贵州某猪场感染大肠杆菌的诊治

崔治龙 韦国渠 崔珍华 杜典策 冉隆淮

（1，贵州省沿河土家族自治县草地中心 565300;2，贵州大学动物科学学院 550025;3，贵州省三都县周覃镇农业服务中心 558000）

贵州某猪场感染大肠杆菌的诊治

崔治龙1韦国渠2,3*崔珍华1杜典策1冉隆淮1

（1，贵州省沿河土家族自治县草地中心 565300;2，贵州大学动物科学学院 550025;3，贵州省三都县周覃镇农业服务中心 558000）

为查清某猪场发病断奶仔猪死亡原因，采用流行病学调查、临床症状观察、病理解剖诊断和生化鉴定等方法，对该猪场发病猪进行诊断调查，确诊为该猪场断奶仔猪发病死亡的原因为猪大肠杆菌感染所致。

猪场;大肠杆菌;混合感染;诊断

大肠埃希氏菌（Escherichiacoli）通常简称为大肠杆菌，主要寄居于人和动物的肠道内，该菌在自然界分布广泛，属于条件致病菌[1]。猪大肠杆菌病是由致病性大肠杆菌引起的猪急性传染病，临床上表现为肠炎、肠毒症等多种症状。根据猪的生长日龄与病原菌的血清型差异，该疾病可分为仔猪黄痢、仔猪白痢和猪水肿病三种。这三种疾病造成新生仔猪大批死亡或生长发育不良，成为严重影响规模化猪厂发展的障碍之一[2]。

2015年3月，贵州某猪场送检断奶仔猪10头，其中4头死亡，6头病危，一天后其余病危的6头相继死亡。为了解该猪场疫病的感染状况，本试验对该猪场送检的发病仔猪进行流行病学调查、临床症状观察、解剖病理诊断和细菌学检测，确诊该病为猪大肠菌感染。

1 材料与方法

1.1 材料

病料：某规模化猪场送检的10头发病断奶仔猪。

实验动物：20～40g小白鼠（购自贵阳医学院）。

1.2 主要试剂

普通肉汤培养基、鲜血琼脂培养基（购自上海阳光生物技术有限公司）；MuellerHinton（M-H）琼脂培养基（购自北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司）；革兰氏染液（购自上海科兴生物科技有限公司）；显微镜（购自日本OLYMPUS公司）；其他培养基、微量生化鉴定管和药敏纸片（购自杭州微生物试剂有限公司）；琼脂糖购自Biowest公司。

1.3 检测方法

1.3.1 流行病学调查

采用询问送检者与电话咨询了解猪场发病状况，并记录结果。

1.3.2 临床症状及剖检病理变化

对该猪场送检的10头发病仔猪进行临床观察及剖检病理变化观察，并记录试验结果。观察10头发病猪临床症状，再全部解剖观察病理变化，并比较其异同点，此时应注意无菌操作。用灼烧过的手术刀（无菌操作）切开胸腹腔，首先吸取积液或以棉签拭取胸膜及腹膜粘附物，然后再取内脏器官，如淋巴结、心脏、肝脏、脾脏、肺脏和肾脏等。

1.3.3 细菌分离培养

无菌条件下采集病变明显的肾脏、肝脏、肺脏、肠系膜淋巴结等组织病料器官及心包、胸腔、关节积液直接接种普通琼脂平板、血液琼脂平板、麦康凯平板培养基上，置于含有5%CO2的37℃恒温培养箱中培养24～48h后，观察其不同培养基中被检细菌的生长状态和菌落特征，然后挑取单个细菌进行纯培养。同时对细菌进行涂片，革兰氏染色后置于光学显微镜下观察。

1.3.4 生化特性鉴定

取分离菌株的纯培养物分别接种于添加有0.07%NAD的微量生化鉴定管中，置于含有5%CO2的37℃恒温培养箱中培养24～48h，观察结果。

1.3.5 药敏实验

药敏实验采用世界卫生组织推荐的标准纸片琼脂扩散法，即（K-B法）操作。用接种环挑取1～2环纯培养的分离菌，接种于含5%脱纤绵羊血的M-H琼脂培养基上，涂匀，选取12种常用药敏纸片均匀地贴到培养基上，置于含有5%CO2的37℃恒温培养箱中培养24～48h后观察结果，测定抑菌圈直径。

1.3.6 动物致病性实验

取血液琼脂平板上培养的24h菌落制成细菌悬液（CFU为5×108个∕ml），分别取0.5ml采取腹腔注射接种在生长条件相同的10只小鼠，对照组10只注射等量生理盐水。24h后观察小白鼠发病及死亡情况，并剖检小白鼠，无菌取其心脏、肝脏、脾脏和肺脏等组织作细菌分离鉴定。

2 结果与分析

2.1 发病情况

该猪场发病突然，精神沉郁，食欲不振，喘气，被毛粗乱。发病后猪场曾使用青霉素、链霉素等抗生素进行治疗，病猪体温有所降低，但发病后2～3d死亡。

2.2 临床症状及剖检病理变化检测

2.2.1 临床症状

病猪主要症状是脱水和下痢，黄痢仔猪排黄色稀便，内含凝乳小块。严重的精神沉郁，不吃奶，迅速脱水、昏迷而死亡。急性病例不见症状而昏迷死亡。白痢仔猪排出乳白色浆液状、糊状粪便。

