汕头市性病门诊HPV感染分析

方小娴方 苗蔡翁义郭义龙杨启平

汕头市性病门诊HPV感染分析

方小娴1方 苗2蔡翁义3郭义龙1杨启平1

目的: 明确汕头地区性病门诊就诊者中HPV感染及其亚型的分布。方法: 采用PCR方法对性病门诊就诊者进行HPV基因分型检测。结果: 共检出HPV阳性1263例，阳性率为63.15%。HPV23种基因亚型均有检出 (高危型HPV 1083例，低危型HPV 1367例)，其中阳性率HPV6最高(47.90%)，HPV44最低(0.08%)，单项HPV亚型感染的有683例，其中515例为低危型。在HPV单一亚型感染中，肛周拭子的阳性率最高(78.95%)，宫颈拭子最低(49.30%)。结论: 性病门诊就诊者中HPV感染率高，主要感染类型为单一低危型HPV感染。

性病门诊； 人乳头瘤病毒； 基因分型

人乳头瘤病毒(human papilloma virus，HPV)是一种小DNA病毒，通常引起生殖器疣、子宫颈及肛门、生殖道癌。目前已完全鉴别到的HPV有80多种型，型与型之间的差异在于基因结构的不同，基因结构的差异决定其存在部位及可能导致的皮肤病变类型。1约有30多型HPV可以感染生殖道，根据被感染细胞是否能转变成癌的状况，分为高危及低危二组病毒。2目前国内关于HPV的分型研究主要集中在HPV6、11、16和18四个基因型，3对少见基因亚型的报道多只是针对CA患者或单一性别人群研究，对于性病门诊患者HPV基因型较全的流行病学调查鲜有报道，3－6为了解汕头地区性病门诊就诊者中HPV的感染及其亚型的分布情况，我们对2012年4月至2014年3月到我院性病门诊就诊患者HPV基因分型检测情况及患者资料进行统计分析，报道如下。

1 资料与方法

1.1 研究对象 收集2012年4月至2014年3月到我院性病门诊就诊患者，HPV基因分型检测情况及患者资料，进行统计分析，其中男1420例，女580例，年龄15～84岁。患者就诊原因主要为:(1)有疣状赘生物；(2)有不洁性行为；(3)患有其它性传播疾病；(4)配偶有HPV感染；(5)健康体检。就诊前半年内用过免疫调节剂及抗病毒药物患者除外。

1.2 标本采集 ①对于生殖器或肛周有疣状体增生，怀疑为CA的患者，用无菌生理盐水浸润的棉拭子，用力来回擦拭疣状组织表面3次，采集疣体表皮脱落细胞，或直接采集疣体组织，将取样后的样本置入无菌玻璃管，密闭送检。②对于丘疹、红斑、囊肿、结节溃疡等病变部位，用无菌生理盐水浸润的棉拭子，用力来回擦拭病变部位，获取病变部位表皮脱落细胞，将取样后棉拭子置入无菌玻璃管，密闭送检。③对于有可疑症状者，用无菌生理盐水浸润的棉拭子，反复擦拭包皮、龟头、阴茎、阴部等部位采集可疑部位脱落细胞，置入无菌玻璃管，密闭送检。④对于无症状就诊者，男性用无菌生理盐水浸润的棉拭子采集男性尿道分泌物、女性以窥阴器暴露宫颈，用无菌

棉拭子反复擦拭，取宫颈部位分泌物，置入无菌玻璃管，密闭送检。所有标本采集后立即送检，集中保存于－20℃冰箱待检。

1.3 试剂与仪器 杭州博日科技有限公司生产LIFE EXPRESS基因扩增仪；德国产 Eppendorf Centrifuge 5417CR高速冷冻离心机；韩国FNEPCR公司生产杂交孵育箱。人乳头瘤病毒基因分型检测试剂盒由深圳亚能生物技术有限公司提供。

