CD133、Ki—67在胃癌的表达及临床病理意义

刘娜

[摘要] 目的 探讨CD133、Ki-67在胃癌的表达及临床病理意义。 方法 随机选取本院2008年5月～2012年9月的首发胃癌患者300例，所有患者进行免疫组化检测，对胃癌组织中CD133、Ki-67的阳性表达及病理特征的关系进行分析，观察患者的术后生存时间。 结果 300例胃癌中，CD133阳性的患者184例，阳性率为61.33%。Ki-67阳性的患者179例，阳性率为59.67%。CD133和Ki-67的表达随着肿瘤增大、分化降低、浸润加深、淋巴结转移数目增多、TNM分期递增，出现腹腔及远处转移等因素而逐渐增高（P<0.05）。Cox多因素术后生存分析结果显示， 胃癌术后生存时间的独立预后因子为患者年龄、 肿瘤大小、组织学类型、 CD133、Ki-67、腹腔及远处转移。 结论 CD133和Ki-67联合检测可作为胃癌的临床评价肿瘤生物学行为及判断预后的有用指标之一。

[关键词] 胃癌；CD133；Ki-67；表达；临床病理

[中图分类号] R735.2 [文献标识码] B [文章编号] 2095-0616（2015）20-157-04

The expression of CD133 and Ki-67 in gastric cancer and its clinical significance

LIU Na

Department of Pathology， Yilan County People's Hospital， Yilan 154800， China

[Abstract] Objective To investigate the The expression of CD133 and Ki-67 in gastric cancer and its clinical significance. Methods 86 cases of patients with diabetic retinopathy from May 2008- September 2012 were selected as the observation group， 98 cases of diabetic patients without retinopathy were selected as the control group， 80 cases of healthy people were selected as normal group . All subjects were resting fasting urine microalbumin（UmAlb） and glycosylated hemoglobin （HbA1C）， using ABC- enzyme-linked immunosorbent assay and analysis of peripheral blood IGF-1 and TGF-β1 expression and among the three groups level situation. Results In 300 cases of gastric cancer， 184 cases of CD133 positive patients， positive rate of Ki-67was 61.33%. Positive patients in 179 cases， the positive rate was 59.67%. The expression of CD133 and Ki-67 increased with the increase of tumor， differentiation， invasion， lymph node metastasis， TNM stage， P<0.05. Cox， and survival analysis showed that the independent prognostic factors were age， tumor size， histological type， Ki-67， CD133， abdominal and distant metastasis. Conclusion The combined detection of CD133 and Ki-67 can be used as a useful index for clinical evaluation of tumor biological behavior and prognosis of gastric cancer.

[Key words] Gastric cancer； CD133； Ki-67； Expression； Clinical pathology

胃癌（gastric cancer，GC）作为临床常见的消化道恶性肿瘤，发病率及死亡率皆均高。患者一旦发现，就已经是胃癌晚期，错过了最佳治疗时机，严重影响患者的生活及生存时间，给患者造成极大的痛苦[1-2]。近年来研究发现，肿瘤的复发转移与肿瘤干细胞的生存有着重要的关系[3-4]。研究发现及时对患者肿瘤干细胞相关标志物进行相关检测，可以预测恶性肿瘤的术后复发及转移[5]。本研究主要探讨增殖细胞核抗原（Kit-67），CD133在在胃癌的表达及临床病理意义，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

随机选取2008年5月～2012年9月来本院就诊的首发胃癌患者300例，所有患者术前未经过放化疗或免疫治疗；无远处转移现象。男152例，女148例；年龄35～70岁，平均（58.4±12.3）岁。按照2003年国际抗癌联盟修订的胃癌临床病理TNM分期， Ⅰ期56例， Ⅱ期87例， Ⅲ期110例， Ⅳ期47例； 组织学类型， 管状腺癌（中高分化腺癌）75例， 黏液腺癌32例， 低分化腺癌183例， 印戒细胞癌35例， 其他类型11例。endprint

1.2 构建组织芯片

在所有胃癌患者癌旁正常组织的石蜡标本上采集组织芯， 直径选择1.0mm， 孔间距设置为1.2 mm， 排列成9行×8列共72点微阵列， 每2点代表1例患者组织， 共制成11块组织芯片。

