加味芍药甘草汤治疗大鼠慢性萎缩性胃炎的实验研究

李静江

(北方学院附属第三医院内镜室，河北张家口 075000)

作为临床常见的慢性胃黏膜疾病，慢性萎缩性胃炎(CAG)具有病情复杂、病程长、反复发作的特点［1］。其主要病理改变，如:胃黏膜变薄、腺体萎缩等具有癌变倾向［2］。迄今为止，现代医学对 CAG的治疗效果尚不能令人满意。芍药甘草汤是中医经典方剂，我院采用加味芍药甘草汤方治疗CAG取得了一定的效果，本研究在中医传统理论的指导下，为进一步阐明其药效作用及其机制，观察了加味芍药甘草汤对慢性萎缩性胃炎模型大鼠的影响，现报道如下。

1 材料

1.1 药物 白芍(批号:20130701)、甘草(批号:20130728)、香附(批号:20130912)，购自张垣中药饮片有限公司，均由河北北方学院中医学院赵恒成教授鉴定为正品;三九胃泰冲剂(批号:1307024N)，广州三九集团生产;N-甲基-N＇-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)(批号:M1305)，日本东京株式会社;超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH-Px)、丙二醛(MDA)试剂盒由南京建成生物工程研究所提供，其余试剂均为国产分析纯，实验用水为去离子水。

1.2 动物 健康清洁级SD大鼠，体质量180～200 g，雌雄兼用，由河北北方学院实验动物中心提供，合格证号SCXK(京)2008-0006。

1.3 仪器 UV-2100紫外可见分光光度计，尤尼柯(上海)仪器有限公司;FSH-2组织匀浆机，金坛市天竟实验仪器厂。

2 方法

2.1 三九胃泰阳性供试液的制备 取三九胃泰冲剂适量，溶于适量蒸馏水中，制备为每毫升含三九胃泰360 mg的阳性供试液。

2.2 加味芍药甘草汤供试液的制备 按照处方比例(15∶31∶15)分别称取芍药、甘草、香附适量，混合后，粉碎为粗粉，加水适量，于50℃超声辅助提取，每次30 min，提取2次，经浓缩后，制备为浓度分别为每毫升含药材 274.5、549、1 098 mg的供试液。

2.3 MNNG 饮用液的配制［3］称取MNNG适量，溶于去离子水，配制成浓度为12.5 g·L-1的贮备液，将容量瓶用锡纸包裹后，置于4℃冰箱避光保存，备用。整个配制过程均需避光操作。

2.4 慢性萎缩性胃炎模型的制备 造模方法参照文献［4］。将MNNG贮备液于当日稀释成浓度为180 mg·L-1的溶液，代替饮用水饲喂造模大鼠，共8周。均普通饲料饲养。

2.5 实验分组及给药方法 将大鼠随机分为 6组，每组20只，分别是正常对照组、慢性萎缩性胃炎模型组、三九胃泰组、加味芍药甘草汤高剂量组、中剂量组、低剂量组。于造模第9周开始，停止饮用MNNG溶液，各组大鼠开始灌胃给药，每日1次，每次10 mL·kg-1体质量。加味芍药甘草汤各组每天按加味芍药甘草汤给高剂量组10.98 g· kg-1体质量、中剂量组5.49 g· kg-1体质量、低剂量组2.745 g· kg-1给药，三九胃泰组按每天 3.6 g·kg-1体质量给药，正常对照组和模型组大鼠均灌服生理盐水，每日1次，每次10 mL·kg-1体质量，连续90 d。

2.6 观察指标及检测方法

2.6.1 一般状态观察 给药91 d，观察并比较各组大鼠被毛、活动情况、食量及形体。

2.6.2 胃黏膜损伤情况观察 给药91 d，每组取1只大鼠，参照文献［5-7］，摘除鼠胃，制备病理切片，观察胃黏膜萎缩情况。

2.6.3 胃黏膜血流量、SOD、GSH-PX 和 MDA 的测定 给药91 d，每组取9只大鼠，参照文献［8-9］，用中性红清除法测胃黏膜血流量。其余大鼠禁食16 h，乌拉坦麻醉，常规解剖鼠胃，洗净胃内容物，蒸馏水冲洗2次，滤纸吸干水分。小心刮取1/3全胃黏膜，称重，加入适量蒸馏水匀浆，制成胃黏膜匀浆。GSH-Px、SOD和MDA的测定按南京建成生物研究所提供的试剂盒说明书步骤进行［10-11］。

2.7 统计学方法 使用SPSS17.0统计软件进行试验资料分析。观测数据主要为计量资料，以(±s)表示，均通过正态性检验。多组间比较采用单因素方差分析，两两比较则为HSD-q检验。检验水准 α =0.05。

3 结果

3.1 一般状态观察 模型组大鼠被毛蓬松，形体瘦小，活动减少，行动迟缓，食量少。三九胃泰组及加味芍药甘草汤低剂量组大鼠被毛比较洁净，略微散乱、体重稍低。加味芍药甘草汤高、中剂量组大鼠活动灵活，食量较大，体质量中等。

3.2 病理观察结果 正常对照组，大鼠胃黏膜上皮细胞排列整齐，胃黏膜完整，腺体排列规则;模型组，胃黏膜萎缩，胃窦黏膜腺体排列序乱，腺细胞和腺体减少，且体积缩小，黏膜肌层增厚;三九胃泰组、加味芍药甘草汤高、中剂量组，均可见胃黏膜厚度适中，腺体排列紧密、规则，腺体萎缩显著好转。病理学图片见图1。

