液相微萃取HPLC测定消癌平口服液中绿原酸含量

张 敏，李海茹

(1.空军太原干休所卫生所，山西 太原 030006;2.山西省肿瘤医院药学部，山西 太原030013)

液相微萃取HPLC测定消癌平口服液中绿原酸含量

张 敏1，李海茹2

(1.空军太原干休所卫生所，山西 太原 030006;2.山西省肿瘤医院药学部，山西 太原030013)

目的 研究消癌平口服液中绿原酸的定量方法。方法 采用高效液相色谱法。色谱柱:Eclipse XDBC18柱(150 mm×4.6 mm×5μm);流动相:乙腈-0.4%磷酸溶液(8∶92);检测波长:327 nm。结果 绿原酸的线性范围:1.60～160μg(r=0.999 5，n=5)，平均加样回收率99.3%，RSD=2.4%。结论 本法简便、灵敏、准确，可用于消癌平口服液的质量控制。

消癌平口服液;绿原酸;液相微萃取

消癌平口服液系由乌骨藤制成的单方制剂，具有抗癌、消炎、平喘之功效。用于食道癌、胃癌、肺癌，对恶性淋巴癌、大肠癌、宫颈癌、白血病等多种恶性肿瘤亦有疗效。绿原酸是乌骨藤药材及其制剂中的主要活性成分之一，具有抗诱变、抗菌、抗病毒等作用。目前，制剂中绿原酸的含量测定的样品前处理方法有超生提取法［1］、水提醇沉法［2］、离子液体提取法等［3］，这些方法手工操作繁冗，劳动强度大，甚至需要使用大量有机溶剂。液相微萃取法是基于有机溶剂、分散剂和水的三元混合溶剂体系的样品前处理方法，具有溶解性能好、极性范围大、稳定性好等特点［4］。本研究首次建立了液相微萃取高效液相色谱法测定乌骨藤制剂中绿原酸的含量，方法简单快捷，为该药材及其制剂的质量研究提供了一种新方法。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

1200 series高效液相色谱仪(Agilent公司)。

氯仿、四氢呋喃(分析纯，天津市光复精细化工研究所)，乙腈(色谱纯，天津市四友精细化学品有限公司)，其他试剂均为分析纯。实验用水为二次蒸馏水。绿原酸对照品由中国生物样品检定所提供(批号110753-200212)。

消癌平口服液(河南中杰药业有限公司)，10 mL×12支，生产批号:20130720、20130721、20130722。

1.2 色谱条件

Eclipse XDB-C18柱(150 mm×4.6 mm×5μm，Agilent公司)，流动相:乙腈-0.4%磷酸溶液(8∶92)。流速:1.0 mL/min。检测波长为327 nm，柱温: 30℃。

1.3 对照品溶液的配置

精密称取绿原酸对照品2.0、6.0、10、15、20 mg，置25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得80μg/mL、240μg/mL、400μg/mL、600μg/mL和800μg/mL的对照品溶液，并对80μg/mL的对照品溶液继续稀释得到16μg/mL及8μg/mL的对照品溶液。

1.4 供试品溶液的制备

在5 mL具塞尖底离心管中，精密量取口服溶液1 mL，0.5 mL(100 mmol/L HCl)溶液，用二次蒸馏水稀释至5 mL，即为分析溶液。加入50μL氯仿萃取剂和300μL四氢呋喃，充分振荡后形成了水/分散剂/萃取剂形成的白色云雾状的混浊体系。以5 000 r/min离心，在离心管底部形成萃取剂液滴聚集相。用微量进样器抽取聚集相液滴20μL，置于5 mL烧杯中(挥干氯仿)，用适量甲醇溶解，取20μL进行高效液相色谱分析。

2 结果

2.1 液相微萃取条件的优化

本实验对液相微萃取的萃取剂与分散剂的种类和体积、萃取时间、离心时间和转速、样品溶液的酸度等影响因素进行了优化，结果为:萃取剂氯仿50μL，分散剂四氢呋喃300μL，HCl浓度10 mmol/L。表明萃取剂种类和体积、分散剂种类和体积以及样品溶液的酸度对实验结果影响比较大。

2.2 线性范围

按照1.4项下的样品处理方法，加入1.3项下的对照品溶液1 mL，测定色谱峰面积，以色谱峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，绘制标准曲线，回归方程为Y=2 026.3X+0.372 6 r=0.999 5，结果表明进样量在1.60～160μg范围内，线性关系良好。

