角蛋白裂解法治疗亚临床阶段人乳头瘤病毒感染的临床试验研究

刘永浩??王玉玲??姚勇??肖凤华

[摘要] 目的 探讨角蛋白裂解法治疗亚临床阶段人乳头瘤病毒感染的临床效果。 方法 自行配置药物治疗亚临床阶段人乳头瘤病毒感染尖锐湿疣患者31例，涂擦整个外阴表皮和肛周表皮，每周记录皮损情况，并记录是否有病理复发情况。同时在皮肤的第二个增殖周期是做HPV-DNA-PCR检查，并记录检查的结果。 结果 31例患者在用药过程中，在一个皮肤增殖周期内有约20例复发，在第一个皮肤增殖周期中未见有疣体长出皮肤表面。HPV-DNA-PCR、阴性率为35.5%。第二个周期是为74.2%。第三个周期时为80.6%。仍然约有20%的病理查出HPV-DNA阳性，但是未见有疣体长出。在检验出的DNA分型中其中HPV6型阳性率最高，HPV6，HPV11，HPV42，HPV18，HPV52，HPV56这六种DNA分型出现约95%的概率。 结论 本法治疗亚临床阶段人乳头瘤病毒感染效果良好，副作用小。

[关键词] 角蛋白；角蛋白相关中间丝聚合蛋白；人乳头瘤病毒；过氧二酰胺；乙酸；甘油

[中图分类号] R285 [文献标识码] B [文章编号] 2095-0616（2015）17-181-04

Clinical experimental study of keratin lysis method treatment of human papillomavirus infection duiring subclinical stage

LIU Yonghao WANG Yuling YAO Yong XIAO Fenghua

Linyi Traditional Chinese Medicine Hospital，Linyi 276002，China

[Abstract] Objective To study the clinical effect of keratin lysis method in the treatment of human papillomavirus infection duiring subclinical stage. Methods 31 patients with condyloma acuminatum，who were infected by human papillomavirus duiring subclinical stage，were treated with drugs made by oneself，were embrocate on the whole vulvar epithelium and perianal epithelium.To record the skin lesions situation every week，and to record the situation of pathological recurrence or not.At the same time to make HPV-DNA-PCR inspection on skin during the second proliferation cycle，and to record examination results. Results The process of medication on the 31 patients，there were approximately 20 cases recurrence in every skin proliferation cycle.The HPV-DNA-PCR negative rate was 35.5% during the first skin proliferation cycle without wart outgrown on skin surface，which was 74.2% during the second cycle，and which was 80.6% during the third cycle with 20% of positive pathological without wart outgrown.The highest positive rate was HPV6 of all the docimastic DNA typing，the 95% probability appearance on the six type of DNA were HPV6，HPV11，HPV42，HPV18，HPV52，HPV56. Conclusion Keratin lysis method in the treatment of human papillomavirus infection duiring subclinical stage has better effect and little side effect.

[Key words] Keratin；Intermediate filament protein；Human papillomavirus；Peracetic diamide；Acetic acid；Glycerol

尖锐湿疣（condyloma acuminatum，CA）主要发生于生殖器部位的表皮，具有相当高的发病率和复发率。皮肤经过摩擦和揉搓后表面的角质层会出现微裂痕，HPV病毒颗粒经过表皮的微裂痕侵染正常的组织，最终定居在真皮的层棘和基底层[1]，在此复制繁衍并改变了正常皮肤组织的结构，感染的皮肤病灶离散型分布，有的能融合成一个整体形成一个区域。在做醋酸白检验时，病变的区域太过于小，由于局部的组织的角质层吸光能力不明显，变色不明显。因此感染初期和没有明显的疣体生长出来时的HPV病变是不能通过手术清除。经过长时间进化，HPV病毒可以已经进化出免疫逃逸机制，使得病毒得以在人体生存[2]。经过HPV-DNA-PCR检验阳性的患者，未发现疣体就可以认为处于亚临床阶段。利用HPV 感染过的表皮角蛋白结构与正常相关性蛋白表达之间的对于特定小分子化学物质的吸收特性的差异，为治疗和药物的研发提供了一种新的途径。endprint

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2014年3月～2015年2月在我院门诊就诊的患者31例，所有患者均为人乳头瘤病毒第一次发病患者。患者能明确提供从发现肉瘤生长之前能回溯追查有野游史的病例。到我院就诊前没有经过其他的治疗。选取外观形态能确定为典型尖锐湿疣的病例。患者没有皮损和其他明显的皮肤病变。排除患者为过敏性体质。患者的年龄不限。研究对象均为男性。疣体生长的部位选在生长在阴茎上，肛门周围病变的患者。患者经过离子刀行外科手术治疗。大约经过一周至半个月，创口愈合后。收集皮肤表面脱落皮屑做HPV-DNA-PCR检验仍为阳性的患者。确定为有亚临床感染继续存在。

