Sox10单抗免疫组化检测脂溢性角化病和皮肤纤维瘤中黑素细胞的增殖

杨 欢 张美华 苏忠兰

Sox10单抗免疫组化检测脂溢性角化病和皮肤纤维瘤中黑素细胞的增殖

杨 欢 张美华 苏忠兰∗

目的: 明确脂溢性角化病和皮肤纤维瘤中黑素细胞增殖情况及透明细胞的性质。方法:收集脂溢性角化病52例，皮肤纤维瘤20例，对其皮损进行Sox10(黑素细胞核特异性染色抗体)免疫组化染色。结果: 与正常皮肤比较，脂溢性角化病基底层黑素细胞增多34例，棘层39例和皮肤纤维瘤基底层黑素细胞增多16例，棘层12例。结论: 脂溢性角化病和皮肤纤维瘤中黑素细胞有不同程度增多，部分胞浆透明细胞为黑素细胞。

脂溢性角化病； 皮肤纤维瘤； 黑素细胞； 免疫组化

脂溢性角化病和皮肤纤维瘤是皮肤科常见的良性病变，有的脂溢性角化病和皮肤纤维瘤皮损颜色较深，其表皮内会有较多的色素和胞浆透明细胞，本文选取皮损颜色较深的脂溢性角化病和皮肤纤维瘤患者，对石蜡切片进行Sox10(黑素细胞核特异性染色抗体)染色，明确以上两种病变中黑素细胞增殖情况及胞浆透明细胞的性质。

1 资料与方法

1.1 临床标本采集 收集表皮内有较多色素沉着及胞浆透明细胞且临床色素较深的皮肤纤维瘤20例；脂溢性角化病52例，包括:棘层肥厚型、角化型各20例、激惹型、腺样型各5例，扁平型和克隆型各1例。

1.2 试剂 抗体:Sox10抗体(从美国Santa cruz公司购买)。Sox10为黑素细胞核染色的抗体，阳性为细胞核显示褐黑色。复合痣作为阳性对照(图1)，正常皮肤作为阴性对照(图2)。

1.3 方法

1.3.1 免疫组化方法 取本院病理科已制备的脂溢性角化病、皮肤纤维瘤及正常皮肤组织石蜡切片，按免疫组化DAB试剂盒步骤操作。

1.3.2 计数方法(人工计数) 每张组化片中，病变部位和相邻正常皮肤的基底层选取10个高倍视野(40倍)，计总数后，求平均数；病变部位平均数高于正常部位，计为增多；棘层选取10个高倍视野(40倍)，有Sox10阳性即有黑素细胞。

2 结果

2.1 脂溢性角化病黑素细胞增生情况，见表1。

表1 脂溢性角化病黑素细胞增生情况

(1)角化过度型20例，基底层黑素细胞增多12例(平均每个高倍视野3.73个黑素细胞，正常部位2.29个黑素细胞)，13例在棘层有黑素细胞(平均每个高倍视野0.44个黑素细胞)(图3)。(2)棘层肥厚型20例，基底层黑素细胞增多14例(平均每个高倍视野3.58个黑素细胞，正常部位2.27个黑素细胞)，20例棘层有黑素细胞(平均每个高倍视野3.52个黑素细胞)(图4)。(3)腺样型5例，基底层黑素细胞增多

3例(平均每个高倍视野3.23个黑素细胞，正常部位2.13个黑素细胞)(图5)。(4)激惹型5例，基底层黑素细胞增多4例(平均每个高倍视野3.65个黑素细胞，正常部位2.03个黑素细胞)，5例在棘层有黑素细胞(平均每个高倍视野4.08个黑素细胞)(图6)。(5)克隆型1例，棘层10个高倍视野中表皮巢内有38个黑素细胞(图7)。(6)扁平型1例，基底层10个高倍视野中32个黑素细胞(图8)，正常部位10个高倍视野中19个黑素细胞(平均每个高倍视野3.2个黑素细胞，正常部位1.9个黑素细胞)。

2.2 皮肤纤维瘤 20例皮肤纤维瘤中，16例(80%)基底层有黑素细胞增加(平均每个高倍视野3.78个黑素细胞，正常部位2.29个黑素细胞)，12例(60%)棘层有黑素细胞(平均每个高倍视野0.42个黑素细胞)(图9、10)。

图1 复合痣皮损中黑素细胞核呈褐黑色(ELPS法，×400) 图2 正常皮肤无黑素细胞处无染色(ELPS法，×400)图3 角化过度型脂溢性角化病基底层及棘层黑素细胞核呈褐黑色(ELPS法，×400) 图4 棘层肥厚型脂溢性角化病棘层黑素细胞核呈褐黑色(ELPS法，×400) 图5 腺样型脂溢性角化病基底层黑素细胞核呈褐黑色(ELPS法，×400) 图6 激惹型脂溢性角化病基底层及棘层黑素细胞核呈褐黑色(ELPS法，×400) 图7 克隆型脂溢性角化病表皮形成的巢中黑素细胞核呈褐黑色(ELPS法，×400) 图8 扁平型脂溢性角化病基底层黑素细胞核呈褐黑色(ELPS法，×400)

图9 皮肤纤维瘤基底层黑素细胞核呈褐黑色(ELPS法，×400)图10 皮肤纤维瘤棘层黑素细胞核呈褐黑色(ELPS法，×400)

