小儿咳喘灵颗粒中金银花的质量分析

郑艳青， 马 斐， 张 静， 刘 静， 任菲菲

（山东省德州市食品药品检验检测中心，山东德州253000）

小儿咳喘灵颗粒中金银花的质量分析

郑艳青， 马 斐， 张 静， 刘 静， 任菲菲

（山东省德州市食品药品检验检测中心，山东德州253000）

目的 对26个厂家生产的小儿咳喘灵颗粒 （麻黄、金银花、苦杏仁等）中的金银花质量进行系统的研究。方法 采用薄层色谱法对样品中的金银花进行定性鉴别；采用HPLC法测定样品中金银花的绿原酸含有量；采用HPLCELSD法测定样品中灰毡毛忍冬皂苷乙的含有量。结果 26批样品中有12批检出灰毡毛忍冬皂苷乙，表明存在原料中掺有山银花的现象。结论 测定小儿咳喘灵颗粒中的绿原酸和灰毡毛忍冬皂苷乙，可有助于监控其质量。

小儿咳喘灵颗粒；金银花；绿原酸；灰毡毛忍冬皂苷乙；山银花；薄层色谱法；HPLC法；HPLC-ELSD法

小儿咳喘灵颗粒是在张仲景 《伤寒论》经典方 “麻杏石甘汤”的基础上，采用科学的提取方法精制而成［1］，由麻黄、金银花、苦杏仁、板蓝根、石膏、甘草、瓜蒌等七味药材组成［2］，具有宣肺、清热，止咳、祛痰、平喘之功效，用于上呼吸道感染，气管炎，肺炎，咳嗽等［2］，广泛用于小儿伤风咳嗽、支气管炎、哮喘、肺炎、百日咳等咳嗽病症，副作用较小，目前未见不良反应报道。小儿咳喘灵颗粒生产企业共有154家，批准文号总数154个［3］，有每袋装10 g、2 g、1 g三种规格，标准收载于 《卫生部药品标准》中药成方制剂第四册，部分企业执行国家食品药品监督管理局试行标准。部颁标准鉴别项为麻黄和甘草的化学反应［4］，专属性差，且无成分定量测定项，不能够保证产品质量，而部分企业执行的国家食品药品监督管理局试行标准在检测项目上各不相同，在检测方法上差距也较大，难以全面保证药品质量。一般认为，金银花的抗菌有效成分为绿原酸和异绿原

酸，而且常以绿原酸含有量高低来评价金银花的质量优劣［5］，具有 “中药之中的青霉素” 之称［6］。本实验对依据法定标准检验合格的26个厂家生产的小儿咳喘灵颗粒中的金银花质量进行系统的研究，为标准的提高提供一定的依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Mettler XS105 DU电子天平；Waters e2695高效液相色谱仪，包括Xbridge C18色谱柱、Waters2489紫外检测器；Agilen1200高效液相色谱仪，包括Kromasil C18色谱柱、Varian 380-LC蒸发光散射检测器。

1.2 试药 金银花对照药材 （中国药品生物制品检定所，批号 121060-200805）。绿原酸对照品（中国食品药品检定研究院，批号110753-201314，含有量测定用，纯度以96.6%计）；灰毡毛忍冬皂苷乙对照品 （中国食品药品检定研究院，批号111814-201303，含有量测定用，纯度以 92.8%计）。甲醇、乙腈为色谱纯；乙酸丁酯、甲酸、磷酸、醋酸为分析纯；水为超纯水。小儿咳喘灵颗粒共26批样品，均为山东省17地市市售品种，来自26个不同生产企业。

2 方法与结果

2.1 薄层色谱鉴别 26批样品各取2 g，研细，加甲醇20 mL，超声处理30 min，滤过，滤液浓缩至5 mL，作为供试品溶液。另取金银花对照药材0.2 g，加甲醇5 mL，超声处理30 min，滤过，滤液作为对照药材溶液。再取绿原酸对照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。按照薄层色谱法 （附录ⅥB）试验，吸取供试品溶液10μL、对照品溶液10μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以乙酸丁酯-甲酸-水 （7∶2.5∶2.5）的上层溶液为展开剂展开，取出，晾干，置紫外光灯 （365 nm）下检视［7］。结果见图1。

图1 不同生产企业样品Fig.1 Sam p les from differentm anufacturers

2.2 绿原酸成分测定［8］

2.2.1 色谱条件 C18色谱柱 （250 mm×4.6 mm×5μm）；流动相为乙腈-水溶液 （用磷酸调pH至3.0，15∶85）；体积流量1.0 mL/min；柱温30℃；检测波长327 nm；进样量20μL。对照品、样品及阴性对照的色谱图见图2。