3.3 各组大鼠胃黏膜血流量的测定结果 各组大鼠胃黏膜血流量的测定结果见表1。多组间整体分析(单因素方差分析)有显著性统计学意义。两两比较并结合数据来看:与正常对照组比较，模型组大鼠胃黏膜血流量显著减少(P＜0.01)。与模型组大鼠比较，三九胃泰组、加味芍药甘草汤低、中、高剂量组大鼠胃黏膜血流量均显著增加(P＜0.05，P ＜0.01)，其中，加味芍药甘草汤中、高剂量组大鼠胃黏膜血流量与正常对照组大鼠差异无显著性(P＞0.05)。与三九胃泰组比较，加味芍药甘草汤中、高剂量组大鼠胃黏膜血流量均显著增加(P＜0.05)。

表1 大鼠胃黏膜血流量比较(±s，n=9)

表1 大鼠胃黏膜血流量比较(±s，n=9)

注:与正常对照组比较△△P＜0.01;与模型照组比较▲P＜0.05，▲▲P ＜0.01;与三九胃泰组比较#P ＜0.05。

组别 剂量/mg·kg-1·d-1胃黏膜血流量/mL·kg-1·h -1正常对照组 —25.69 ±5.24模型组 — 10.36±1.43△△三九胃泰组 3 600 17.40 ±4.67▲加味芍药甘草汤低剂量组 2 745 14.57 ±2.40▲加味芍药甘草汤中剂量组 5 490 23.31 ±5.10▲▲#加味芍药甘草汤高剂量组 10 980 25.12 ±4.61▲▲#

3.4 各组大鼠胃黏膜组织 GSH-PX、SOD活性及MDA含量测定结果 各组大鼠胃黏膜组织 GSHPx、SOD活性及MDA含量测定结果见表2。多组间单因素方差分析为差异显著。再经两两组间比较知:与正常对照组比较，模型组大鼠胃黏膜组织SOD、GSH-Px活性降低，MDA含量水平升高，差异有显著性(P＜0.05，P＜0.01)。与模型对照组比较，加味芍药甘草汤低、中、高剂量组大鼠胃黏膜中SOD、GSH-Px活性显著升高(P ＜0.05，P ＜0.01)，MDA含量显著降低(P＜0.05，P＜0.01)。与三九胃泰组比较，加味芍药甘草汤中、高剂量组大鼠溃疡组织中SOD、GSH-Px活性显著升高(P＜0.05)，MDA含量显著降低(P＜0.05)。

表2 各组大鼠胃黏膜组织 GSH-Px、SOD、MDA含量(±s，n=10)

表2 各组大鼠胃黏膜组织 GSH-Px、SOD、MDA含量(±s，n=10)

注:与正常对照组比较△P ＜0.05，△△P ＜0.01;与模型照组比较▲P ＜0.05，▲▲P ＜0.01;与三九胃泰组比较#P ＜0.05。

组别 剂量/mg·kg-1·d-1 GSP-Px/mg·g prot-1 SOD/U·mL-1 MDA/mmol·L -1正常对照组 —56.39 ±6.22 369.44 ±10.26 4.36 ±0.86模型组 — 32.15 ±4.27△ 253.18±8.13△△ 8.63 ±1.53△△三九胃泰组 3600 45.24±5.71▲ 336.65±1.34▲ 5.72±0.97▲加味芍药甘草汤低剂量组 2745 46.33±5.26▲ 332.90±9.35▲ 2.54±0.25▲加味芍药甘草汤中剂量组 5490 55.20±6.20▲▲ 372.51±10.62▲▲ 3.7±0.38▲▲加味芍药甘草汤高剂量组 10980 55.78 ±7.25▲▲# 382.35 ±9.23▲▲# 3.88 ±0.25▲▲#

4 讨论

慢性萎缩性胃炎属于中医“胃脘痛”、“胃痞”等范畴。本病大多病程较长，病机往往虚实夹杂。本实验用加味芍药甘草汤进行干预和治疗，取得良好的效果。

从本实验结果可知，加味芍药甘草汤可通过逆转胃黏膜萎缩，达到修复胃黏膜的目的。加味芍药甘草汤由白芍、甘草、香附组成。《内经》曰:“肝苦急、急食甘以缓之。”芍药酸苦微寒，泻肝火、和脾血;甘草甘平，缓急补中;香附是血中气药，行气止痛，三药相合则能扶土抑木，故用治阴血不足、肝脾失调之胃痛具有较好疗效。CAG的形成过程与脂质过氧化作用关系密切［12-13］。本实验结果表明，加味芍药甘草汤能显著降低胃黏膜内MDA含量，提高SOD、GSH-Px活力，从而减弱脂质过氧化，起到保护胃黏膜及修复损伤胃黏膜的作用。CAG的发生与GMBF的减少有密切关系［5］，胃黏膜良好的血液循环，能够保证胃黏膜获得必要的营养和去除有害代谢产物，从而以利于胃黏膜保持其完整性。本实验表明，加味芍药甘草汤可显著增加CAG大鼠GMBF，使其恢复到接近正常水平。

本实验研究了加味芍药甘草汤对慢性萎缩性胃炎模型大鼠的治疗作用，证实其治疗慢性萎缩性胃炎的机制与其抗脂质过氧化作用及改善胃黏膜血流量作用有关，为加味芍药甘草汤在临床上的应用提供了理论和实验基础。

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