表1 CD133、Ki-67在胃癌组织中的阳性表达与病理特征的关系

临床病理因素 CD133 x2 P Ki-67 x2 P

+ - + -

年龄（岁） 1.029 >0.05 1.057 >0.05

n≤40 42 30 41 39

40

n>65 46 29 34 20

肿瘤大小 6.579 <0.05 6.894 <0.05

d<4 cm 51 39 43 41

4 cm≤d<8 cm 94 56 89 60

d≥8 cm 39 21 47 20

组织学分级 7.159 <0.05 7.596 <0.05

Ⅰ级 9 11 8 13

Ⅱ级 25 30 27 31

Ⅲ级 150 75 144 77

浸润深度 10.297 <0.05 10.567 <0.05

达黏膜下层 5 7 6 8

达浆膜下层 31 28 32 26

出浆膜层 121 60 116 64

邻近器官 27 21 25 23

淋巴结受累 12.040 <0.05 11.982 <0.05

LN = 0 32 30 31 28

LN = 1～6 35 29 36 31

LN = 7～15 74 38 72 42

LN>15 43 19 45 20

TNM分期

Ⅰ期

25

23 9.206 <0.05

21

22 9.673 <0.05

Ⅱ期

Ⅲ期 29

99 25

44 27

107 24

52

Ⅳ期 31 24 29 23

腹腔及远处转移

无转移

170

113 13.204 <0.05

167

116 14.203 <0.05

转移 14 3 12 5

5年生存率

生存

41

39 11.239 <0.05

40

41 12.357 <0.05

死亡 143 77 144 80

1.3 试剂

兔抗人CD133多克隆抗体购自北京博奥森生物技术有限公司、 鼠抗人Ki-67 mAb购自美国Zymed公司、 使用北京中杉金桥生物技术有限公司的枸橼酸抗原修复液（pH6.0），DAB显色液及PBS也购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.4 免疫组织化学染色方法

SP法（Labelled streptavidim biotln） 。（1）切片脱蜡至水。（2）0.3%H2O2甲醇处理切片10～20min。（3）水洗。（4）抗原修复。（5）PBS洗3次，1min/次。（6）加入血清孵育10min。（7）摔去血清，加入一抗孵育30～60min。（8）PBS洗3次，每次2min。加入二抗，孵育20min。（9）PBS洗3次，每次2min。（10）加入SP复合物孵育20～30min。（11）PBS洗3次，每次2min。（12）DAB-H2O2孵育5～10min。（13）PBS洗，水洗。（14）Harris苏木素染核5～10min。（15）水洗，分化，蓝化，蒸馏水漂洗，苏木精复染细胞核，中性树胶封片。

1.5 结果判断

DAB阳性染色为棕（黄）色。高倍视野下计数4个不同位置，大约200个癌细胞，如果阳性细胞数大于10%则记为阳性，小于等于10%则记为阴性。

表2 术后生存时间多因素分析

变量 回归系数 标准误 x2 自由度 P 危险比

年龄 0 .76 0.112 15.367 1 0.000 1.611

组织学分级 0.045 0.016 0.679 1 0.879 1.044

组织学类型 0.228 0.079 8.569 1 0.005 1.264

浸润深度 0.207 0.173 1.513 1 0.221 1.327

淋巴结受累 0.241 0.142 2.989 1 0.876 1.271

远处及腹腔转移

TNM分期 0.971

-0.129 0.315

0.192 9.654

0.537 1

1 0.002

0.547 2.641

0.871

肿瘤大小 0.558 0.129 19.635 1 0.000 1.746

CD133 0.587 0.147 15.672 1 0.000 1.824

Ki-67 0.697 0.148 22.035 1 0.000 1.998

1.6 观察指标

观察CD133、Ki-67在胃癌组织中的阳性表达与病理特征的关系，及术后生存时间多因素分析。

1.7 统计学方法

采用 统计学软件SPSS 17.0进行分析。CD133和Ki-67在胃癌表达的相关性采用Spearman等级资料相关分析；计数资料采用x2检验；对生存率影响的单因素分析采用Log-rank检验； 多因素分析采用Cox比例风险模型，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 CD133、Ki-67在胃癌组织中的阳性表达

