334X-0.007(r=0.999 8，n=6)。结果表明:龙脑、异龙脑分别在0.027 1 ～0.271 0 g·L-1、0.023 5 ～ 0.235 2 g·L-1范围内呈良好的线性关系。

2.9 精密度试验 精密吸取对照品溶液2μL，注入气相色谱仪，测定。重复进样6次，结果龙脑、异龙脑峰面积与内标萘峰面积的比值RSD分别为0.62%、0.65%，表明本法精密度良好。

2.10 重现性实验 取同一批号的样品6份，分别按上述方法制备、测定龙脑、异龙脑含量，结果龙脑、异龙脑RSD分别为1.73%、1.66%，表明本法重现性良好。

2.11 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液，分别间隔0、2、4、6、8 h 后依法测定，结果龙脑、异龙脑峰面积与内标萘峰面积的比值RSD分别为0.49%，0.58%，表明供试品溶液在8 h内稳定性良好。

2.12 回收率试验 精密量取龙脑、异龙脑含量分别为 0.303 7、0.216 1 g·L-1的供试品 9 份各 1 mL，置于15 mL带塞试管中，分别精密加入对照品储备液(龙脑 0.271 0 g·L-1、异龙脑 0.235 2 g·L-1)0.6、0.6、0.6、1.0、1.0、1.0、1.5、1.5、1.5 mL ，内标溶液0.5 mL，80%乙醇溶液1 mL，加环己烷至10 mL，按供试品溶液制备方法平行制备并测定，计算回收率，结果表明加样回收率较好，结果见表1。2.13 样品测定 取三批样品，按“2.5”项下制备样品溶液，按上述色谱条件测定，结果见表2。

3 讨论

表1 回收率测定结果

表2 样品测定结果(n=3)

龙脑、异龙脑为冰片主要成分，已报道的分析方法有气相色谱法、气相色谱—质谱联用法、衍生化高效液相色谱法、薄层扫描法等，GC法因灵敏度高、重现性好、方便快捷而优于其它方法，且GC法还能进一步区分合成冰片中龙脑与异龙脑各自的对映异构体，用于区分合成冰片与天然冰片。故本实验采用GC法作为该制剂的含量测定方法。

基于毛细管色谱柱的高效性，分离效果比填充柱好，参考文献［1-9］，本实验选择 HP-INNOWax Polyethylene Glycol极性毛细管柱，各组分依据沸点从低到高和极性的差异，顺序出峰，在已优化的色谱条件下，无需程序升温，采用130℃柱温即可达到分析要求。

本实验采用内标法定量，对正十四烷［10］和萘［2］两种内标物进行了比较，结果与供试品色谱峰均分离良好、无干扰，考虑萘相对正烷烃价平易买，且萘具有和冰片一样的升华特性，可减少样品供试液制备和测定过程中回收率的不稳定性，故本实验选择萘作为内标。

制备供试品溶液选择提取方法时，曾对超声提取与直接涡旋混合两种方法进行了比较，结果直接涡旋混合龙脑、异龙脑即可提取完全。

实验结果表明:本法准确可靠，可用于制痂酊的质量控制。

［1］宋 莉，黄 艳，刘雪峰.气相色谱法同时测定黑豆馏油软膏中桉油精和冰片的含量［J］.安徽医药，2013，17(6):958-959.

［2］刘莉莉，秦建平，杨素德，等.GC法测定痛宁凝胶中冰片和薄荷脑的含量［J］.中国药科大学学报，2014，45(1):76-78.

［3］严加琴，李 丹.牛黄降压片中冰片含量及樟脑残留量的测定［J］.南通大学学报(医学版)，2013，33(6):498-500.

［4］吴克楠，韩 松.气相色谱法测定金凤搽剂中天然冰片的龙脑含量［J］.贵阳中医学院学报，2013，35(6):300-301.

［5］戴慧贤，童惠贞，林锦锋，等.气相色谱法测定连柏烧伤软膏中龙脑、异龙脑的含量［J］.中国卫生产业，2013，10(32):141-142.

［6］马朝阳，王远辉，田洪芸，等.GC法测定艾片中l-龙脑、异龙脑和樟脑［J］.中草药，2012，43(12):2428-2430.

［7］方 颖，赵希贤，赵鸣舒，等.气相色谱法同时测定醒脑静注射液中麝香酮、龙脑、樟脑、异龙脑的含量［J］.中国实验方剂学杂志，2012，18(8):96-99.

［8］张 淼，袁 浩，冯 丽.GC法测定拔云散眼药中龙脑、异龙脑的含量［J］.中国药事，2011，25(1):79-81.

［9］黎小莉，祝维峰，郭晓铃，等.GC法测定脑清乳剂中薄荷脑、异龙脑和龙脑的含量［J］.广东药学院学报，2013，29(4):396-399.