图2 绿原酸对照品、样品及阴性对照HPLC色谱图Fig.2 HPLC chromatograms of chlorogenic acid，sample and negative samp le

2.2.2 溶液的制备

2.2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取绿原酸对照品9.92 mg（纯度96.6%），置100 m L棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，制成每1 mL含95.83μg的贮备液 （10℃以下保存）。

2.2.2.2 供试品溶液的制备 取本品适量，研细，精密称取约1 g，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，称定质量，超声处理 （功率300 W、频率40 kHz）30 min，放冷，再称定质量，50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液1 mL，置10 mL棕色量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2.3 方法学考察［9］

2.2.3.1 线性关系与检出限 精密量取绿原酸对照品贮备液1 mL，置25 mL棕色量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，精密吸取 1.0、5.0、10.0、20.0、50.0μL，在色谱条件下依次进样。以峰面积为纵坐标，对照品进样量 （μg）为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程Y=2 898 949X-6 996，r=1.000 0，线性范围为0.003 8～0.191 7 μg。按信噪比3∶1计，检出限为1.86 ng。

2.2.3.2 精密度试验 精密吸取同一对照品溶液10μL，在 “2.2.1”项色谱条件下，连续进样6次，记录峰面积。计算RSD为0.87%，表明仪器精密度良好。

2.2.3.3 重复性试验 取同一批次样品6份，按“2.2.2.2”项下方法制备供试品溶液，在“2.2.1”项色谱条件下进样，测定绿原酸峰面积。结果RSD值为2.1%。

2.2.3.4 稳定性试验 取同一供试品溶液，分别在制备后0、2、4、8、12、24 h进行测定。结果绿原酸峰面积的RSD值为0.92%，表明样品溶液在24 h内稳定。

2.2.3.5 加样回收率试验 精密称取含有量已知的样品0.5 g共6份，分别加入相同量的质量浓度为0.212 4 mg/mL的对照品溶液。按“2.2.2.2”项下方法制备供试品溶液，在 “2.2.1”项色谱条件下进样，结果见表1。

2.2.4 样品测定 取26批小儿咳喘灵颗粒样品，精密称定，分别按 “2.2.2.2”项下方法制备供试品溶液，在 “2.2.1”项色谱条件下进行测定，计算，结果见表2。

表1 加样回收率试验结果Tab.1 Results of recovery tests

2.3 灰毡毛忍冬皂苷乙成分测定［10］

2.3.1 色谱条件 Agilent C18色谱柱（250 mm× 4.6 mm×5μm）；流动相为乙腈-0.4%醋酸溶液，梯度洗脱 （0～10 min，11.5%～15%乙腈；10～12 min，15%～29%乙腈；12～18 min，29%～33%乙腈；18～30 min，33%～45%乙腈）；载气体积流量1.6 mL/min；柱温30℃；蒸发光散射检测器检测；雾化器温度35℃；蒸发器40℃。对照品及样品的色谱图见图3。

表2 小儿咳喘灵颗粒含有量测定 （n=6）Tab.2 Con tent determ ination of Xiaoer Kechuanling G ranules（n=6）

图3 灰毡毛忍冬皂苷乙对照品、样品及阴性对照HPLC色谱图Fig.3 HPLC chromatograms ofmacranthoidin B，samples，and negative sample

2.3.2 溶液的制备

2.3.2.1 对照品溶液的制备 取灰毡毛忍冬皂苷乙对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每1 mL含灰毡毛忍冬皂苷乙0.6 mg的溶液。

2.3.2.2 供试品溶液的制备 精密称取本品粉末（过四号筛）约0.5 g，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，称定质量，超声处理 （功率300 W，频率40 kHz）40 min，放冷，再称定质量，50%甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.3.3 样品测定 取26批小儿咳喘灵颗粒样品，精密称定，分别按 “2.3.2.2”项下方法制备供试品溶液，在 “2.3.1”项色谱条件下进行测定，计算，结果见表2。

3 讨论

本实验采用薄层色谱方法，对26批小儿咳喘灵颗粒进行金银花及主成分绿原酸的鉴别，结果22批样品主斑点可见，4批肉眼看不到主斑点，仅说明4个厂家金银花的投料存在问题。因山银花Lonicerae Flos也含有绿原酸，薄层色谱的检验结果无法区分另22批样品中使用的是金银花还是山银花。还比较了以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水（7∶3∶1∶1.2）为展开剂，1%三氯化铁溶液与1%铁氰化钾溶液 （1∶1）混合液［11］为显色剂的实验方法，发现更简便，所考察的绿原酸斑点更加清晰。