2.2.2 剖检病理变化

喉头、扁桃体充血、皮下组织水肿；肠系膜淋巴结和下颌淋巴结充血、肿大，间有出血；小肠系膜发黄、有的肠套叠；肠粘膜充血、出血，肠壁变薄、松弛而失去弹性，肠绒毛上皮正常或萎缩、伴有炎症；肝脏边缘呈紫黑色、表面有许多散在颗粒状大小的白色坏死斑点；肾脏表面有针尖大小出血点，肾上腺切面散在坏死点。

2.3 细菌分离培养及形态观察

无菌采集取病死猪的引肝、肺、肾、脾脏、肠系膜淋巴结病料接种在普通琼脂平板、血液琼脂平板麦康凯，SS琼脂平板培养基上，置于含有5%CO2的37℃恒温培养箱中培养24～48h后。淋巴结接种在普通营养琼脂上形成直径约2mm的圆形、光滑、隆起、湿润、半透明淡灰色的菌落。在麦康凯培养基上生长成较大的呈光滑、湿润、圆形、表而隆起的粉红色菌落，部分致病性菌株在血液琼脂平板上呈β溶血环。用接种棒挑取可疑菌落进行革兰氏染色制成涂片，通过涂片镜检为革兰氏阴性菌，两极浓染，两端钝圆的短小杆菌，偶有2～3个菌体相连，无芽孢（附图），符合大肠杆菌形态特性。

附图 猪大肠杆菌染色后观察结果（10×100）

2.4 生化特性鉴定

将细菌纯培养物接种于微量生化鉴定管中，置于含有5%CO2的37℃恒温培养箱中培养24～48h后，结果（见表1）。经生化实验鉴定分析该分离株对硫化氢、苯丙氨酸、葡萄糖酸盐、枸橼酸盐、尿素、半固体、赖氨酸、鸟氨酸、氨基酸对照、棉子糖、测金盏花醇、木胶糖12种发酵管反应呈阳性，对葡磷胨水、山梨醇2种发酵管反应呈阴性。其他生化实验中，吲哚实验阳性，VP实验阴性，枸橼酸酸盐利用实验呈阴性，七叶苷水解实验呈阳性，均符合大肠杆菌生化特性。

表1 大肠杆菌生化特性鉴定结果

2.5 药敏实验

药敏实验结果（见表2）。根据NCCLS[3]的标准判定其耐药性，结果表明，从该猪场分离的病原菌对头孢唑啉、阿莫西林、庆大霉素和利福平高敏，对链霉素和妥布霉素中敏，而对氧氟沙星、诺氟沙星和四环素已经产生了耐药性。

表2 大肠杆菌药敏实验结果

2.6 动物致病性试验

接种了分离菌的小白鼠均在24～48h内死亡，对照组没有死亡。无菌取死亡小白鼠的心脏、肝脏、淋巴结和脾脏等组织接种在鲜血琼脂培养基上，结果经分离提纯后鉴定，与以上特性相一致，确诊为有大肠杆菌的感染。

3 讨论与分析

通过流行病学调查、临床症状观察、剖检病理诊断，初步诊断该猪场断奶仔猪存在细菌感染。取发病猪的淋巴结、肾脏、脾脏、肺脏和肝脏等组织，通过进行细菌分离培养、生化特性、培养特性及动物致病性试验鉴定确诊该细菌为大肠杆菌。药敏实验表明，该规模化猪场感染的大肠杆菌对氧氟沙星、诺氟沙星和四环素已经产生了较高的耐药性，这可能是由于该猪场管理欠缺，用药不规范，疗程不当，长期使用同一类药物或长期在饲料、饮水中加入预防性用药导致，这应引起高度重视；对链霉素和妥布霉素中敏；而对头孢唑啉、阿莫西林、庆大霉素和利福平高敏，这可能是因为头孢唑啉、阿莫西林、庆大霉素和利福平在该猪场并未广泛使用，因此该猪场在治疗时可先把头孢唑啉、阿莫西林、庆大霉素和利福平作为治疗仔猪大肠杆菌病的首选药物。对于混合或多重继发感染的情况，应当根据实验室检测和药敏实验结果，对症下药，避免乱用药而造成的仔猪的死亡。

综合分析以上结果，建议该猪场加强饲养管理并合理投喂抗生素避免继发感染，同时将可疑猪和病猪全部隔离饲养，病死猪及污染物则彻底焚烧或深埋，对污染的圈舍和四周环境进行严格消毒，患病猪群则隔离治疗并带猪消毒，对新购进猪要进行严格的隔离、检疫。目前很多规模化猪场都存在综合防治措施不完善，饲养管理水平有限，预防意识淡薄等为疾病的发生和传播提供了条件，通过改善动物饲养环境，增加机体免疫力，是防治大肠杆菌病的基础[3]。因此，猪场只有建立健全兽医卫生防疫制度，搞好日常卫生管理工作，严格引种，坚持自繁自养，全进全出，合理使用预防药物等综合防治措施，才能最大限度的减少疫病的发生。

[1]李振贵.猪伪狂犬病的防控建议[J].中国畜牧兽医文摘,2013(12):97-98.

[2]杨鲜银.猪大肠杆菌病的诊断[J].中国畜牧兽医文摘,2013(7):134.

[3]NCCL S.Performance standards for Antimicrobial Susceptibility Testing:Twentieth informational Supplement[J].NCCL S,Wayne,Pennsylvania,2010,30(1)：86-88.

崔治龙（1969-），男，兽医师，主要从事基层动物疫病防控工作。

⋆通讯作者：韦国渠（1986-），男，在职硕士研究生，主要从事动物传染病防控及农业科技推广。