气相色谱法测定制痂酊中龙脑、异龙脑的含量

2015-12-14 01:16刘增辉周秀红朱倩云
安徽医药 2015年3期
关键词:冰片气相内标

白 娟,刘增辉,周秀红,朱倩云

(安徽省医学科学研究院,安徽合肥 230061)

制痂酊由黄芩、黄柏、儿茶、冰片四味中药经乙醇浸提制成,为医院制剂,具有清热燥湿、收敛止痛等功效,临床用于I度、Ⅱ度烧伤、烫伤等,该制剂收载于安徽省制剂规范中,未建立定量测定方法,冰片为方中君药,而龙脑、异龙脑为冰片的主要活性成分,本文选择龙脑、异龙脑作为控制该产品质量的定量指标,采用气相色谱法进行定量和测定方法的研究[1-10],结果表明本方法简便、快速,结果准确,重现性好,可用于该制剂的质量控制。

1 仪器与试药

惠普6890型气相色谱仪;FID检测器;XP56-2型百万分之一电子天平(AETTLER TOLEDO公司);BP210S型万分之一电子天平(德国赛多利斯)。制痂酊(批号:201308、201309、201310)和阴性制剂均由安庆市宜城医院制剂室提供;龙脑对照品(批号:110881-201107)、异龙脑对照品(批号:110881-200802)均由中国药品生物制品检定所提供;萘、环己烷、乙醇等试剂均为分析纯。

2 实验方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱:HP-INNOWax Polyethylene Glycol毛细柱(30.0 m ×250 μm ×0.25 μm),柱温:130℃;进样口温度:210℃;FID 检测器,温度:250℃;载气(N2)流速:1.2 mL·min-1;氢气流速:40 mL·min-1;空气流速:400 mL·min-1;进样量:2μL;理论板数按龙脑峰计算为13 519,龙脑、异龙脑分离度为1.86。

2.2 对照品储备液的制备 分别取龙脑、异龙脑对照品适量,精密称定,加环己烷制成每1 mL含0.271 0 mg 、0.235 2 mg的混合溶液,即得。

2.3 内标溶液的制备 取萘适量,精密称定,加环己烷制成每1 mL含0.500 1 mg的溶液,即得。

2.4 对照品溶液的制备 精密量取2 mL对照品储备液,分别精密加入0.5 mL内标溶液,2 mL 80%乙醇溶液,加环己烷至10 mL,涡旋混合5 min后放置,待分层后取上层环己烷液,即得。

2.5 供试品溶液的制备 制痂酊摇匀,精密量取2 mL于15 mL带塞试管中,精密加入0.5 mL内标溶液,加环己烷至10 mL,涡旋混合5 min后放置,待分层后取上层环己烷液,即得。

2.6 阴性对照溶液的制备 取缺冰片的缺味阴性制剂,按“2.5”项下的方法处理,即得。

2.7 专属性实验 精密吸取上述对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各2μL,注入气相色谱仪测定,结果在与对照品色谱相应位置上,供试品溶液与其它组分分离度良好,阴性对照无干扰,见图1。

2.8 线性关系考察 精密量取上述对照品储备液1.0、2.0、4.0、6.0、8.0 mL 分别置于 5 个 10 mL 量瓶中,分别精密加入0.5 mL内标溶液,用环己烷稀释至刻度,摇匀。同对照品储备液分别进样2μL,测定峰面积,以龙脑、异龙脑进样浓度为横坐标,龙脑、异龙脑峰面积与内标萘峰面积的比值为纵坐标,计算得回归方程:龙脑 Y=25.794X-0.015(r=0.999 8,n=6)、异龙脑 Y=26.334X-0.007(r=0.999 8,n=6)。结果表明:龙脑、异龙脑分别在0.027 1 ~0.271 0 g·L-1、0.023 5 ~ 0.235 2 g·L-1范围内呈良好的线性关系。

2.9 精密度试验 精密吸取对照品溶液2μL,注入气相色谱仪,测定。重复进样6次,结果龙脑、异龙脑峰面积与内标萘峰面积的比值RSD分别为0.62%、0.65%,表明本法精密度良好。

2.10 重现性实验 取同一批号的样品6份,分别按上述方法制备、测定龙脑、异龙脑含量,结果龙脑、异龙脑RSD分别为1.73%、1.66%,表明本法重现性良好。

2.11 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液,分别间隔0、2、4、6、8 h 后依法测定,结果龙脑、异龙脑峰面积与内标萘峰面积的比值RSD分别为0.49%,0.58%,表明供试品溶液在8 h内稳定性良好。

2.12 回收率试验 精密量取龙脑、异龙脑含量分别为 0.303 7、0.216 1 g·L-1的供试品 9 份各 1 mL,置于15 mL带塞试管中,分别精密加入对照品储备液(龙脑 0.271 0 g·L-1、异龙脑 0.235 2 g·L-1)0.6、0.6、0.6、1.0、1.0、1.0、1.5、1.5、1.5 mL ,内标溶液0.5 mL,80%乙醇溶液1 mL,加环己烷至10 mL,按供试品溶液制备方法平行制备并测定,计算回收率,结果表明加样回收率较好,结果见表1。2.13 样品测定 取三批样品,按“2.5”项下制备样品溶液,按上述色谱条件测定,结果见表2。

3 讨论

表1 回收率测定结果

表2 样品测定结果(n=3)

龙脑、异龙脑为冰片主要成分,已报道的分析方法有气相色谱法、气相色谱—质谱联用法、衍生化高效液相色谱法、薄层扫描法等,GC法因灵敏度高、重现性好、方便快捷而优于其它方法,且GC法还能进一步区分合成冰片中龙脑与异龙脑各自的对映异构体,用于区分合成冰片与天然冰片。故本实验采用GC法作为该制剂的含量测定方法。

基于毛细管色谱柱的高效性,分离效果比填充柱好,参考文献[1-9],本实验选择 HP-INNOWax Polyethylene Glycol极性毛细管柱,各组分依据沸点从低到高和极性的差异,顺序出峰,在已优化的色谱条件下,无需程序升温,采用130℃柱温即可达到分析要求。

本实验采用内标法定量,对正十四烷[10]和萘[2]两种内标物进行了比较,结果与供试品色谱峰均分离良好、无干扰,考虑萘相对正烷烃价平易买,且萘具有和冰片一样的升华特性,可减少样品供试液制备和测定过程中回收率的不稳定性,故本实验选择萘作为内标。

制备供试品溶液选择提取方法时,曾对超声提取与直接涡旋混合两种方法进行了比较,结果直接涡旋混合龙脑、异龙脑即可提取完全。

实验结果表明:本法准确可靠,可用于制痂酊的质量控制。

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