1.4 实验方法 PCR－反向点杂交法(PCR－RDB)采用RCR体外扩增和DNA反向点杂交相结合的DNA芯片技术，利用HPV的基因特点设计特异引物，可以扩增出包含23种HPV基因型的目标片段，再将扩增产物与固定在膜条上的包括HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、83、MM4等18种高危型和HPV6、11、42、43、44等5种低危型在内的分型探针进行杂交，依据杂交信号的有无判断是否有这些HPV基因型的存在。实验过程包括HPVDNA的提取、PCR扩增、杂交、洗膜、显色等步骤，实验操作及结果判断严格按试剂盒要求进行。

1.5 统计学方法 利用Excel建立数据库进行数据处理及资料分析，应用卡方检验进行统计分析，P＜0.01有显著统计学差异，P＜0.05为有统计学意义，P＞0.05为无统计学差异。

2 结果

2.1 HPV检测结果 2000例患者共检出HPV阳性1263例，总检出率为63.15%，其中男性检出954例，感染率为67.18%(954/1420)，女性检出309例，检出率为53.28%(309/580)，男性HPV检出率明显高于女性，两者检出率有明显的统计学差异(χ2＝34.23，P＜0.01)。

检测的23种基因亚型均有检出，感染率最高的是低危基因亚型 HPV6，共检出 605例，感染率为30.25%，其次是 HPV11，共检出 390例，感染率为19.50%，感染率最低的为HPV44，仅检出1例，感染率为0.05%。高危基因亚型检出率最高的为HPV16，共检出162例，感染率为8.10%。

表1 1263例HPV阳性标本基因亚型的分布情况

2.2 HPV阳性标本基因亚型的分布 23种基因亚型中5种低危型HPV共检出1367例(多亚型感染者重复计数，如一亚型感染以1计，二亚型感染以2计，以此类推)，检出的亚型与阳性人数比为108.23%，18种高危型HPV共检出1083例(多亚型感染者重复计数，如一亚型感染以1计，二亚型感染以2计，以此类推)，检出的亚型与阳性人数比为85.74%，1263例HPV阳性标本基因亚型的分布情况，见表1。

2.3 HPV感染类型分布情况 1263例HPV阳性标本中单项HPV亚型感染的有683例，占所有阳性病例54.08%，单一亚型感染以低危型感染为主，683例标本中共有515例为低危型HPV单一亚型感染，占单一亚型感染的75.40%，其中HPV6单一感染最多，共291例，占515例低危单一亚型感染的56.50%，二项及以上多重HPV亚型感染有580例，占所有阳性病例的45.92%，二项及以上多重HPV亚型感染以高、低危HPV亚型混合感染为主，共检出462例高、低危HPV亚型混合感染病例，占多重HPV亚型感染的79.66%，单一HPV亚型感染明显高于二项及以上多重HPV亚型感染(两者检出率有明显的统计学差异，χ2＝16.80，P＜0.01)。二项以上多亚型感染最高在同一标本中检出11种亚型的多亚型感染，1263例HPV阳性标本感染类型情况见表2。1263例HPV阳性标本单一亚型感染与二项及以上多亚型感染分布情况，见表3。

表2 1263例HPV阳性标本感染类型情况

表3 1263例HPV阳性标本单一亚型感染与二项及以上多亚型感染分布情况

表4 2000例接受HPV检测患者各年龄段HPV感染情况

2.4 2000例接受HPV检测患者各年龄段HPV感染情况 2000例患者中20岁＞男≥60岁HPV感染率最高，两者感染率均为75.00%，女性50～59年龄段患者，感染率为81.82%，其次是≥60岁患者检出率最高，为66.67%，2000例接受HPV检测患者各年龄段HPV感染情况，见表4。

2.5 不同类型、不同部位标本HPV检出情况 采集标本中以肛周拭子的阳性率最高，为78.95%，其次是赘生物，阳性率为73.57%，阳性率最低的为宫颈拭子为49.30%，不同类型、部位标本HPV检出情况，见表5。