本实验采用HPLC方法，对26批小儿咳喘灵颗粒进行金银花主成分绿原酸的考察，由于绿原酸不稳定，遇光易分解，因此在实验中使用棕色瓶，尽量避光操作［12］。根据测定结果，企业间差异较大，说明药材质量差异较大或者部分企业未按规定处方量投料。分析结果与金银花薄层色谱所得到的评价结论相吻合。

本实验采用HPLC-ELSD方法，对26批小儿咳喘灵颗粒进行山银花中特有成分灰毡毛忍冬皂苷乙筛查，考察企业是否存在以山银花替代金银花投料现象。结果，26批样品中有12批检出灰毡毛忍冬皂苷乙，说明12批产品存在山银花或者是掺有山银花投料现象。

小儿咳喘灵颗粒现行质量标准有多个，大部分企业执行的部颁质量标准太低，基本不能控制药品质量。国家食品药品监督管理局试行标准参差不齐，检验项目和限度各不相同，无法有效的控制小儿咳喘灵颗粒的质量。金银花和山银花来源不同，所含成分也有较大区别，使用中不能相互替代［13］，虽然 《中国药典》2005年版已将金银花品种来源规范，但实际运用中还没有完全统一规范［14］，建议将现行的小儿咳喘灵颗粒质量标准进行整合统一，提高后收入 《中国药典》，切实可行的来保证小儿咳喘灵颗粒的安全、有效。

［1］ 倪友香，赵伏梅.小儿咳喘灵颗粒质量标准的研究［J］.医学信息，2014，27（3）：133-134.

［2］ 卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准：中药成方制剂第四册［S］.1991：19.

［3］ 国家食品药品监督管理总局［EB/OL］.http：//www. sda.gov.cn/WS01/CL0001/

［4］ 洪美华，卓小萍，何世柯，等.小儿咳喘灵颗粒中盐酸麻黄碱含量测定的2种HPLC法比较［J］.中国药房，2008，

19（27）：2122-2124.

［5］ 周建玉.金银花中化学成分分析研究进展［J］.天津药学，2009，21（5）：60-61.

［6］ 王 萌，张永清.金银花药性及其相关问题考证［J］.山东中医杂志，2007，26（2）：122-124.

［7］ YBZ08702004，小儿咳喘灵冲剂［S］.

［8］ YBZ01852005，小儿咳喘灵颗粒［S］.

［9］ 中国药品检验操作规范：2010年版［S］.2010.

［10］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典：2010年版一部［S］.北京：中国医药科技出版社，2010：28.

［11］ 王永慧，孙荣进，叶 方.金银花中绿原酸和木犀草苷的薄层色谱鉴别方法研究［J］.中国医药导报，2012，9（11）：136-137

［12］ 谢 峥，杨宗芳，谭忠军，等.HPLC法测定小儿咳喘灵颗粒中绿原酸的含量［J］.中国药师，2005，8（9）：730-732.

［13］ 肖宏华，甄 诚，刘开玉.薄层色谱法鉴别双黄连口服液中金银花成分的改进［J］.首都医药，2014，1（2）：57-58.

［14］ 薛红卫，周超凡.金银花和山银花的合理使用［J］.中国新药杂志，2011，20（22）：2211-2213.

Quality analysis of Lonicerae Japonicae Flos in Xiaoer Kechuanling Granules

ZHENG Yan-qing， MA Fei， ZHANG Jing， LIU Jing， REN Fei-fei
（Dezhou Control and Testing Center for Food and Drug，Dezhou 253OOO，China）

AIM To systematically evaluate the quality of Lonicerae Japonicae Flos in Xiaoer Kechuanling Granules（Lonicerae Japonicae Flos，Ephedrae Herba，Radix Isatidis seu Baphicacanthi，etc.）collected from twenty six manufacturers.METHODS The qualitative test for L.Japonicae was conducted by TLC，the content of chlorogenic acid in Xiaoerkechuanling Granuleswas determined by HPLC，and the content ofmacranthoidin B was accomplished by HPLC-ELSD.RESULTS The factofmacranthoidin B existence in twelve outof twenty-six batcheswas indicative of Lonicerae Flos adulteration in raw materials.CONCLUSION Detecting chlorogenic acid and macranthoidin B in Xiaoer Kechuanling Granules can help to monitor the quality of the agent.

Xiaoer Kechuanling Granules；Lonicerae Japonicae Flos；chlorogenic acid；macranthoidin B；Lonicerae Flos；TLC；HPLC；HPLC-ELSD

R927.2

A

1001-1528（2015）12-2660-05

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.12.019

2015-03-20

郑艳青 （1973—），女，副主任中药师，从事中药及中成药的检验。Tel：（0534）2236050，E-mail：zhengqujin@126.com