300例胃癌中CD133阳性184例， 阳性率为61.33%。 Ki-67阳性179例，阳性率为59.67%。CD133、Ki-67在胃癌组织中的阳性表达图片见图1、2。

图1 胃癌组织ki-67阳性表达（SP×200）

图2 胃癌组织CD133阳性表达（SP×200）

2.2 CD133、Ki-67在胃癌组织中的阳性表达与病理特征的关系

表1显示，CD133和Ki-67的表达随分化降低、肿瘤增大、浸润加深、 淋巴结转移数目增多、 TNM分期递增， 出现腹腔及远处转移而呈现逐渐增高的趋势（P<0.05）。见表1。

2.3 术后生存时间多因素分析

Cox多因素术后生存分析结果显示， 胃癌术后生存时间的独立预后因子为患者年龄、 肿瘤大小、组织学类型、 CD133、Ki-67、腹腔及远处转移。见表2。

3 讨论

胃癌（gastric carcinoma）是目前世界上最为常见的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率均很高。我国胃癌发病率和死亡率高居世界第二位，成为严重威胁着我国人民的身体健康以及生命安全的恶性肿瘤之一[6-8]。胃癌患者的早期诊断率不高，就诊时已发展到晚期，失去了根治性手术切除的机会，患者的预后时间明显不如较早发现和手术者[9-10]。

增殖细胞核抗原Ki-67是一种与细胞周期相关的蛋白质。Ki-67抗原是目前多种恶性肿瘤尤其是乳腺癌研究中的热门生物指标，可以通过Ki-67抗原的检测，Ki-67了解恶性肿瘤的细胞增殖活性。肿瘤增殖Ki67表达范围覆盖除G0 期以外的各增殖周期细胞。研究结果提示PCNA 和Ki67 均可较好地用于检测乳腺癌组织中的增殖细胞，二者基本可以互为代替使用。由于Ki67 在G0 期以外各增殖周期均有表达，更具可用性。两者具有一定的互补性。Ki-67在低分化腺癌组织中的表达较在中高分化腺癌组织的表达明显升高，表明Ki67 染色阳性程度与组织学分级的相关性。表明Ki67表达与乳腺癌发生、发展有关，是一个不良预后因素，对乳腺癌的诊断治疗及预后评价有重要的参考价值 [11-13]。Ki-67的表达控制着细胞的增殖周期，故可利用Ki-67单抗标记指数来检测肿瘤的增殖细胞率，反映细胞的增殖能力。因此Ki-67被认为是一个判断细胞凋亡和增殖的有价值的标记物，和肿瘤的分化程度、复发、转移和患者临床预后有密切的关系[14-15]。

CD133是一种分子量为120kD的跨膜蛋白， CD133抗原为5次跨膜（5-transmembrane，5-TM）糖蛋白。CD133抗原可被3种CD133抗体识别：克隆AC133、293C3和AC141。AC133直接与CD133/；1糖基化抗原表位结合，可用于从外周血、骨髓、脐带血及其他组织中分析和分选CD133+细胞。目前CD133主要用于各种恶性肿瘤癌干细胞的研究。CD133是较早应用于癌干细胞研究的生物标志物之一[16-18]。

本研究中，300例胃癌中，CD133阳性的患者184例， 阳性率为61.33%. Ki-67阳性的患者179例，阳性率为59.67%。CD133和Ki-67的表达随着肿瘤增大、分化降低、浸润加深、淋巴结转移数目增多、TNM分期递增，出现腹腔及远处转移等因素而逐渐增高（P<0.05）。Cox多因素术后生存分析结果显示， 胃癌术后生存时间的独立预后因子为患者年龄、 肿瘤大小、组织学类型、 CD133、Ki-67、腹腔及远处转移。 综上所述， CD133和Ki-67联合检测可作为胃癌的临床评价肿瘤生物学行为及判断预后的有用指标之一。

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（收稿日期：2015-05-28）endprint