2.3 精密度试验

精密吸取本品1 mL，按1.4项下方法制成供试品溶液，精密吸取20μL，连续进样5次，测得色谱峰面积平均值为12 238.9，RSD为0.43%。

2.4 稳定性试验

取1.4项下的供试品溶液，精密吸取10μL，按0、2、4、8、16 h分别进样，记录色谱峰面积。试验结果表明，供试品溶液制备后16 h内测定，色谱峰面积无明显变化，在此时间内待测组分化学性质稳定。

2.5 重复性试验

取批号为20130720的样品5份，按照1.4项下方法测定，平均含量为32μg/mL，RSD为1.5%。

2.6 阴性干扰试验

取处方中除去乌骨藤外的辅料，按制备工艺及供试品溶液制备方法，制成阴性对照液，依含量测定方法测定，结果阴性色谱图中，在与绿原酸对照品相应保留时间附近无干扰，见图1(b)。

2.7 回收率试验

按加样回收率方法试验，取已知准确含量的样品(平均含量32μg/mL)5支，从每支样品中分别取0.5 mL，再分别取绿原酸对照品溶液(40μg/mL) 0.5 mL，按1.4项下方法制备供试品溶液，测定峰面积，结果平均回收率为99.3%，RSD=2.4%(n=5)，测定结果见表1。

表1 回收率实验结果

2.8 样品的测定

取本品样品3批，按1.4项方法制成供试品溶液，并照2.2项色谱条件测定，结果三批样品RSD分别为1.8%、1.2%、1.5%，色谱图见图1。

图1 绿原酸对照(a)，阴性对照(b)和样品(c)溶液色谱图

3 讨论

液相微萃取法与其他萃取方式相比，具有操作简单、环境友好、快速、灵敏、富集倍数高等特点，特别是对常规前处理方法难以分析的少量、微量活性成分或有害成分的分析具有重要的意义。液相微萃取联合高效液相色谱法用于测定绿原酸含量，灵敏度高，专属性强，操作简便，可以用于消癌平口服液的质量评价，并且为口服溶液的测定提供了一种更加简便、有效的样品前处理方法。

［1］ 史礼貌，解成喜.超声提取-反相高效液相色谱法测定新疆大蓟中绿原酸和芦丁的含量［J］.分析科学学报，2012，28(3):401-404.

［2］ 舒孝顺，卿婉华，许凯扬，等.红腺忍冬花中绿原酸提取工艺研究［J］.天然产物研究与开发，2013，25(10): 1448-1451.

［3］ 王新红，李雪梅，蔡晨，等.离子液体提取山楂绿原酸的工艺优化［J］.农业工程学报，2014，30(10):270-276.

［4］ Tian Jie，Chen Xuan，Bai Xiaohong.Comparison of dispersive liquid-liquid microextraction based on organic solvent and ionic liquid combined with high-performance liquid chromatography for the analysis of emodin and itsmetabolites in urine samples［J］.J Sep Sci，2012，35(1):145-152.

The determ ination of chlorogenic acid content in Xiao'aiping oral liquid by liquid phasem icroextraction HPLC

ZHANG Min1，LIHairu2
(1.The Air Force Taiyuan sanatorium，Taiyuan，Shanxi Province，030006;2.Shanxi Province Tumor Hospital Pharmacy Department，Taiyuan，Shanxi Province，030013，China)

Objective To study the quantitativemethod for chlorogenic acid in Xiao'aiping oral liquid.Methods High performance liquid chromatography(HPLC)were employed.Chromatographic column was Eclipse XDB-C18 column(150mm×4.6mm×5μm)，mobile phasewas acetonitrile-0.4%phosphoric acid solution(8∶92);and detection wavelength was327 nm.Results The linear range of chlorogenic acid covered from 1.60μg to 160μg(r= 0.999 5，n=5)，and the average sample recovery rate was 99.3%，RSD=2.4%.Conclusion Thismethod is simple，sensitive，accurate，and can be for Xiao'aiping oral liquid quality control.

Xiao'aiping oral liquid;chlorogenic acid;the liquid phasemicroextraction

R284.2

A

1673-2995(2015)01-0015-03

2014-10-03)

张 敏(1974－)，男(汉族)，主治医师，本科.