1.2 药物配置

药物为自行配置，药物的主要成分为乙酸、乙酸钠（别名醋酸钠，本实验中因为需要用醋酸白反应的机理，考虑到研究的需要统一用乙酸钠标注）、甘油（1，2，3-三羟基丙醇）、过氧碳酰胺。以上药物的纯度均为分析纯药物试剂，严格把关确保严格进行无菌操作。

1.3 方法

1.3.1 患者确定为亚临床患者标准和方法 选取门诊就诊的在外阴部肉眼明显识别能确定为乳头瘤病毒感染的男性患者，年龄21～69岁。排除有皮肤过敏和其他皮肤病的患者作为施治对象。对外阴皮肤表面有疣体生长的局部皮肤消毒局麻后，把疣体切除。嘱咐患者自行用碘伏消毒外阴皮肤表面每天一次。连续用大约十天左右。待皮肤伤口愈合后。用沾有0.9%氯化钠盐水的棉棒，在患部的局部皮肤表面擦拭。取到表面脱落细胞后做HPV-DNA-PCR检验。检查结果为阳性的患者可以认为为亚临床感染患者。

1.3.2 患者局部皮肤表面的处理 用无菌用水清洗干净外阴部。用75%的酒精棉球擦拭干净，晾干。

1.3.3 药物的配制 用甘油作溶剂配制5%的过氧碳酰胺溶液，加入少量乙酸钠，随后按质量比加入36%乙酸溶液，配制成乙酸浓度为3%的溶液，再加入少量的焦磷酸钠。用搅拌机搅拌均匀，形成乳化液待用。

1.3.4 药物的应用方法 局部皮肤表面处理好后，用棉棒沾取配置好的溶液，均匀的擦整个外阴表皮和肛周表皮。以擦拭完后皮肤表面不粘稠为度。涂完后自然晾干不用包覆。每天涂用两次，早晚各一次。以30天为1个治疗周期。总共记录三个周期。

1.3.5 试验对象的用药方法 根据皮肤表层细胞的生长周期约为28天设计用药周期。以7d为1个观察周期。每周记录皮损情况。并记录是否有病理复发情况。考虑到自身病毒颗粒的扩散情况，在皮肤的第二个增殖周期是做HPV-DNA-PCR检查。并记录检查的结果。如果HPV-DNA-PCR为阴性不在作为下一个治疗周期的研究对象。病例的发病部位选在阴茎、阴囊、腹股沟和肛周。

1.3.6 效果的记录和确定的标准 药物浓度选在3%～8%没有明显的皮损，记录DNA分型，用药时间及皮损出现情况，病情变化。

2 结果

31例研究对象在用药过程中，第一个用药周期内部分患者表皮有微痒和灼热感，主要发生在阴囊和腹股沟部位。在阴阜区和阴茎涂药的皮肤区域上，皮损表现为变淡白和微红，轻微的有些水肿。在一个皮肤增殖周期内有约20例复发。复发的疣体外观呈现萎缩状（如图1）。说明药物影响到了病理细胞的增殖。在第一个皮肤增殖周期中没见有疣体长出皮肤表面。HPV-DNA-PCR 阴性率为35.5%（11/31）。第二个周期是为74.2%（23/31）。第三个周期时为80.6%（25/31）。仍然约有20%的病理查出HPV-DNA阳性。但是未见有疣体长出。在检验出的DNA分型中其中HPV6型阳性率最高，HPV6，HPV11，HPV42，HPV18，HPV52，HPV56这六种DNA分型出现约95%的概率。见表1。