表5 不同类型、不同部位标本HPV检出情况

3 讨论

HPV的流行病学研究虽有较多报道，但因缺乏可检测大量基因型的方法学、目前多数地区尚未建立HPV基因型较全的流行病学数据库，该现状直接制约HPV感染的防治，3HPV不仅是常见的性传播疾病病原体，而且还与多种恶性肿瘤及癌前病变密切相关，7，8目前许多研究表明，持续性高危型HPV感染是发生宫颈癌的必要条件，9Madsen等10对37例阴茎癌标本研究发现高危型HPV阳性率为65%，尽管大多数HPV感染是良性的，但HPV持续感染会导致女性宫颈癌和男性肛门生殖器癌，因此了解HPV的感染状况对HPV相关疾病的防治具有重要意义。

本研究采用PCR体外扩增和DNA反向点杂交相结合的DNA芯片技术，可以一次性对23种临床常见HPV进行基因分型，其中包括HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、83、MM4等18种高危型和HPV6、11、42、43、44等5种低危型。

研究结果显示，2000例性病门诊受检者共检出HPV阳性1263例，总检出率为63.15%，其中男性检出954例，感染率为67.18%(954/1420)，高于薛耀华等4报道的2011年广东地区性病门诊男性患者HPV总阳性率43.7%及2010年庄文豪等11报道的福州地区性病门诊男性患者感染率，低于许媛等122011年报道的南充地区皮肤性病门诊及泌尿外科就诊患者79.3%感染率，与杜江等13报道的基本相符。女性检出309例，检出率为53.28%(309/580)，结果明显高于柯吴坚等16报道天津性病门诊女性患者HPV感染率及罗招云等14、何桂蓉等15报道的妇科门诊女性患者HPV感染率。因未能找到性病门诊患者HPV总的阳性率类似检测的报道，因而本文未能做出比较，但检测结果总的显示，性病门诊男女性别患者HPV的感染率明显高于妇科、计划生育门诊等人群HPV感染率，14－17提示性病门诊患者作为HPV感染与传播的高危人群应引起重视，本报道与同为性病门诊患者HPV阳性率比较的差异可能是因为受检人群、检测方法及地区的差别引起。

本次研究1263例阳性结果中，以低危型HPV6感染率最高为 47.90%，其次是 HPV11感染率为30.88%，再次为HPV43感染率为20.67%；高危型感染以HPV16最高，感染率为12.83%，其次是HPV52、HPV58，二者感染率分别为10.93%及7.28%，与刘继锋等3、薜耀华等4报道的杭州、广东地区性病门诊人乳头瘤病毒感染常见的基因亚型基本相符。1263例阳性标本中单一HPV亚型感染的有683例，占所有阳性病例54.08%，二项及以上多重HPV亚型感染580例，占所有阳性病例的45.92%，其中男性单一HPV亚型感染 508例，占男性 HPV阳性标本53.25%，二项及以上多重HPV亚型感染446例，占男性HPV阳性标本46.75%，与阮建波等18报道的单一型感染率相比略低，二项及以上多重HPV亚型感染略高于其报道结果，女性单一HPV亚型感染175例，占女性阳性病例56.63%二项及以上多重HPV亚型感染134例，占女性HPV阳性标本43.37%，与刘聪等19报道的相比，亦是单一型感染率略低，二项及以上多重HPV亚型感染略高。邹同安等20报道的女性单一型感染率则更高一些，男女性别患者虽跟其它报道略有差异，但所有的结果均显示，单一HPV亚型感染在HPV阳性标本中占有主要的比例。