3 讨论

Sox10是细胞核转录因子Sox(Sty－related HMB－box)超家族的一员，细胞核染色的免疫标记，是神经嵴衍生细胞中发现的一种转录因子，对黑素细胞的分化、成熟有重要作用，1在黑素瘤中的表达为97%～ 100%，2是标记黑素细胞肿瘤非常敏感的指标。3Sox10与S－100相比较，敏感性更好，特异性更强，4表皮内常见的胞浆透明细胞包括黑素细胞和朗格汉斯细胞，由于朗格汉斯细胞来源于骨髓，Sox10在其中不表达，而且Sox10为细胞核染色的指标，相比其他如S100、HMB－45等对细胞浆内黑素颗粒染色的抗体，容易辨认。5－7在背景中有大量色素，包括细胞浆都着色的情况下，不需要脱色，也可以确定黑素细胞，有利于表皮内黑素细胞的准确诊断。

脂溢性角化病切片进行Sox10单抗染色，结果表明，角化过度型、棘层肥厚型、激惹型在基底层和棘层均有不同程度的黑素细胞增多，腺样型在基底层有黑素细胞增多；克隆型的增多主要在表皮形成的巢内；扁平型在基底层有黑素细胞增多。有报道除了腺样

型以外，在激惹型，非激惹型，克隆型中均有黑素细胞的增殖，8与本次结果基本一致，但是银浸染色法主要染色黑素颗粒，即便染色阳性，也不一定就是黑素细胞，如果在有色素沉着的时候，预先脱色素，会破坏抗原的完整性，脱色不干净，阳性染色结果判断不明确，Sox10抗体为细胞核染色的抗体，在表皮内有色素沉着的情况下，也可以辨认黑素细胞，准确率高。

查阅文献，关于皮肤纤维瘤表皮内色素沉着的可能机理是:增殖的成纤维细胞样的细胞能分泌干细胞因子(SCF)及肝细胞生长因子(HGF)，这些因子对黑素细胞产生刺激，从而引起表皮内色素沉着。9有学者发现成纤维细胞样的细胞可以刺激黑素细胞增殖，该作用与SCF和HGF相关。10，11。本研究选用的标本表皮内均有色素，20例皮肤纤维瘤中，16例基底层有黑素细胞增多，12例棘层有黑素细胞。曾有关于皮肤纤维瘤伴有雀斑样黑素细胞增多的报道。12美国学者2005年发现了14例皮肤纤维瘤伴有黑素细胞增生性痣，其中雀斑样痣2例，皮内痣3例，复合痣8例，浅表扩散的原位恶性黑素瘤1例。13本研究中仅见到黑素细胞的增多，并无雀斑样痣、皮内痣和复合痣的改变，可能与我们选取标本数量少有关。

本研究预定位基底层及以上胞浆透明细胞对应的Sox10免疫组化中同一个细胞，确定是否为黑素细胞。但由于蜡块切片过程及实验操作的影响，实际操作中不能定位同一个细胞。由于Sox10为细胞核染色，Sox10阳性染色下，在基底层不仅可以看到黑褐色的核，也可以看到胞核周围透亮的晕；在脂溢性角化病中在棘层除腺样型外，其他型均有黑素细胞；在皮肤纤维瘤中，棘层也有黑素细胞增多，因此，基底层及以上胞浆透明的细胞部分为黑素细胞。

本次实验的创新之处，在于使用新的黑素细胞核特异性抗体，该抗体的特点:(1)特异性强，敏感性高，它针对神经嵴来源的细胞标记，朗格汉斯细胞是骨髓来源细胞，因此不会被标记，可以用在表皮内与朗格汉斯细胞区别；(2)由于该抗体特异性地染色黑素细胞的细胞核，可以在相邻的细胞，如角质形成细胞包膜或胞浆有着色或有色素沉着的情况下，不需脱色，也可以区分黑素细胞，避免了脱色操作对于抗原完整性的破坏，而且免疫组化操作方便，显色明显，辨认简单，准确，可以用于其它色素性疾病的研究中。

查阅国内相关文献，尚无关于脂溢性角化病及皮肤纤维瘤中黑素细胞增生情况的研究，本研究样本数量较少，具体的机制还需进一步扩大样本量及进行相关基础研究。

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(收稿:2014－09－21 修回:2014－12－05)

Detection of the proliferation of melanocytes in the patients w ith sebor rheic keratosis and dermatofibroma by immunohistochem istry w ith Sox10 antibody

YANG Huan，ZHANG Mei-hua，SU Zhong-lan.Department of Dermatology，the First Affiliated Hospital of Nanjing Medical University，Nanjing，210029

Objective:To determine the proliferation ofmelanocytes andwhether the transparent cytoplasm cells aremelanocytes or not in the patientswith seborrheic keratosis(SK)and dermatofibroma(DF).M ethods:The lesions from 52 patients with SK and 20 patientswith DF were treated with immunohistochemistry with Sox10 antibody.Results:Compared with the normal skin，the number ofmelanocytes was increased in the basal layer in 34 patientswith SK and in 16 patientswith DF.The number ofmelanocyteswas increased in spinous layer in 39 patientswith SK and 12 patientswith DF.Conclusion:There aremelanocytes proliferation in the lesions of patients with SK and DF and some of the transparent cytoplasm cells aremelanocytes.

seborrheic keratosis；dermatofibroma；melanocyte；immunohistochemistry

南京医科大学第一附属医院，南京，210029∗通信作者