3 讨论

人类乳头瘤病毒是一类感染表皮和黏膜鳞状

表1 治疗效果及确定的标准

HPV分型 用药周期

（d） 皮损症状出现 皮损体征 治疗期间复发和中断用药 最终PCR结果

6，11，16，18，42，52，56 1～7 感觉微痒，灼热感 皮肤淡白娇嫩 复发13例。疣体生长不旺盛 不做PCR考核周期

8～14 未见明显皮损 皮肤淡白娇嫩 复发6例。疣体生长不旺盛 不做PCR考核周期

15～30 未见明显皮损 皮肤淡白娇嫩 复发1例。疣体明显萎缩状增生 不做PCR考核周期

31～50 未见明显皮损 皮肤呈淡红色 肉眼未见疣体生长 HPV-DNA-PCR 阳20例，阴11例

18，42 ，52 50～70 未见明显皮损 皮肤呈淡红色 肉眼未见疣体生长 HPV-DNA-PCR 阳8例，阴12例

18，52 70～90 未见明显皮损 皮肤呈淡红色 肉眼未见疣体生长 HPV-DNA-PCR 阳6例，阴2例

a

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图1 复发的疣体外观

上皮的小DNA病毒，具有高度种属特异性和特殊嗜上皮性[3-4]。表皮角质形成细胞和黏膜鳞状上皮细胞的是其天然宿主[5]。人表皮的角质层位于表皮的最外层，由10～20层扁平的角化细胞组成[6]，无细胞核或者其他细胞器结构，只残余有角蛋白丝和基质。角质层细胞内含有直径约为6～8nm的a-角蛋白丝及镶嵌在无定型基质中的纤维蛋白中，新生细胞向上移动产生坚韧的纤维角蛋白[7]。表皮层组织每层的蛋白质种类有差异。基底细胞主要表达具有增殖特异性角蛋白cK5，cK14，进入棘层后分化特异性角蛋白cK1，cK10的表达不断增加[8]。角蛋白相关蛋白filaggrin的表达出现于分化特异性角蛋白cK1，cK10表达之后，主要位于颗粒层细胞中，它与cK1，cK10均为角质形成细胞分化的标志[9]。cK16在正常表皮中不表达，是角质形成细胞过度增殖的标志[10]。病毒进入细胞后，仅在一定分化程度的上皮细胞内增殖，感染表皮细胞中有增殖能力的基底细胞，并严格跟随角质形成细胞的角化过程而分化成熟。在被感染的角质形成细胞中进行病毒早期和晚期基因的转录翻译，组装形成病毒颗粒。被HPV感染的病理组织中角蛋白cK10的表达缺失[11]，和正常的皮肤组织相对比cK14 在颗粒层中仍有较强的表达并且分布不均匀，提示病理细胞合成蛋白质的功能受到了影响[8]。角质层增厚角化不全细胞有轻度异型性棘层细胞明显增生，上皮钉突增厚延长在上皮层中上部可见多少不等的散在或成群的挖空细胞，核大而且大小不等.可见双核[11]。在生殖器和肛周以 HPV6、11、16、18为常见[12]。HPV16、18、31、33、35-39、45、51-52、56、58常可导致皮肤癌变[13-15]。endprint

乳头瘤病毒感染皮肤后破坏了皮肤的完整性，亚临床阶段的感染，难以准确的定位，不能通过外科手术的办法清除。被感染的表皮细胞，细胞器架构被破坏，细胞间质桥联角蛋白变性。角蛋白的组分和三维螺旋折叠结构与正常表皮的角蛋白明显不同。极性小分子物质渗入表皮后，药物渗入的剂量和速度的差异，表皮可见光谱吸收不均匀有显色反应。本研究依据这一机制合成强渗透性和生物学毒性的药物过氧二酰胺，在配制成乙酸甘油溶液。乙酸浸润皮肤后，过氧二酰胺润胀病变组织。过氧基裂解被感染区域的角蛋白和病变细胞器。灭活病毒微粒和被感染的真皮层细胞，阻止了潜伏期病毒的复制传染。

本研究方法采用裂解法治疗，本身患病皮肤缺失有效组织成分的表皮发生了错构弱化了正常表皮的屏障作用，使得带电的小分子化学物质有了进入深层组织的通道。由于大量负电荷引起强烈的分子推斥力导致蛋白质分子的溶胀和裂解，部分埋藏在蛋白质分子内部的羧基、酚羟基和巯基离子化，这些离子化基团趋向于将自己暴露在水环境中，因此造成角蛋白多肽链的散开[16]。过氧乙酸渗入角蛋白分子内部，打开角蛋白二硫键和氢键的作用力增大，拆分的分子增多，渗入病变组织中的药物就会提高，同样带有细胞毒性的其他带电小分子也可以进入，用过氧碳酰胺和乙酸分子协同应用时药物可以比正常组织高的多浓度的渗入病变组织中裂解病变的角蛋白，溶胶细胞间质脂质膜。同时还能灭活细胞器和细胞核，达到治疗的效果。

综上，本法治疗亚临床阶段人乳头瘤病毒感染尖锐湿疣患者31例，临床上治疗有效率为100%，转阴率能达到80%，效果良好，副作用小。

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（收稿日期：2015-06-03）endprint