618例单一HPV亚型感染中低危型感染515例，占单一亚型感染的83.33%，显示HPV单一型感染以低危型为主，508例男性单一亚型感染标本中，有98例为高危型感染，所占比例为19.29%，175例女性单一亚型感染标本中，有70例为高危型感染，所占比例为40.00%，女性高危型感染明显高于男性，两者比较有显著统计学差异(χ2＝31.02，P＜0.01)，显示在单一HPV亚型感染中女性高危型的感染占有更高比例。580例二项及以上多重HPV亚型感染标本中，高低危型混合感染病例有462例，所占比率为79.66%，单独低危亚型混合感染63例，所占比例为13.64%，单独高危亚型混合感染55例，所占比例为11.90%，高低危型混合感染明显高于单独低危亚型混合感染及单

独高危亚型混合感染(高低危型混合感染与两者比较有明显统计学差异，与单独低危亚型混合感染比较χ2＝562.88，P＜0.01，与单独高危亚型混合感染比较χ2＝578.02，P＜0.01)，以上结果显示二项及以上多重HPV亚型感染以高低危型混合感染为主，本次调查结果中男女在二项及以上多重HPV亚型感染中各类感染型别并无统计学的差异。

本次研究结果显示，男性各年龄段患者都有超过60%的感染率，其中又以小于20岁及大于等于60岁男性患者HPV感染率最高，这可能因小于20岁男性开始处于性活跃期，又多为非婚性生活，老年人机体免疫力下降抵抗力较差，而二者防病意识又较差，性交过程中不注重自我防护有关。而女性则以50～59岁年龄段患者感染率最高，感染率为81.82%，其次是大于等于60岁患者检出率高，为66.67%，这可能与50岁后的女性生殖道环境开始出现变化，生殖道抗病菌能力开始下降有关。总的来说，无论男女性，50岁后的受检者都有高于其它年龄段的HPV感染率，由于该年龄段人群机体免疫力开始下降，我们应重视对该年龄段人群性防护知识的宣传及HPV感染的筛查工作。

一项调查显示，通过缝隙杂交(slot)发现76.6%的男性尿道及19.8%的妇女宫颈中有HPV DNA，对50例就诊于STD门诊的高危患者的PCR检查发现，72%的妇女宫颈、外阴、阴道HPV阳性，63%的男性阴茎、阴囊及尿道阳性。1我们对于不同类型、部位标本HPV检出情况的调查结果与之基本相符，HPV感染具有很强的地域性，而且因为检测方法及受检人群不同而显示不同的感染率和感染类型，亚临床感染和潜伏感染率至少是临床HPV感染的3倍，如果重复检测数次，上升至3到5倍，9性病门诊患者做为HPV感染及传播的高危人群，重视对该人群HPV的检测及防治，有利于早期预防和消除HPV感染、减少HPV的传播及女性宫颈癌、男性肛门生殖器癌的发生。

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(收稿:2014－09－18 修回:2014－10－21)

Analysis of human papilloma virus infection in STD clinic attendees in Shantou

FANG Xiao-xian，FANGMiao，CAIWeng-yi，et al.Shantou Hospital of Skin Disease Prevention and Cure，Shantou，515041

Objective:To determine the prevalence and genotype of human papilloma virus(HPV)in Shantou.M ethods:The HPV in STD clinic attendeeswas detected by PCR.Resu lts:Out of2000 STD clinic attendees detected，HPV was positive in 1263 patients(63.15%).Twenty three HPV gene subtypeswere detected(1083 patients with high risk HPV，1367 patientswith low risk HPV)and the positivity rate of HPV6 was the highest(47.90%)and HPV44 was the lowest(0.08%).There were 683 patients(54.08%)with single HPV subtype infection and among them 515 patientswere infected with low risk HPV.The positivity rates of HPV were the highest(78.95%)in anus swabs and the lowest(49.30%)in cervical swabs.Conclusion: The HPV infection is high and the common type was low risk single HPV subtype in Shantou city.

outpatients of venereal diseases；human papilloma virus；gene subtype

2012年度汕头市医疗重点科技计划项目－汕府科(编号: 2012－113－1)

1汕头市皮肤性病防治院，广东汕头，515041 2汕头市中心医院，广东汕头，515041 3汕头市出入境检验检疫局，广东汕头，515041